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可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒的构建及其表达被引量：1: 2012年; 腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗的研究,但这些肿瘤靶向载体缺乏可控性,其疗效和安全性受到很大的影响,因此开发新型可诱导的生物肿瘤靶向载体是当今抗肿瘤靶向药物研究的当务之急。该研究构建了可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒。重组腺病毒能够有效感染人肝癌细胞株HepG2等多种肿瘤细胞株,RT-PCR和Western blot结果表明肿瘤细胞能高效表达IFN-α2a,而其非肿瘤细胞株L02几乎没有表达。诱导试验表明重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a能被ZnSO4诱导表达。可诱导肿瘤靶向性重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a成功构建为下一步体内外抑癌实验研究打下了基础。; 李祥璩津生康帅何哲耘杨纪峰高基民; 关键词：肿瘤靶向性腺病毒 HTERT启动子

IL-8基因多态性与中国人群炎症性肠病风险的相关性被引量：8: 2011年; 目的观察白细胞介素8（IL-8）基因多态性与炎症性肠病（IBD）的相关性。方法应用PCR-RFLP法和PCR-SSP法对183例无关联的IBD患者[包括142例溃疡性结肠炎（UC）患者和41例克罗恩病（CD）]和160例健康对照者IL-8基因的5个单核苷酸多态位点（SNPs）（-845（T／C），-738（T／A），-353（A／T），-251（T／A）和＋678（T／C））进行分析。结果单个SNP与IBD发生风险没有关联，IL-8基因-353A／T、-251T／A和＋678T／C三位点的特殊单体型AAT在UC患者中的频率明显高于健康对照组（31．0％比23．7％，P=0．046），不过这种单体型在CD患者和对照中的分布没有差别。结论IL-8基因的单体型AAT与UC发病之间明显存在一定程度的关联（OR=1．441，95％C11．007～2．063）。; 梁万东李劲松李克深金捷闫峻杨纪峰毕云天; 关键词：单核苷酸多态单体型

网络资源在细胞生物学教学和学习中的应用被引量：1: 2010年; 细胞是生命体结构和功能的基本单位,细胞生物学是现代生物学的交叉、核心学科之一。随着网络信息技术的发展和广泛应用,丰富的网络资源在高等院校细胞生物学课程教与学的各个环节中也发挥着越来越重要的作用。笔者结合自己多年来在细胞生物学学习、教学和科研过程中使用网络资源的经验,主要介绍如何在几个著名的网络搜索引擎站点和生物学相关站点上查询细胞生物学领域的重要知识点。; 杨纪峰; 关键词：网络资源细胞生物学

单一紫外激光同时激发Hoechst 33342和碘化丙锭流式细胞术检测猕猴精子活率: ＜正＞流式细胞术（FCM）为精子功能实验提供了快速准确的检测手段,成为一种精液质量检测的新平台。利用FCM进行非人灵长类精子质量检测的报道还较少。精子的活率是检测精液质量的重要指标之一,也是FCM应用最多的领域。在精子...; 采克俊杨纪峰李亚辉关沫司维季维智; 文献传递

猕猴体细胞核移植影响因素的研究：着床前胚胎表观遗传重编程和供体细胞周期同步化: 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer)克隆技术的成功，特别是运用终末分化的淋巴细胞和嗅觉神经元细胞成功克隆出小鼠，证实了分化的体细胞核潜在的发育全能性。该技术已经在多个物种上成功地得到...; 杨纪峰; 关键词：体细胞核移植细胞周期克隆动物

环磷酰胺处理雄小鼠对受精卵和二细胞期胚胎DNA甲基化和组蛋白H3K23乙酰化的影响: 2011年; 目的探讨环磷酰胺处理雄性小鼠对受精卵和早期胚胎DNA甲基化修饰和组蛋白H3第23位赖氨酸(H3K23)乙酰化修饰的影响。方法 20只性成熟的ICR雄小鼠饲喂环磷酰胺6 mg.kg-1 4周。雄鼠与雌鼠交配后收集原核期受精卵和二细胞期胚胎。间接免疫荧光染色技术结合激光共聚焦扫描显微镜技术检测胚胎细胞中DNA甲基化和组蛋白H3K23乙酰化修饰的分布和水平。结果与正常对照组相比,环磷酰胺组原核期受精卵和二细胞期胚胎的DNA甲基化修饰水平和分布没有明显差异;但与正常对照组(3%)相比,环磷酰胺组的二细胞期胚胎微核现象(20%)明显升高(P<0.01);与正常对照组相比,环磷酰胺组受精卵雄原核和二细胞期胚胎细胞核的组蛋白H3K23乙酰化水平明显降低(P<0.05),且胚胎间的变化差异明显升高,其中部分原核期受精卵(58%)和二细胞期胚胎(44%)染色水平明显偏低。结论长期低剂量环磷酰胺处理雄鼠可以导致部分受精卵和二细胞期胚胎组蛋白H3K23乙酰化异常,并且显著增加微核发生率。; 董杰影杨纪峰李嫱李庆吕红梅戴武; 关键词：环磷酰胺组蛋白乙酰化

