明平刚
- 作品数：23 被引量：48H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化方法的研究进展
- 2015年
- 近年来,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染引起的手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已成为我国现阶段重大的公共卫生问题之一。用疫苗防控EV71感染及HFMD的发生是最经济有效的方法。目前,EV71灭活疫苗研发进展较快,多家研究机构已完成临床Ⅲ期试验。为了获得更高纯度、收率及安全性的疫苗制品,病毒收获液的分离纯化技术十分关键。本文结合现阶段EV71灭活疫苗的生产工艺,对疫苗常用分离纯化方法的研究进展作一综述。
- 肖慧明平刚陈晓琦徐葛林
- 关键词：手足口病肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化
- 高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的制备高效价的抗肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径（肌肉、皮下、腹腔）免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶10^8,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度〉荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。
- 王继麟陈晓琦吴杰明平刚宰家敏郭长福杨京生段凯
- 关键词：肠道病毒71抗血清酶联免疫吸附测定
- 狂犬病疫苗评价
- 徐葛林严家新孟胜利胡巧玲张永振王定明周敦金唐建蓉杨晓明王萍朱凤才肖奇友董关木郑新雄明平刚吴杰
- “狂犬病疫苗评价”课题属于传染病应用研究领域，针对中国狂犬病近几年来呈上升趋势，该课题首次在全国范围内对中国狂犬病高发、低发及无狂犬病地区有代表性地选取5个点，分别采集动物样品，检测分离其中可能存在的狂犬病毒，并对其主要...
- 关键词：
- 关键词：狂犬病疫苗疫病诊断
- 新分离五株狂犬病毒街毒株N和G基因的序列比较和分析
- 目的测定从我国新分离的五株狂犬病毒(RV)街毒株基因序列,分析新流行街毒株的分子流行病学状况。方法利用 RT-PCR 反应从疑似狂犬的犬脑组织内获得 N 和 G 基因 cDNA 的全序列并进行测序。将测序所得结果和已发表...
- 明平刚徐葛林严家新吴杰明贺田周敦金肖奇友杨晓明
- 文献传递
- 1例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊被引量：1
- 2008年
- 目的采用实验室检测方法确诊一例特殊的疑似狂犬病病例。方法利用荧光抗体(FA)试验、双抗体夹心ELISA和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对一例死亡的疑似狂犬病人的脑组织和此脑组织经乳鼠脑内接种传代后的鼠脑组织分别进行检测和分析。结果死亡病人脑组织的直接FA试验和双抗体夹心ELISA检测为阴性,但RT-PCR检测结果为阳性。将该病人脑组织经乳鼠传代后对鼠脑组织用上述三种方法检测的结果均为阳性。对该街毒株的RT-PCR产物中的核蛋白基因序列进行测定,用Mega3.1软件进行分子进化关系分析,证实所分离的街毒株为基因Ⅰ型狂犬病病毒,与以往在该地区所分离的街毒株有较近的遗传关系。结论该病例可确诊为狂犬病死亡病例,其主要和决定性的死因为狂犬病,但并发的肺部感染可能加速了死亡的进程。WHO认为FA技术是狂犬病诊断的金标准,但本病例说明,在某些复杂情况下,只有将多种实验室检测方法联合运用才能确诊狂犬病,而且病毒分离和RT-PCR可能比FA试验更敏感。
- 明平刚徐葛林严家新吴杰任长庆董平国
- 关键词：狂犬病病毒RT-PCR
- 中国狂犬病毒疫苗株CTN-1-V三个代次的GP基因序列分析被引量：8
- 2006年
- 目的分析三个代次CTN-1-V病毒株糖蛋白(GP)基因部分序列,并与代表性街毒株进行比较。方法利用RTPCR反应,从感染了CTN-1-V病毒的小鼠脑内获得GPcDNA的部分片段,并进行序列测定。结果三个代次的CTN-1-V病毒株GPcDNA序列的690个核苷酸与代表性狂犬病毒GP核苷酸相应序列同源性为83.2%～96.8%,氨基酸序列同源性为90.0%～97.4%。CTN1V株三代之间的核苷酸序列几乎相同。结论CTN1V株在传代过程中GP基因结构基本稳定,与中国流行的代表性街毒株的同源性高于aG株和PV株。
- 明平刚孙文徐葛林吴杰杨晓明严家新
- 关键词：狂犬病毒传代基因序列
- 肠道病毒71型灭活疫苗TritonX-100残留检测方法的建立与验证被引量：1
- 2015年
