杨静
- 作品数：26 被引量：52H指数：4
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。
- 宋丽君余传信殷旭仁沈双高玒张伟金一姚媛刘茜王玠柯雪丹许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫免疫原性免疫保护
- 隐性弓形虫感染对子一代小鼠脑部多巴胺水平影响的研究
- 为探讨隐性弓形虫感染对子一代小鼠发育期脑部多巴胺水平的影响，将36只雌性ICR小鼠随机分为对照组和弓形虫包囊感染组，每组18只.弓形虫包囊感染组每鼠分别经口感染弓形虫Prugniaud(PRU)弱毒株10个包囊.感染后9...
- 周永华许永良杨静张英陶永辉
- 关键词：弓形虫多巴胺高效液相色谱仔代
- 日本血吸虫感染对小鼠糖尿病模型建立影响的实验研究
- 目的 探讨日本血吸虫感染对小鼠糖尿病模型建立的影响.方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为日本血吸虫感染+糖尿病造模组(A)、糖尿病模型组(B)和正常对照组(C)等三组.A组每鼠腹部贴壁感染日本血吸虫尾蚴20条后7周、...
- 周永华许永良张英杨静
- 关键词：日本血吸虫糖尿病模型免疫偏移小鼠
- 日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶抗体反应模式及诊断价值的研究被引量：6
- 2015年
- 目的观察血吸虫感染家兔体内抗日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBA)抗体反应的动态变化,评价检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法采用RT-PCR方法从日本血吸虫中国大陆株cDNA中扩增出编码Sj FBA的开放阅读框基因片段,然后亚克隆到表达质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj FBA-pET28a。将重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经镍螯合胶亲和层析的方法纯化重组Sj FBA蛋白。用日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染日本大白兔,6周后用吡喹酮与青蒿琥酯进行治疗,收集感染前和感染后2、4、6周及治疗后2、4、6、8、10、12、14、16周的血样。以重组Sj FBA为包被抗原,建立检测抗Sj FBA抗体IgG的酶联免疫吸附试验方法(rSj FBA-ELISA),用于检测家兔不同感染阶段血清抗Sj FBA抗体反应模式。分别用5、10、15和20条日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染小鼠,收集感染后35d的小鼠血清,采用rSj FBA-ELISA检测抗Sj FBA抗体IgG并观察抗Sj FBA抗体水平与感染度的关系。用rSj FBA-ELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清、华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清,观察该方法用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;使用该方法检测治疗前及治疗后1年的同一血吸虫现症感染患者的配对血清,观察抗Sj FBA抗体IgG检测用于血吸虫病疗效考核的价值。结果血吸虫感染家兔体内抗Sj FBA抗体IgG水平随感染时间的延长而逐渐增强,感染6周达到高峰(A450值为1.364),但治疗后抗Sj FBA的抗体则迅速下降,治疗6-8周后抗体水平可下降至阴性阈值(A450值为0.4),而未治疗组则抗体水平则始终保持在高水平,表明家兔体内抗Sj FBA抗体反应呈典型的短寿抗体反应模式。不同感染度小鼠血清抗Sj FBA抗体水平随着感染度的升高而逐渐升高,呈剂量依
- 王玠余传信肖迪赵飞殷旭仁宋丽君沈双高玒张建中何利华许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株现症感染免疫诊断疗效考核
- 弓形虫感染对子一代雄性小鼠脑部多巴胺水平的影响
- 2015年
