吴杰
- 作品数：59 被引量：262H指数：9
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学政治法律更多>>
- 5例狂犬咬伤者暴露后的处置效果观察被引量：2
- 2009年
- 2008年11月16-17日,浙江省淳安县-9月龄狼狗对潘店、鸠岭山两个自然村共7人进行了主动攻击,其中5人有较为明显的伤口暴露：Ⅲ度暴露2人,Ⅱ度暴露3人。该犬被杀死后,由淳安县疾病控制中心送武汉生物制品研究所检测,通过直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法,初步确认狂犬病病毒阳性,同时取犬脑组织,提取病毒RNA,进行RT-PCR检测,并经1日龄昆明乳鼠分离病毒,均确认为狂犬病病毒阳性。
- 章国平钱宝峰孟胜利周剑军郑新雄吴杰徐葛林
- 关键词：狂犬咬伤免疫荧光法
- 狂犬病毒街毒抗原的快速检测被引量：7
- 1998年
- 本实验采用抗狂大病毒糖蛋白及核蛋白单抗包被、以抗狂犬病毒核蛋白单抗酶结合物作抗体夹心法（SEIA），检测21份接种了可疑狂犬病街毒的小鼠脑组织悬液，并与小鼠颅内接种法（MIT）比较，结果表明SEIA阳性者17份，滴度范围为1：100～1：1280，这17汾样品经MIT检测亦为阳性，二者符合率达100％，其中2份样品由于病毒量少，要经盲传后，接种小鼠才发病，而用SEIA检测一开始即呈阳性，且随着传代病毒量的增加而SEIA检测滴度也上升。表明SEIA快速、敏感、特异，可用于狂犬病毒病的实验室诊断。
- 徐葛林朱家鸿吴杰徐雯薛红刚
- 关键词：抗原
- 高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的制备高效价的抗肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径（肌肉、皮下、腹腔）免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶10^8,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度〉荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。
- 王继麟陈晓琦吴杰明平刚宰家敏郭长福杨京生段凯
- 关键词：肠道病毒71抗血清酶联免疫吸附测定
- 柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2018年
- 目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Westernblot(WB)和间接免疫荧光试验(indirectimmunofluorescence assay,IFA)鉴定抗体。结果CVA6VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。
- 陈静陈静李鹏飞吴杰孟胜利申硕
- 关键词：VP1VP2原核表达多克隆抗体
- 狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法。方法将9批狂犬病疫苗样品及含有不同病毒量的CTN病毒悬液在Vero细胞上培养21d,丙酮固定细胞后,采用免疫荧光法检测,同时与小鼠法进行比较;并验证细胞培养法的重复性和灵敏度。结果细胞培养免疫荧光法检测的9批狂犬病疫苗样品结果均为阴性,CTN病毒液均为阳性,与小鼠法检测结果一致。细胞培养法的检测灵敏度可达3.3FFU/ml,重复性良好。结论已建立了狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法 ,该法具有良好的灵敏度和重复性,可用于狂犬病疫苗的灭活验证。
- 汪霞徐葛林孙文唐建蓉毕军吴杰张丽娜卢颖林娜胡巧玲张永振
- 关键词：狂犬病疫苗灭活细胞培养
- 重组人抗狂犬病病毒单抗SO57、SOJB对不同狂犬病病毒毒株中和作用的研究被引量：9
- 2006年
- 用不同的动物模型研究了具有专利的重组人抗狂犬病病毒单克隆抗体SO57、SOJB对不同狂犬病病毒株的中和作用,100IU/kg的SO57能100%保护被中国街毒株SBD攻击的中国仓鼠;首次用小鼠模型模拟人体被狂犬病病毒攻击后的治疗情况,在小鼠被CVS及中国街毒代表株攻击后,SO57与HRIG具有相近的对小鼠的暴露后保护作用;同时结果显示HRIG对SBD株攻击的保护率不能到达100%,仅使用疫苗是不能对感染病毒的小鼠百分之百的保护;SOJB与SO57 1:1联合使用未显示比SO57单独使用更好的保护效果。SO57极有可能在中国代替HRIG用于狂犬病病毒暴露后治疗。
- 贾茜徐葛林赵伟吴杰郑新雄
- 关键词：狂犬病病毒单克隆抗体
