涂美娟
- 作品数：13 被引量：14H指数：2
- 供职机构：浙江大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省“钱江人才计划”“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学环境科学与工程更多>>
- OCT1及CYP3A4介导的吡咯里西啶生物碱肝脏转运及毒性研究
- 吡咯里西啶生物碱（Pyrrolizidine alkaloids, PAs）广泛分布于紫草科、菊科、豆科植物中。PAs可能是目前对人和动物最重要的天然毒性成分,近50%的PAs为毒性化合物,其毒性表现为肝毒性、遗传毒性和...
- 涂美娟
- 关键词：吡咯里西啶生物碱肝脏毒性细胞色素P450酶
- 稳定表达人寡肽转运体1的细胞模型构建及应用被引量：2
- 2013年
- 目的构建稳定表达人寡肽转运体1(hPepT1)的马丁-达比犬肾细胞模型(MDCK-hPepT1),并将其应用于中药单体中人寡肽转运体1抑制剂的筛选。方法构建重组质粒pcDNA3.1(+)-hPepT1,将其转染马丁-达比犬肾系细胞,经G418筛选后以有限稀释法挑选单克隆细胞。以人寡肽转运体1荧光底物β-Ala-Lys(AMCA)和经典底物Glysar对单克隆细胞转运活性进行验证;通过反转录聚合酶链式反应验证人寡肽转运体1在转录水平的表达。以中药单体对Glysar摄取的影响实现人寡肽转运体1抑制剂的筛选。结果获得的两株单克隆细胞(D19、A11)对β-Ala-Lys(AMCA)摄取均显著高于转染空载体的马丁-达比犬肾系细胞,对Glysar的摄取分别为转染空载体细胞的24、11倍;D19、A11中hPepT1的mRNA水平亦显著高于转染空载体的细胞;已知的人寡肽转运体1抑制剂(底物)显著减少单克隆细胞D19和A11对Glysar的摄取;部分中药单体对Glysar摄取产生不同程度的抑制。结论本实验成功构建了稳定高表达人寡肽转运体1的马丁-达比犬肾系细胞模型,并应用该模型筛选出对人寡肽转运体1具有潜在抑制作用的中药单体。
- 戴燕青涂美娟孙冬黎石爱琴曾苏蒋惠娣
- 关键词：细胞模型中药
- 表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建及应用
- 本发明提供一种表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建方法及应用，从肝组织中获得hOCT1的野生型基因片段，定点突变获得P341L，M420del两个突变体基因片段，并与质粒载体连接，染入MDCK细胞，经G418抗性筛选，...
- 涂美娟陈忠坚石爱琴孙思源李丽萍曾苏蒋惠娣
- 稳定表达人MATE1转运体的细胞模型的构建及应用
- 本发明提供构建pcDNA3.1（+）-hMATE1重组质粒的方法，获得的pcDNA3.1(+)-hMATE1重组质粒用于构建MDCK-hMATE1、MDCK-hOCT1/hMATE1和MDCK-hOCT2/hMATE1三...
- 雷红梅孙思源李丽萍涂美娟王凯白梦如周慧曾苏蒋惠娣
- 文献传递
- 稳定表达人寡肽转运体1的细胞模型构建及应用
- 目的构建稳定表达人寡肽转运体1（hPepT1）的MDCK细胞模型（MDCK-hPepT1）,并将其应用于中药单体中hPepT1抑制剂的筛选。方法构建重组质粒pcDNA3.1（+）-hPepT1,将其转染MDCK细胞,经G...
