李海源
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定阻断前列腺癌细胞中p65的shRNA基因序列的获得及蔓病毒载体的构建
- 2010年
- 目的 获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中核因子[NF-κB（p65）]表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3 3条针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5＇向3＇顺序依次为：酶切位点（BamH Ⅰ）、干扰序列（19bp）、loop环（TTCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19 bp）、中止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoR Ⅰ）.将合成的序列插入空载体pSI H1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time聚合酶链反应（PCR）检测不同序列片段对p65的mRNA抑制效果,通过Western blot检测对p65蛋白表达的抑制效果.从而获得可以稳定高效抑制前列腺癌细胞中p65表达的shRNA序列.结果 设计的3条针对p65的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于p65（NM_021975）的1096～1113,茎环序列为5＇-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3＇.其对前列腺癌细胞株中p65的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中p65表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.
- 郭正辉黄海杜涛林天歆李海源许可慰宁志丰江春韩金利黄健
- 关键词：核因子前列腺癌RNA干扰
- 构建PSMA shRNA慢病毒载体转染293T细胞后PSMA mRNA和蛋白的表达变化被引量：2
- 2008年
- 目的:利用基因工程技术筛选获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP中前列腺癌特异性膜抗原(PSMA)表达的shRNA序列,并构建慢病毒载体。观察转染前列腺癌细胞后对PSMAmRNA和蛋白表达的影响。方法:根据PSMA基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对PSMA基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5向3顺序依次为:酶切位点(BamHⅠ)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19bp)、终止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoRⅠ)。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-timePCR检测对PSMA mRNA表达,通过Western blotting检测PSMA蛋白的表达。结果:设计的3条针对PSMA的序列中第2条的抑制效果最好,目的序列位于PSMA(NM_004476)的1207到1226,茎环序列为5-GATCC GTCT-CAAAGTGCCCTACAA TTCAAGAGA TTGTAGGGCACTTTGAGAC TTTTTG-3。其对前列腺癌细胞株中PSMA mR-NA表达的抑制率为60%,对PSMA蛋白表达的抑制率为86%。转染细胞后,细胞可以稳定低表达PSMA。结论:成功获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP PSMA表达的shRNA序列,并构建慢病毒载体,pSIH-PSMA-siRNA2转染前列腺癌细胞后对PSMA mRNA表达的抑制率为60%,对PSMA蛋白表达的抑制率达86%。为后期研究PSMA在前列腺癌发病中的作用机制以及免疫导向治疗等提供了实验基础。
- 郭正辉黄海杜涛许可慰尹心宝李海源江春韩金利黄健
- 关键词：前列腺特异性膜抗原前列腺肿瘤