巨噬细胞炎性蛋白1 α和载脂蛋白E基因多态性与炎症性肠病易感性的关系被引量：1: 2011年; 目的探讨巨噬细胞炎性蛋白lα（MIP-lα）基因和载脂蛋白E（ApoE）基因多态性是否与炎症性肠病（IBD）的发生相关，并探讨这两个基因之间的相互作用。方法采用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性方法，在183例IBD患者[包括142例溃疡性结肠炎（UC）患者和41例克罗恩病（CD）患者]以及160名健康对照者中检测MIP-lα和ApoE等位基因和基因型的频率。结果携带MIP-lα-906（TA）6／（TA）。基因型或者APOE4ε4等位基因可以增加UC的发病风险，UC患者组MIP-lα-906位点（TA）6／（TA）6基因型频率为50％，显著高于正常对照组中的34％（OR=1．909，95％CI=1．204—3．028）；UC患者ApoEs,4＋基因型频率为40．8％，显著高于正常对照组中的22．5％（OR：2．379，95％CI=1．451～3．896）。同时携带MIP-lα-906（TA）6／（TA）6和APOE484的个体发生UC的风险更大（P〈0．01，OR=3．288，95％CI=1．777-6．084）。而CD组与对照组间的MIP-lα和ApoE基因多态频率差异无统计学意义。结论MIP-1α基因-906（TA）6／（TA）。多态性和APOE4ε4基因多态性可能是UC发病的遗传危险因素；MIP-1α基因多态性与ApoE基因多态性之间有协同作用，ApoE4ε4等位基因与MIP-lαt-906（TA）6／（TA）。基因型同时存在时，患UC的危险性显著提高．; 梁万东杨纪峰闫峻金捷李克深李劲松毕云天; 关键词：溃疡性 CROHN病载脂蛋白类基因多态性

Notch signaling dependent differentiation of cholangiocyte-like cells from rhesus monkey embryonic stem cells被引量：1: 2011年; Rhesus monkey embryonic stem（rES） cells have similar characteristics to human ES cells,and might be useful as a substitute model for preclinical research.Notch signaling is involved in the formation of bile ducts,which are composed of cholangiocytes.However,little is known about the role of Notch signaling in cholangiocytic commitment of ES cells.We analyzed the effect of Notch signaling on the induction of cholangiocyte-like cells from rES cells.About 80% of definitive endoderm（DE） cells were generated from rES cells after treatment with activin A.After treatment with BMP4 and FGF1 on matrigel coated wells in serum-free medium,rES-derived DE gave rise to cholangiocyte-like cells by expression of cholangiocytic specific proteins（CK7,CK18,CK19,CK20,and OV-6） and genes（GSTPi,IB4,and HNF1β）.At the same time,expression of Notch 1 and Notch 2 mRNA were detected during cell differentiation,as well as their downstream target genes such as Hes 1 and Hes 5.Inhibition of the Notch signal pathway by L-685458 resulted in decreased expression of Notch and their downstream genes.In addition,the proportion of cholangiocyte-like cells declined from ～90% to ～20%.These results suggest that Notch signaling may play a critical role in cholangiocytic development from ES cells.; 金立方纪少珲杨纪峰季维智; 关键词：CHOLANGIOCYTES

融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析被引量：3: 2011年; 目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能。方法:构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Westernblotting分析融合蛋白表达产物。Ni2+-NTA亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况。结果:获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带。结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱。结论:在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能。; 高国辉王金丹黄奇迪杨纪峰杨水兵包兵兵张羽胡孝渠; 关键词：融合基因表达

环磷酰胺处理对小鼠受精卵和二细胞期胚胎组蛋白H3K9乙酰化修饰的影响被引量：1: 2011年; 目的用环磷酰胺处理雄性小鼠,是否会对受精后的受精卵及早期胚胎的表观遗传特征组蛋白H3K9乙酰化修饰产生明显影响。方法 5只性成熟ICR雄性小鼠用环磷酰胺注射处理4 d时间作为环磷酰胺处理组,另外5只雄鼠注射相应体积的生理盐水作为正常对照组。雄鼠与雌鼠交配后收集原核期受精卵和二细胞期胚胎,然后用间接免疫荧光染色技术结合激光共聚焦扫描显微镜技术检测胚胎细胞中组蛋白H3K9乙酰化修饰的分布和水平。结果正常对照组中,受精卵的雌雄原核均呈现较明显的H3K9乙酰化染色,至二细胞期时,单个核内的染色水平有所下降,H3K9乙酰化在细胞核内除核仁外的区域相对均匀分布。在环磷酰胺处理组中,大部分原核期受精卵和二细胞期胚胎组蛋白H3K9乙酰化水平和分布模式与正常对照组胚胎没有明显差异,只有少部分(25%)受精卵呈现比较大的雄原核以及相对较低的乙酰化染色水平;37%二细胞期胚胎发生碎化,形成2～3个相对大一些的乙酰化染色水平很低的细胞以及若干小的球状体。结论高剂量环磷酰胺处理雄鼠可以在一部分受精卵和早期卵裂胚中导致表观遗传特征和胚胎发育的异常。; 杨纪峰周靖孙东威熊隽董杰影; 关键词：环磷酰胺胚胎着床前

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杨纪峰

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