- 戴燕青涂美娟孙冬黎石爱琴曾苏蒋惠娣
- 去铁酮与人有机阳离子转运体及有机阴离子转运体1体外相互作用研究被引量：1
- 2014年
- 目的：建立细胞裂解液中去铁酮测定的液相色谱-串联质谱（ LC-MS/MS）方法，体外考察去铁酮与人有机阳离子转运体（ hOCTs）及有机阴离子转运体1（hOAT1）的相互作用。方法：以Agilent Eclipse Plus C18柱（2．1 mm ×50 mm，3．5μm）为分析柱；0．1％甲酸-水（ v/v）和0．1％甲酸-乙腈（ v/v）为流动相，梯度洗脱；应用电喷雾离子源（ ESI源）、多反应监测（ MRM）模式进行检测；应用稳定表达hOCTs及hOAT1的细胞模型（ MDCK-hOCTs和MDCK-hOAT1）考察去铁酮对经典底物在细胞内积聚的影响；比较去铁酮在转空载体的mock细胞及MDCK-hOCTs中积聚的差异，以及经典抑制剂对其积聚的影响。结果：去铁酮在5～300 nmol/L的浓度范围内线性关系良好；准确度大于94％，日内相对标准偏差小于2％。300μmol/L去铁酮使hOCTs经典底物MPP＋在MDCK-hOCTs的积聚降低至阴性对照的70．4％～87．1％；去铁酮在MDCK-hOCTs细胞和mock细胞中的积聚无明显差别，且经典抑制剂对去铁酮的积聚无明显抑制作用；100μmol/L去铁酮对hOAT1经典底物6-CF在MDCK-hOAT1细胞中的积聚无显著影响。结论：本实验建立的方法适用于细胞裂解液中去铁酮的定量分析；去铁酮对hOCT1和hOCT3有一定的抑制作用，对hOCT2和hOAT1则无明显抑制作用；hOCTs在去铁酮跨膜转运中不起主导作用。
- 孔思思涂美娟杨希赵垒周慧曾苏蒋惠娣
- 关键词：酮类铁螯合剂质谱分析法
- 稳定表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建被引量：2
- 2011年
- 目的建立能稳定表达人有机阳离子转运体1(human organic cation transporter1,hOCT1)野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞模型。方法从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1P341L,hOCT1M420del两个突变型基因,构建表达质粒pcDNA3.1(+)-hOCT1,pcDNA3.1(+)-hOCT1P341L,pcDNA3.1(+)-hOCT1M420del。将质粒转染MDCK细胞,通过G418筛选获得抗性克隆,并通过hOCT1的荧光底物(4-二甲氨基苯乙烯基)-N-甲基吡啶(ASP+)筛选得到具有较高活性的MDCK-hOCT1细胞。经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及经典底物N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的摄取实验,鉴定筛选得到的单克隆细胞株hOCT1 mRNA的表达及功能。结果本实验获得的hOCT1野生型及2个突变体细胞模型与转染空载体的MDCK细胞相比,其hOCT1 mRNA表达量显著增高,对经典底物MPP+的摄取为转染空载体细胞的12.5,13.7,12.0倍,hOCT1抑制剂可显著抑制细胞对MPP+的摄取。结论建立的细胞模型可用于hOCT1抑制剂及底物的筛选。
- 涂美娟陈忠坚孙思源石爱琴李丽萍曾苏蒋惠娣
- 关键词：基因多态性细胞模型
- 表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建及应用
- 本发明提供一种表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建方法及应用，从肝组织中获得hOCT1的野生型基因片段，定点突变获得P341L，M420del两个突变体基因片段，并与质粒载体连接，染入MDCK细胞，经G418抗性筛选，...
- 涂美娟陈忠坚石爱琴孙思源李丽萍曾苏蒋惠娣
- 文献传递
- 有机阳离子类转运体介导的内外源物质转运及其意义
- 有机阳离子转运体(organic cation transporters,OCTs)、多药及毒素外排蛋白(multidrug and toxin extrusion proteins,MATEs)、肉毒碱/有机阳离子转运...
- 李丽萍翁娅韵杨希周思思涂美娟孙思源王凯雷红梅蒋惠娣
- 中草药中农药残留检测技术新进展被引量：4
- 2010年
- 综述了近年来中草药中农药残留常用的检测技术，如气相色谱、高效液相色谱、气相色谱-质谱联用技术、毛细管电泳、免疫分析技术、生物传感器技术等．着重介绍了农药残留分析常用的前处理技术以及新技术，如超声提取、微波辅助提取、固相萃取、固相微萃取、超临界流体萃取、基质固相分散技术、加速溶剂萃取、免疫亲和色谱、分子印迹技术等，并展望了中草药中农药残留测定技术的发展．
- 张金娥涂美娟陈冬梅
- 关键词：中草药农药残留前处理