- 目的探讨弓形虫感染对子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平的影响。方法 36只雌性ICR小鼠随机分为健康对照组和弓形虫感染组,每组18只。感染组每鼠分别经口感染弓形虫PRU弱毒株10个包囊。感染后90 d,与健康雄性ICR小鼠按1∶1交配。每组各取2只交配成功的母鼠于孕20 d时剖腹取胎鼠。其他交配成功的母鼠自然分娩。应用高效液相色谱-电化学法对孕20 d的雄性胎鼠及出生后14 d和63 d的雄性仔鼠(各6只)进行脑皮层、小脑、海马和纹状体多巴胺含量的测定。结果感染组小鼠感染后死亡3只,余15只感染鼠中,仅6只交配成功。2只于孕20 d剖腹取胎鼠12只,其中雄性7只;4只自然分娩,仔鼠存活21只,其中雄性15只。18只对照组小鼠均交配成功,2只于孕20 d时剖腹取胎鼠23只,其中雄性12只;16只自然分娩,仔鼠存活179只,其中雄性92只。感染组和对照组雄性胎鼠小脑区多巴胺含量分别为(413.25±21.78)ng/g和(346.30±51.83)ng/g,感染组显著高于对照组(P<0.01),两者皮层区多巴胺含量差异无统计学意义(P>0.05)。感染组出生后14 d和63 d,雄性仔鼠皮层区[(462.50±24.80)ng/g和(1 215.77±113.64)ng/g]、小脑区[(271.55±26.19)ng/g和(1 328.82±39.62)ng/g]、海马区[(225.78±24.17)ng/g和(1 322.70±58.34)ng/g]和纹状体区[(455.23±61.53)ng/g和(991.32±54.31)ng/g]的多巴胺含量均显著高于相应对照组(P<0.05或P<0.01)。结论弓形虫感染能引起子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平显著升高。
- 周永华朱虎平许金俊张英毛爱民杨静范峰许永良赵中兴陶建平
- 关键词：刚地弓形虫多巴胺子一代
- 血吸虫感染小鼠及家兔抗Sj23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)IgG应答模式及其免疫诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的探讨日本血吸虫中国大陆株23ku膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法建立血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物。采集尾蚴感染前、感染后及治愈后不同时间点小鼠及家兔血清,以酵母表达的纯重组Sj23HD蛋白为抗原,通过间接ELISA方法检测抗Sj23HD IgG应答水平的动态变化,观察Sj23HD在小鼠及家兔体内的抗体反应应答模式及其疗效考核潜能;以Sj23HD-HSA融合蛋白为抗原,以ELISA检测132份血吸虫、30份华支睾吸虫、10份并殖吸虫感染者以及80份健康人血清,观察该重组抗原用于血吸虫病诊断的价值,以抗可溶性虫卵抗原的抗体应答反应作为对照。结果血吸虫感染小鼠及家兔体内抗Sj23HD蛋白的抗体反应呈短寿应答模式,抗Sj23HD IgG反应随着感染时间的延长呈增强趋势,治愈后的初期继续增强,至治疗后2～4周达到最高水平,随后逐渐下降,至治疗后16周,部分小鼠、家兔的抗体水平可达到阴性阈值,但下降幅度存在个体差异;抗SEA抗体水平在治疗后呈轻度下降趋势。未治疗小鼠和家兔血清中抗Sj23HD、SEA的抗体水平均无明显下降。重组Sj23HD-HSA和SEA ELISA检测132份血吸虫病病人血清,特异抗体阳性率分别为88.64%和97.73%;检测10份并殖吸虫病病人血清,交叉反应率为50%和90%;检测30份华支睾吸虫病病人血清,交叉反应率为0和16.7%;80份健康人血清检测均为阴性。结论血吸虫感染小鼠、家兔血清中抗Sj23HD蛋白的抗体反应为抗原依赖的短寿抗体反应,检测参与这一特异性短寿抗体反应的抗体具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能。与SEA相比,重组Sj23HD蛋白作为抗原用于血吸虫病实验诊断具有较好的特异性,但对于来自并殖吸虫流行区的患者仍需注意鉴别诊断。
- 张伟王玠余传信宋丽君殷旭仁钱春艳沈双金一柯雪丹姚媛高玒许永良杨静
- 关键词：疗效考核
- 日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白基因的克隆表达与功能分析
- 2014年
- 目的克隆、表达日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白(SjHMGB1),并研究其功能特性。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增出编码SjHMGB1的完整开放阅读框DNA片段,然后将其亚克隆至原核表达载体质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。将重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),含重组质粒的转化子细菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导以表达重组SjHMGB1蛋白。通过镍螯合琼脂糖亲和胶亲和层析法制备纯化的重组SjHMGB1蛋白。