- 目的建立适合于肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液TritonX-100残留检测方法并加以验证。方法使用分光光度法对TritonX-100残留进行检测,并按照《中华人民共和国药典》（2010年版）二部中的相关规定对检测方法进行验证及初步应用。结果本方法在5~50μg/ml浓度范围能定量检测TritonX-100残留量,取不同浓度TritonX-100检测其回收率在85.97%~107.31%,RSD≤4.05%;重复性检测的RSD≤0.25%,中间精密度试验RSD≤3.18%;对检测中影响结果的参数：检测持续时间、检测温度、检测波长和检测试剂苯酚浓度在一定范围内适度变化后,检测理论浓度的TritonX-100,其平均回收率在86.42%~107.80%,RSD≤3.54%;340nm波长扫描PBS、5%苯酚、PBS＋苯酚的A值均〈0.01,TritonX-100及5%苯酚反应物的A值明显高于此值。结论本方法的准确度、精密度、专属性以及耐用性均符合规定,方法准确稳定,可用于对肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液中TritonX-100残留量的检测。
- 陈晓琦王继麟郭长福明平刚张柳涂晶杨邦玲段凯黄佐林
- 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗
- 肠道病毒71型抗原ELISA定量检测方法的建立及应用被引量：8
- 2016年
- 目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原ELISA定量检测方法,用于EV71疫苗生产工艺中抗原定量检测。方法选取抗EV71单克隆抗体作为包被抗体,HRP标记抗EV71多克隆抗体作为酶标二抗,建立EV71抗原ELISA定量检测方法。该方法经系统验证后,应用于定量检测2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的抗原含量。结果验证结果显示,该方法的线性范围为3.125~50.000 U/m L,样品回收率为92.0%~110.0%,变异系数小于8.8%;孵育时间及温度在一定范围内偏差的样品回收率为100.8%~113.8%;检测其他肠道病毒中抗原其A值均小于cut-off值;试剂于37℃孵育3 d后的检测样品回收率为101.4%~112.4%;2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的适用性检测中,抗原回收率为92.1%~114.9%。结论建立并验证EV71抗原ELISA定量检测方法,其准确度、精密度、耐用性均优良,特异性强、稳定性好,适用于不同细胞基质的EV71疫苗及多价手足口病疫苗生产工艺过程的质量控制。
- 陈晓琦王继麟季雅琦郭长福杨明游磊叶程肖慧明平刚张海峰李月影王泽鋆李秀玲申硕
- 关键词：肠道病毒71型抗原酶联免疫吸附试验手足口病
- 新分离5株狂犬病病毒街毒株N和G基因的序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的分析我国新分离的5株狂犬病病毒(RV)街毒株基因序列及分子流行病学状况。方法采用RT-PCR法从疑似狂犬的犬脑组织内获得N和G基因cDNA的全序列并进行测序,将所得结果与已发表的国内外代表性毒株相应基因进行核苷酸和推导氨基酸序列比较。结果5株均含有完整N基因序列,3株含有完整G基因序列。与国内外发表的部分毒株比较,5株街毒N基因的核苷酸同源性在98.1%～99.9%之间,推导氨基酸同源性在99.5%～100%之间。将5株街毒与人用疫苗株3aG、PV株的N基因进行比较,核苷酸同源性在86.2%～86.7%之间,氨基酸同源性在95.1%～95.5%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在89.4%～89.6%之间,氨基酸同源性在98.2%～98.6%之间。3株街毒G基因的核苷酸同源性在98.5%～99.4%之间,推导氨基酸同源性在99.6%～100%之间。将3株街毒与人用疫苗株aG、PV和兽用疫苗株ERA的G基因进行比较,核苷酸同源性在82.8%～83.1%之间,氨基酸同源性在88.0%～90.1%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在86.7%～87.1%之间,氨基酸同源性均为92.0%。结论新分离街毒株基因未发生较大变异,与CTN的同源性高于与aG株和PV株。
- 明平刚徐葛林严家新吴杰明贺田周敦金肖奇友杨晓明
- 关键词：狂犬病N基因G基因
- 狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。
- 明平刚黄莹唐青杜加亮陶小燕严家新扈荣良
- 关键词：狂犬病毒全长CDNA克隆
