杨彪
- 作品数：12 被引量：22H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在大鼠肌源性干细胞标记中的应用被引量：1
- 2008年
- 目的:对大鼠肌源性干细胞转染携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒表达载体,为进一步行标记细胞移植治疗实验奠定基础。方法:复苏并培养人胚胎肾293细胞,进行包装重组及大规模扩增腺病毒;原代培养大鼠肌源性干细胞并进行GFP基因转染,荧光显微镜观察转染情况并计算转染率。结果:人胚胎肾293细胞在普通培养条件下生长良好,加入Ad-GFP病毒液后48h荧光显微镜观察绝大多数细胞呈悬浮状态,带有较强的绿色荧光;转染肌源性干细胞后呈Desmin免疫组织化学显色阳性;48h荧光转染率为83.14%,4d为78.35%,8d为75.12%。结论:采用携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒表达载体标记肌源性干细胞的方法安全可靠、简便有效,且能保持肌源性干细胞原有生物学特性。
- 杨彪梅晰凡刘福强任甫
- 关键词：绿色荧光蛋白肌源性干细胞转染
- 损伤脊髓组织提取液对大鼠肌源性干细胞向神经细胞诱导分化的实验研究
- 2008年
- 目的:探讨大鼠肌源性干细胞在损伤脊髓组织提取液中向神经细胞分化的可能性,为神经再生及脊髓损伤的治疗提供一种新方法。方法:从大鼠乳鼠骨骼肌中分离培养肌源性干细胞,将正常、伤后1d,伤后1周及伤后3周脊髓提取液加入细胞培养基中,观察细胞形态的变化,并采用免疫组织化学法检测诱导后的细胞表达NSE特异性标志物。结果:加入脊髓提取液诱导后24h,部分细胞的形态已发生改变,3d后大部分细胞不仅在形态上表现为神经元样特征,而且NSE等特异性抗体呈阳性表达。结论:损伤脊髓组织液能将肌源性干细胞诱导成神经元样细胞。
- 杨彪梅晰凡刘福强秦书俭
- 关键词：肌源性干细胞细胞分化神经元样细胞
- 绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在肌源性干细胞移植修复脊髓损伤实验中的应用
- 2010年
- 目的:观察绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在肌源性干细胞移植修复脊髓损伤实验中的应用。方法:40只成年SD大鼠随机分为移植组(n=20)和对照组(n=20),均进行脊髓半切损伤。伤后9d,移植组于伤处移植体外转染GFP基因的大鼠MDSCs,而对照组仅注射等量PBS,于移植后1、2、3、4周用BBB评分方法测大鼠的运动功能,同时进行损伤脊髓取材、快速冰冻切片进行荧光显微镜观察。结果:移植后1周两组动物运动功能恢复无明显差异;移植后2、3、4周与对照组比较,移植组显著提高运动功能;荧光显微镜观察经绿色荧光蛋白基因标记的肌源性干细胞在损伤脊髓组织局部生长良好,并且有沿着脊髓神经束向头尾两侧迁移的趋势。结论:携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒表达载体的细胞标记方法是安全可靠、简便有效的生物示踪标记方法,可以用于标记细胞移植实验研究。
- 杨彪杜成林梅晰凡袁亚江
- 关键词：细胞移植
- 大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节被引量：5
- 2009年
- 背景:肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等。目的:观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况,及其调节血糖的效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成。材料:SPF/VAF级新生5d龄SD大鼠31只,由辽宁医学院实验动物中心提供。造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品。方法:取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌,采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞,传至第3代用于移植,临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染。取20只大鼠,通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,15只成功造模,取12只随机均分为2组:细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个,模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液。余6只大鼠作为正常对照组。主要观察指标:肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况,移植后大鼠血糖浓度的变化。结果:移植后1周,胰腺组织呈网架样结构,表达较强的黄绿色荧光;4周后仍有荧光表达,但强度减弱。与模型对照组比较,移植前2d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异(P>0.05);移植后4,8d,大鼠血糖浓度一直处于较高水平;至移植后第4,8周大鼠血糖浓度明显下降(t=-2.416～8.372,P<0.01)。结论:肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活,且一定程度上可下调大鼠血糖浓度。
- 刘畅刘福强杨彪梅晰凡
- 关键词：肌源性干细胞糖尿病
- 体外转染绿色荧光蛋白基因的肌源性干细胞移植修复大鼠脊髓损伤
- 2010年
