李哲
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：厦门大学医学院抗癌研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向NRP1单克隆抗体对黑色素瘤细胞B16F10的增殖、迁移和凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的研究靶向神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体(NRP1 mAb)对黑色素瘤细胞B16F10增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 SDS-PAGE检测神经菌毛素1单克隆抗体的纯度;蛋白质印迹法、免疫荧光和免疫组化检测神经菌毛素1单克隆抗体的特异性和B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1的表达;四甲基偶氮唑蓝法、划痕实验、Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法检测不同浓度神经菌毛素1单克隆抗体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白质印迹法检测神经菌毛素1单克隆抗体作用后细胞内相关信号蛋白的表达。结果纯化的神经菌毛素1单克隆抗体具有高纯度和特异性,同时B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1高表达。神经菌毛素1单克隆抗体能有效抑制B16F10细胞的增殖和迁移,抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。神经菌毛素1单克隆抗体能显著诱导B16F10细胞凋亡,并呈剂量依赖关系(P<0.05)。抗体作用后B16F10细胞中磷酸化的Akt和ERK1/2表达下调,Bcl-2和Caspase 3蛋白表达下调,Bax蛋白的表达上调。结论纯化的神经菌毛素1单克隆抗体能有效地抑制B16F10增殖,迁移并明显诱导凋亡,其可能通过抑制膜上神经菌毛素1与相关细胞因子结合而减少其介导的PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号转导途径的活化来抑制细胞增殖和迁移,并通过Bcl-2/Bax/Caspase3途径诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用。
- 吕莎李哲王显江王生育杨芸罗芳洪吴婷颜江华
- 关键词：黑色素瘤细胞增殖迁移凋亡
- 靶向肿瘤血管诱发血栓栓塞体系的建立及活性鉴定
- 2014年
- 目的建立一种新型的靶向高效诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子(MF-A6-SA:B-tTF)。方法化学交联技术制备神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素、磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素和生物素-短截型组织因子交联物,凝血因子X活化实验鉴定复合体系活化凝血因子X的活力,荧光显微镜技术和普鲁士蓝染色法同时观察施加外界磁场后复合体系的靶向作用,凝血实验直接观察复合体系引入链霉亲和素:生物素的生物放大效应,体内生物分布实验观察复合体系的安全性。结果成功制备磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素及生物素-短截型组织因子,磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子体系保留有高效激活凝血因子X的活性,与靶点的结合具有靶向性及高效富集性,体内实验证实能安全有效诱发肿瘤血管栓塞。结论成功制备的具有靶向诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子为进一步探索肿瘤血管的靶向治疗奠定基础。
- 王显江王池真陈小丽李哲罗伶俐吕莎梅理祥周娇王生育颜江华
- 关键词：磁流体血管栓塞
- 抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用
- 2014年
- 目的:研究抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用。方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平。细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95%、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleaved caspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱。结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡。
- 曹畅吕莎李哲王显江杨云罗芳洪王生育颜江华史涛
- 关键词：单克隆抗体LOVO细胞株促凋亡作用
