李恩扩
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山东农业大学动物医学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
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- 鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
- 2014年
- 应用识别不同表位的鸡白细胞介素18成熟蛋白(Mature chicken interleukin-18,mChIL-18)的2株单克隆抗体(mAb)1G9和2E6,建立检测mChIL-18的双抗体夹心ELISA,并利用此方法对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)人工感染SPF鸡体内mChIL-18的分泌水平进行检测。结果显示,捕获抗体的最佳质量浓度为8mg/L,检测抗体的工作效价为1∶800,待检样品的最佳稀释度为1∶400,检测敏感度可达31.5ng/L,与其他细胞因子等抗原蛋白无交叉反应;跟对照组相比,REV感染鸡体内mChIL-18的表达量在7、14、21、28、35、42、49d均呈现升高,但只有14日龄时表现差异显著(P<0.05)。结果表明,本试验成功建立了ChIL-18的双抗体夹心ELISA,为鸡传染病的细胞免疫学研究提供了可靠方法。
- 王肖祎苏倩倩李恩扩胡敬东
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与特性鉴定被引量：1
- 2013年
- 将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin 18,mChIL-18)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌中高效表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了mChIL-18蛋白,并获得2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1G9、2E6),其腹水ELISA效价分别为1:5.12×105和1:3.2×104,亚类鉴定结果均为IgM。Western blot结果显示,2株单抗均能特异性识别原核表达的mChIL-18蛋白,IFA分析表明它们均能与真核表达的mChIL-18发生特异性反应,ELISA叠加试验证实1G9与2E6针对2个不同的抗原表位。本研究所获单抗可以用于建立鸡IL-18的检测方法,为进一步开展其生物学功能研究奠定了基础。
- 苏倩倩王肖祎李恩扩彭志成胡敬东
- 关键词：鸡白细胞介素18单克隆抗体特异性鉴定
- 禽网状内皮组织增生症病毒感染对SPF鸡主要免疫器官白细胞介素2产生的影响
- 白细胞介素-2是由激活的T淋巴细胞产生的一种细胞因子，这种细胞因子具有诱导T细胞增殖，促进B细胞分化及分泌抗体，诱导产生其他细胞因子，增强单核细胞、NK细胞以及LAK细胞的杀伤活性，在机体的免疫反应中具有非常重要的免疫调...
- 李恩扩
- 关键词：SPF鸡禽网状内皮组织增生症病毒实时荧光定量RT-PCR免疫器官白细胞介素2
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
- 2012年
- 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5
- 苏倩倩李恩扩张海滨周霞胡敬东
- 关键词：原核表达蛋白纯化间接ELISA
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
- 2013年
- 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白（chickeninterleukin18matureprotein，mChIL-18）基因在原核系统表达，采用Ni～NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板，通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数，
- 苏倩倩李恩扩张海滨
- 关键词：鸡白细胞介素18间接ELISA方法原核表达成熟蛋白抗体重组蛋白
- SPF雏鸡感染REV后IL-6和IFN-γ mRNA表达的动态变化
- 2013年
- 建立并利用鸡白细胞介素6和γ干扰素荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendo-theliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的鸡白细胞介素6和γ干扰素基因转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和腔上囊中IL-6和IFN-γ的分泌水平在所有时间点均显著升高(P<0.05)或极显著升高(P<0.01)。本试验为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础。
- 陈雪锋李恩扩王肖祎陈静胡敬东
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒Γ干扰素实时荧光定量RT-PCR
- SPF雏鸡感染REV后IL-2mRNA表达的动态变化
- 2013年
- 为研究SPF鸡感染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)后白细胞介素2(IL-2)mRNA表达的动态变化,本研究应用荧光定量RT-PCR方法,对SPF鸡感染REV后主要免疫器官的IL-2 mRNA转录水平进行了初步研究。结果显示,与对照组相比,REV感染组鸡的脾脏、胸腺和法氏囊中IL-2基因的表达量在感染后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d和49 d均呈现升高,而且除21日龄、28日龄鸡的脾脏外,均为差异显著(p<0.05)。本研究表明REV感染后可以诱导鸡的机体表达IL-2。
- 李恩扩陈雪锋孔斌胡敬东
- 关键词：SPF鸡禽网状内皮组织增生症病毒白细胞介素-2