- 皮卡佐剂狂犬病治疗性疫苗对暴露后实验动物和人体免疫记忆的效果被引量：4
- 2016年
- 目的检测皮卡佐剂狂犬病疫苗对暴露后实验动物免疫治疗作用和对人的免疫记忆效果。方法模仿人体暴露后免疫，对小白鼠和Beagle犬进行了先感染狂犬病毒野毒株病毒再用不同狂犬病灭活疫苗免疫，观察保护效果；对犬咬伤志愿者用皮卡佐剂狂犬病疫苗免疫2．5年后分离外周血单个核细胞，用流式细胞仪检测干扰素免疫记忆细胞数量。结果在法国巴斯德研究所、武汉生物制品研究所、军事医学科学院军事兽医研究所三次独立实验结果均显示在没有联合应用抗狂犬病免疫球蛋白的情况下，国内外市售人用狂犬病疫苗保护率为0％-30％，皮卡佐剂狂犬病疫苗保护率为70％～100％，统计学分析有极其显著的差异。暴露后志愿者用皮卡佐剂狂犬病疫苗免疫，2．5年后外周血单个核细胞仍能检出显著高的分泌IFN-γ细胞数量，显示对人体免疫特别是细胞免疫记忆反应良好。结论与市售狂犬病疫苗相比，皮卡佐剂狂犬病疫苗对暴露后实验动物具有显著地治疗作用，在人体中用也具有良好的免疫记忆效果。
- 林海祥徐葛林吴杰张守峰扈荣良李烈涛刘芳张师瑞张译
- 关键词：狂犬病疫苗免疫记忆暴露后免疫
- 安徽省阜阳市狂犬病街毒株G基因序列分析被引量：2
- 2009年
- 目的了解安徽省阜阳市流行的狂犬病毒株与人用、兽用狂犬病疫苗株在G基因核苷酸和氨基酸水平的差异,为有效控制我国狂犬病疫情提供初步科学依据。方法在安徽省阜阳市收集犬脑组织162份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和小鼠颅内接种试验(MIT)检测样品带毒情况,对阳性样品用RT-PCR扩增G基因并测序,以TOPALi和DNA Star软件对G基因序列进行分析。结果从安徽省阜阳市162份犬脑样品中检出阳性样品15份;这15株病毒与我国现在使用的各种疫苗株在G基因的核苷酸和氨基酸水平上均存在不同程度的变异,与我国人用疫苗株CTN同源性较高。结论15株狂犬病毒为基因Ⅰ型狂犬病毒,在核苷酸或氨基酸水平上,与疫苗株CTN之间的同源性要高于与其它疫苗株之间的同源性。
- 孟胜利刘红胡岱霖朱理业徐葛林吴杰杨晓明严家新
- 关键词：狂犬病毒G基因
- 1株驴源狂犬病毒的分离鉴定及N、G基因序列分析被引量：2
- 2012年
- 目的对武汉市汉南区新分离的1株驴源狂犬病毒（RABV）街毒株的N、G基因进行遗传学分析，比较其与近年来湖北省及周边地区分离的代表性街毒株以及人用和兽用狂犬病疫苗病毒株之间的差异。方法以直接免疫荧光法检测驴脑组织中的RABV，并将驴脑海马组织研磨后接种乳鼠，观察其发病情况，采用双抗体夹心ELISA法检测驴脑组织及发病乳鼠脑组织悬液中的RABV，然后提取发病乳鼠脑组织RNA，利用RT-PCR扩增RABV的N、G基因，测序后进行遗传学分析。结果在驴脑组织及发病乳鼠脑组织中检出RABV，该病毒株与近年来湖北省及周边地区分离的代表性街毒株以及国内外人用和兽用狂犬病疫苗病毒株相比，N、G基因核苷酸序列的同源性分别为85．7％-99．1％和82．2％-99．7％，推导的氨基酸序列同源性分别为95．6％。99．8％和87．8％～99．4％，与国内分离街毒株核苷酸和氨基酸的同源性高于疫苗株，且与国内疫苗株CTN-181的同源性要高于国外疫苗株。结论该病毒株鉴定为驴源RABV，与湖北省及周边地区分离的代表性街毒株及中国人用狂犬病疫苗株CTN-181处于同一个亚群，有较近的系统进化关系。
- 解庭波俞华吴杰黄思佳徐葛林严家新余滨周敦金
- 关键词：狂犬病毒
- 1例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊被引量：1
- 2008年
- 目的采用实验室检测方法确诊一例特殊的疑似狂犬病病例。方法利用荧光抗体(FA)试验、双抗体夹心ELISA和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对一例死亡的疑似狂犬病人的脑组织和此脑组织经乳鼠脑内接种传代后的鼠脑组织分别进行检测和分析。结果死亡病人脑组织的直接FA试验和双抗体夹心ELISA检测为阴性,但RT-PCR检测结果为阳性。将该病人脑组织经乳鼠传代后对鼠脑组织用上述三种方法检测的结果均为阳性。对该街毒株的RT-PCR产物中的核蛋白基因序列进行测定,用Mega3.1软件进行分子进化关系分析,证实所分离的街毒株为基因Ⅰ型狂犬病病毒,与以往在该地区所分离的街毒株有较近的遗传关系。结论该病例可确诊为狂犬病死亡病例,其主要和决定性的死因为狂犬病,但并发的肺部感染可能加速了死亡的进程。WHO认为FA技术是狂犬病诊断的金标准,但本病例说明,在某些复杂情况下,只有将多种实验室检测方法联合运用才能确诊狂犬病,而且病毒分离和RT-PCR可能比FA试验更敏感。
- 明平刚徐葛林严家新吴杰任长庆董平国
- 关键词：狂犬病病毒RT-PCR
