汪宗桂
- 作品数：18 被引量：32H指数：3
- 供职机构：广东医科大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 通路克隆系统:DNA重组技术的新进展被引量：17
- 2003年
- 近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述了该系统的作用原理、特点及其应用。
- 汪宗桂郑文岭马文丽
- 关键词：DNA重组技术定向克隆亚克隆
- 胚胎干细胞核心转录因子靶基因集蛋白互作网络特征分析
- 2011年
- 背景:外源性核心转录因子导入终末分化细胞能产生具有与胚胎干细胞特性相似的诱导多潜能干细胞,其复杂机制目前尚未完全阐明。目的:分析核心转录因子靶基因集蛋白互作网络特征,获得其影响"干性"特征的调控机制。方法:去除BioGRID数据库中的冗余数据,获得非冗余蛋白互作数据库。perl程序搜索靶基因集组成的蛋白互作对,广度优先算法搜索非冗余蛋白互作数据库,获得靶基因集组成的最大连续蛋白互作网络,同时进行1000次随机抽样网络分析。通过Cytoscape软件对网络进行可视化分析。复杂无标度网络Barabasi-Albert模型分析网络特征。结果与结论:核心转录因子靶基因集形成更多的蛋白互作对,最大连续蛋白网络与随机蛋白网络相比具有明显的统计学差异,且核心转录因子靶基因集形成更大的互作网络。网络具有复杂网络无标度特性。该研究通过蛋白互作网络分析证明:靶基因集通过紧密相互作用,形成网络模块方式协调调控胚胎干细胞分子特性。
- 左长清汪宗桂吴铁崔燎
- 关键词：胚胎干细胞蛋白相互作用生物信息学网络
- C11orf17蛋白的原核表达及功能预测
- 2014年
- 目的利用基因工程技术获取原核表达的C11orf17蛋白,结合生物信息学初步预测其功能。方法以K562细胞的cDNA为模板,PCR扩增C11orf17的基因序列;双酶切后将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a上,将测序正确的重组表达质粒pET-32a-C11orf17转化到E.coli BL21,经诱导后SDS-PAGE及Western blot检测融合蛋白表达,并分析其可溶性。采用UGET软件预测C11orf17共表达基因,蛋白质互作数据库挖掘C11orf17基因已知互作蛋白,在线软件Gather富集共表达基因生物功能。结果成功构建重组表达质粒pET-32aC11orf17,此重组体经诱导后能在E.coli BL21高效表达C11orf17的融合蛋白,UGET分析C11orf17前300共表达探针中,包含267个已知基因,共表达基因主要富集细胞交流、信号传导、细胞周期基因功能本体。蛋白互作数据库表明,C11orf17与PRKACA蛋白互作,后者为细胞周期调控重要分子。结论在原核细胞中成功表达出C11orf17蛋白,生物信息预测其可能是细胞周期调控重要新分子,为后续研究提供了方向和线索。
- 汪宗桂左长清刘振杰刘新光
- 关键词：原核表达生物信息学
- 一种新的DNA重组系统
- 2003年
- 通路克隆系统(Gateway Cloning System)是一种位点特异的DNA重组新技术,具有载体间DNA片段相互转化灵活、操作简单、重组反应高效快捷等优点。本文介绍了该系统的原理、结构及特点。
- 汪宗桂郑文岭马文丽
- 关键词：DNA重组
- 重组人BMP-2诱导C3H10T1/2间质干细胞定向成骨分化早期基因表达谱分析被引量：3
- 2014年
- 目的研究间质干细胞早期定向成骨分化基因表达谱,为研究基因对早期成骨定向分化调控机制提供实验基础。方法分别提取重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)诱导组和对照组C3H10T1/2细胞总RNA,进行扩增标记后,与ArraySTAR小鼠基因芯片杂交,应用生物信息学软件GeneSpring和GATHER对基因芯片数据进行分析。应用STRING在线软件对差异表达基因构建蛋白互作网络并进行网络分析。结果 C3H10T1/2早期成骨分化中,主要富集发育、器官形成等分子功能本体以及细胞因子-细胞因子受体作用信号通路。成骨分化1 d和4 d均上调表达基因42个,下调表达基因45个。网络分析研究表明:Egfr、Cxcl12等信号分子参与调控rhBMP-2诱导成骨分化。结论筛选的差异表达基因和信号分子对早期成骨分化调控具有重要作用,为进一步全面解析早期成骨定向分化提供实验基础。
- 左长清汪宗桂钟月春卢旱云戴忠吴铁崔燎
- 关键词：基因表达谱间质干细胞生物信息学
- 长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响
- 2017年
- 背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P<0.01);(2)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P<0.05);(3)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;(4)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;(5)结果表明,NR_033474可能通过下调Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G_2/M期。
- 潘亚琼戴忠左长清汪宗桂
- 关键词：间质干细胞细胞增殖细胞周期细胞周期蛋白质类干细胞长链非编码RNA慢病毒感染
- 以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体
- 2006年
- 目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。
- 汪宗桂郑文岭马文丽梁念慈
- 关键词：人生长激素
- hGH消化道途径转基因的研究被引量：2
- 2005年
- 消化道途径转基因过程方便、快捷、易适应,可为基因治疗提供全新的模式。为了研究人 生长激素(bGH)基因的经消化道途径转基因过程,实验首先应用ECHO克隆系统。在供载体 pUni-hGH和宿主载体pcDNA4／TO-E的基础上,构建出hGH的哺乳动物表达载体pcDNA4-hGH;然 后结合酿酒酵母表达载体pESC-URA,构建出hGH的酵母-哺乳动物穿梭栽体pESC-CMV-hGH,测 序鉴定后转化酿酒酵母。用阳性重组酵母对小鼠进行灌胃免疫实验,间接ELISA方法在实验组 小鼠的血清中检测到抗hGH抗体的存在。结果证实hGH基因可通过消化道途径转进小鼠体细 胞并进行表达,初步证明了hGH的消化道基因治疗的可行性。
- 赵林郑文岭汪宗桂崔东马文丽
- 关键词：人生长激素基因基因治疗基因转移
- 人生长激素的酿酒酵母表达质粒构建的新方法
- 2004年
- 目的 :利用ECHO克隆系统建立一种更加快速、方便、通用的DNA重组技术。方法 :用常规重组法构建出ECHO系统中的携带外源基因HGH的供载体 ,再利用ECHO系统快速构建人生长激素的酿酒酵母表达载体 ,使HGH能在酿酒酵母启动子GAL的调控下进行转录。结果 :基因测序表明 ,在所构建的融合质粒载体上确实含有HGH的基因序列。结论 :本方法为研究HGH的消化道基因治疗打下基础。
- 汪宗桂郑文岭马文丽
- 关键词：人生长激素酿酒酵母
- 哺乳动物中基因持续表达的策略
- 2004年
- 人类遗传病的治疗越来越依赖于基因水平上的治疗,但外源基因不能在哺乳动物中持续表达的缺陷严重阻碍了这一手段的快速发展。含有转座子载体的染色体基因组整合,裸露质粒DNA转化到肝脏的压力输送,或是在质粒载体中插入真核基因的顺式作用元件如内含子、3′端非翻译区、EBV序列等,都可以在一定程度上赋于外源基因以长期持续的表达,这些策略对于基因治疗的发展具有重要的意义。
- 汪宗桂郑文岭崔东马文丽
- 关键词：基因治疗质粒载体