- 背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨、软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等,是组织工程临床用于脊髓损伤修复的理想种子细胞。目的：观察肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：40只成年SD大鼠随机数字表法分为移植组和对照组,每组20只。均进行脊髓半切损伤,伤后9d,移植组于伤处移植体外转染绿色荧光蛋白基因的大鼠肌源性干细胞,而对照组仅注射等量PBS,于移植后1,2,3,4周用斜板实验和BBB评分测大鼠的运动功能,同时进行损伤脊髓取材、快速冰冻切片进行荧光显微镜观察。结果与结论：所有大鼠脊髓半切损伤手术均成功,术后无动物死亡。肌源性干细胞移植后1周,移植组与对照组均有所恢复,斜板实验和BBB评分差异无显著性意义（P〉0.05）;2~4周移植组恢复明显较好,斜板实验和BBB评分显著高于对照组（P〈0.05）,移植组后肢活动与前后肢活动的协调性明显优于对照组。荧光显微镜观察经诱导分化和基因标记的肌源性干细胞在损伤脊髓组织局部生长良好,并且有沿着脊髓神经束向头尾两侧迁移的趋势。提示脊髓半切损伤大鼠经肌源性干细胞移植后能在损伤脊髓组织局部长期存活并明显改善其运动功能,肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠有修复作用。
- 杨彪杜成林梅晰凡刘畅
- 关键词：肌源性干细胞脊髓损伤绿色荧光蛋白
- 肌源性干细胞及其在脊髓损伤修复中的应用前景被引量：1
- 2008年
- 肌源性干细胞是成年动物或人肌肉组织中特有的多能干细胞,它可能参与多种组织的修复过程。通过对国内外近年来对肌源性干细胞及脊髓损伤与修复的相关文献进行研究,从肌源性干细胞的名称、其生物学特性、分化为神经细胞的潜能及修复脊髓损伤的可能性等方面进行综述,推测肌源性干细胞在脊髓损伤修复未来治疗中的应用前景。
- 杨彪刘福强梅晰凡
- 关键词：肌源性干细胞脊髓损伤细胞移植
- 大鼠肌源性干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞被引量：2
- 2009年
- 目的探讨体外自体肌源性干细胞（MDSCs）定向诱导分化为胰岛素分泌细胞团的可行性。方法用差速贴壁的方法对SD大鼠MDSCs进行分离和培养,加入联合诱导剂培养7-12 d。通过形态学观察、双硫腙（DTZ）染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。结果联合诱导后12 d有典型的胰岛样结构出现;诱导后第12天细胞团表达胰岛素,而未诱导组细胞不表达;诱导后第7天检测到胰岛素（INS）、胰高血糖素（GLU）和生长抑素（SS）基因的表达。结论体外诱导大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径。
- 刘畅刘福强梅晰凡杨彪
- 关键词：肌源性干细胞转分化尼克酰胺胰岛素
- 大鼠胰腺提取液体外诱导肌源性干细胞分化为胰岛素分泌细胞被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨大鼠胰腺提取液(RPE)对大鼠肌源性干细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法:RPE诱导MDSCs通过形态学观察、双硫腙(DTZ)染色、免疫细胞化学显色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。结果:RPE诱导后第5日有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第12日细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第6日检测到PDX-1的表达,诱导后第12日检测到胰岛素1、胰岛素2、胰高血糖素和葡萄糖转运体2基因的表达。结论:体外经RPE诱导,大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞。
- 刘福强刘畅杨彪梅晰凡任甫
- 关键词：肌源性干细胞分化胰岛素
- 白血病抑制因子及神经生长因子联合诱导大鼠肌源性干细胞向神经元样细胞分化
- 2008年
- 目的:探讨白血病抑制因子(LIF)和神经生长因子(NGF)联合诱导大鼠肌源性干细胞分化为神经细胞的可能性和条件。方法:从大鼠乳鼠骨骼肌中分离培养肌源性干细胞,LIF和NGF进行分化诱导,以MEM培养基同等条件培养作对照,相差显微镜下观察细胞形态变化。免疫组织化学显色观察神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达,测定细胞转化率。结果:肌源性干细胞经过LIF和NGF诱导12 h后,部分细胞分化,类似神经细胞;免疫组织化学显色观察神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白呈强阳性。结论:LIF和NGF联合应用能将肌源性干细胞诱导成神经元样细胞,为细胞移植治疗脊髓损伤提供一种高效种子细胞生产方法。
- 梅晰凡杨彪刘福强刘畅任甫
- 关键词：白血病抑制因子神经生长因子肌源性干细胞神经元样细胞
- 新生大鼠肌源性干细胞的原代培养和鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的探讨骨骼肌源性干细胞体外培养、鉴定的方法。方法采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离大鼠骨骼肌源性干细胞,经差速贴壁法纯化后,培养液中培养。倒置显微镜观察细胞形态,生长曲线分析肌源性干细胞的增殖能力,结蛋白细胞免疫荧光方法鉴定肌源性干细胞。结果经过两步消化和差速贴壁后,成功培养出高纯度的肌源性干细胞,细胞免疫荧光结果为desmin(+)。结论通过体外原代培养获得高纯度肌源性干细胞,结蛋白细胞免疫荧光可以对其早期鉴定,为组织工程的临床应用提供种子细胞。
- 刘福强刘畅杨彪梅晰凡
- 关键词：肌源性干细胞体外培养