通过DNA迟滞实验和动物免疫鉴定重组SjHMGB1的DNA结合和免疫学特性。通过免疫印迹试验(Western blotting)和RT-PCR确定SjHMGB1分子在日本血吸虫不同发育阶段的表达情况。以重组SjHMGB1为抗原免疫小鼠,3次免疫后每只小鼠感染45±2条血吸虫尾蚴,42 d后剖杀,计算减虫率与减卵率,观察其诱导抗血吸虫感染的免疫保护性作用。结果采用RT-PCR法从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增到长度约为530 bp的特异性DNA条带,序列分析证实为编码SjHMGB1蛋白的开放阅读框序列。将此片段亚克隆至表达质粒pET28a(+)中,成功构建了重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。含重组表达质粒SjHMGB1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导能表达分子量约28 kDa的可溶性SjHMGB1蛋白。采用镍螯合亲和层法制备了纯化的重组SjHMGB1蛋白。DNA迟滞试验显示纯化的Sj HMGB1蛋白可同超螺旋及线性DNA结合,重组SjHMGB1免疫小鼠能产生高效价的抗体IgG,Western blotting分析证实重组SjHMGB1蛋白能被重感染小鼠血清所识别,表明重组表达的SjHMGB1分子具有天然蛋白的功能活性与免疫学特性。RT-PCR和Western blotting分析显示SjHMGB1分子在血吸虫成虫和虫卵期大量表达,而在尾蚴阶段表达量极低。免疫保护性试验结果表明,重组SjHMGB1分子免疫不能诱导有效的抗血吸虫感染免疫保护性作用。结论获得了编码SjHMGB1基因和纯�
- 姚媛余传信宋丽君殷旭仁王玠金一沈双张伟高玒许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫DNA结合活性免疫保护作用BOX
- 弓形虫感染大鼠坐骨神经传导速度的动态变化
- 2014年
- 目的观察弓形虫感染大鼠坐骨神经传导速度的动态变化。方法将20只雄性SD大鼠随机均分为感染组和对照组。感染组大鼠经腹腔注射弓形虫速殖子(2×107/ml)2 ml/鼠,对照组注射等量生理盐水。于感染前、感染后2、4、8和12个月时应用Cantata TM肌电图仪检测大鼠下肢感觉神经传导速度(SNCV)和运动神经传导速度(MNCV)。结果弓形虫感染后2个月,感染组和对照组大鼠SNCV和MNCV的差异无统计学意义(P>0.05);感染后4个月,感染组大鼠SNCV和MNCV开始减慢,并随着病程延长而进行性加重,4、8和12个月时SNCV分别为(35.26±3.02)、(33.57±2.27)m/s和(32.38±2.38);MNCV分别为(25.94±3.20)、(22.75±2.31)和(22.03±2.08)m/s。SNCV和MNCV在感染后4、8和12个月时较对照组分别下降(7.47±2.11)%、(8.92±2.64)%和(12.18±1.94)%,(12.57±1.89)%、(13.72±2.65)%和(15.46±2.37)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论弓形虫感染4个月后大鼠下肢感觉和坐骨神经传导速度进行性减慢。
- 周永华杨俊峰许永良殷钰涵张英顾晓琳杨静
- 关键词：弓形虫坐骨神经神经传导速度
- 孕早期弓形虫感染对仔代性成熟期雄性大鼠血清睾酮水平及性行为影响的研究
- 讨孕早期弓形虫感染对仔代性成熟期大鼠血清睾酮水平和性行为的影响,对孕早期大鼠口服接种PRU株,设感染组和正常对照组.待仔代70日令,即性成熟期后分别观察仔代雄性大鼠的扑捉潜伏期(CLP)和60 min内扑捉雌鼠的次数,利...
- 许永良周永华杨静张英陶永辉
- 关键词：弓形虫感染孕早期性成熟血清睾酮
- 日本血吸虫急性感染小鼠血清肽谱分析被引量：4
- 2013年
- 目的分析急性感染日本血吸虫小鼠血清多肽,寻找具有潜在诊断意义的标志蛋白。方法构建日本血吸虫急性感染小鼠模型,利用螯合铜离子富集纯化血清多肽,应用基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)Flex Analysis分析技术结合ClinProTool建模方程进行分析。结果与未感染对照组小鼠血清多肽指纹图谱比较,在0.8～17.0ku区段,日本血吸虫急性感染小鼠9.068、2.082、4.533ku多肽表达上调(P<0.01),3.493、2.869、2.024、4.965ku多肽表达下调(P<0.05)。结论日本血吸虫感染血清9.068、2.082、4.533ku多肽作为生物标志物对日本血吸虫病早期诊断有潜在应用价值。
- 黄玉政徐明顾振华陶永辉张英周永华许永良杨静曹鹏
- 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
