方王楷
- 作品数：10 被引量：35H指数：3
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- Fascin 1基因在永生化食管上皮细胞癌变中的表达被引量：27
- 2004年
- 背景与目的:Fascin1蛋白为一种与F-肌动蛋白结合的55kDa细胞骨架蛋白,从人畸胎瘤中克隆fascin1基因。食管上皮细胞癌变机制至今不甚明了,为此,对永生化食管上皮细胞株SHEE(Shantouhumanembryonicesophagealepithelialcellline)和由SHEE恶性转化而来的食管癌细胞株SHEEmt之间的差异表达基因在蛋白质和mRNA两个水平上进行检测分析,以期为揭示食管鳞状上皮细胞癌变机制提供新思路。方法:采用双向凝胶电泳技术分析SHEE与SHEEmt之间的蛋白质差异表达情况,以基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)对部分差异表达蛋白质点进行鉴定,以逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionploymerasechainreaction,RT-PCR)对目标基因进行mRNA转录水平上的检测,并对RT-PCR产物进行序列测定分析。结果:在SHEE向SHEEmt的恶性转化中有9个基因出现差异表达,其中fascin1基因在蛋白质水平升高3.64倍,mRNA水平升高16.17倍。结论:fascin1基因可能与SHEE向SHEEmt的恶性转化有关。
- 荣举许丽艳蔡唯佳熊兴东李劲涛方王楷沈忠英李恩民
- 关键词：基因表达食管肿瘤
- 高校基础医学实验教学中节约型试剂管理的思考与实践
- 2021年
- 高校基础医学实验室是人才培养与教学科研的主要场所。实验室试剂种类繁多、数量巨大、成本高昂、管理制度不完善、试剂共享度低,导致试剂浪费是长期以来存在的问题,也存在安全隐患。探索高校基础医学实验室试剂节约型科学规范化管理,有效利用现代移动平台对试剂进行科学绿色可循环管理,以实现试剂共享,减少试剂浪费。
- 谢维洁范冠华孙宏邹海鹰张丕显张丕显许丽艳方王楷
- 关键词：高校
- 酵母单杂交筛选人食管癌细胞系SHEEC中NF-kappa B元件结合蛋白被引量：3
- 2006年
- 背景与目的:从食管癌细胞cDNA文库中筛选能够特异性结合NF-kappaB核心元件的蛋白质分子,探讨NGAL基因的表达调控机制,探寻NGAL基因在食管上皮细胞癌变中过表达的原因。材料与方法:应用酵母单杂交系统,以三重NF-kappaB元件寡聚核苷酸串为诱饵,对人食管癌细胞系SHEECcDNA酵母杂交文库进行筛选,应用DNA测序及生物信息学技术对筛选克隆进行分析。结果:共获得30个阳性克隆,包括4种编码蛋白,2个hypotheticalprotein,2种线粒体基因,3类非编码RNA等。结论:应用酵母单杂交手段筛选出食管癌细胞NF-kappaB核心元件结合蛋白,但只是一种初步的实验,还需进一步研究证实。
- 牛永东许丽艳韩溟方王楷沈忠英李恩民
- 关键词：酵母单杂交食管癌CDNA文库
- 酵母单杂交筛选实验中的关键问题被引量：1
- 2006年
- 目的酵母单杂交系统是研究生物大分子DNA和蛋白质间相互作用的有效手段之一,酵母单杂交筛库实验是获取可以和诱饵序列相互作用的反式作用因子的关键。方法酵母单杂交诱饵质粒pHISi3NF转化YM4271;通过不同浓度3-AT实验,获得酵母单杂交用宿主细胞YM4271pHISi3NF4;大规模筛选人食管癌细胞cDNA文库。结果经筛库后续验证实验证实得到阳性克隆。结论通过准确确定3-AT的工作浓度,有效地完成了酵母单杂交的大规模筛选人食管癌细胞cDNA文库的实验。
- 牛永东许丽艳韩溟方王楷沈忠英李恩民
- 关键词：酵母单杂交阳性克隆CDNA文库
- DSC2在食管癌中的表达、功能与分子调控机制的研究
- 迄今，作为一种常见的消化道恶性肿瘤，食管癌发生发展的分子机制在许多方面依然不甚清楚。Desmocollin 2（DSC2 ）是桥粒胶糖蛋白家族的成员之一，在正常上皮细胞间的粘附中发挥重要作用。有研究报道，DSC2 在结直...
- 方王楷
- 关键词：食管癌细胞移动分子调控机制
- 文献传递
- NGAL及其功能相关蛋白正反馈环促食管癌发生发展分子机制研究
- 李恩民许丽艳谢剑君方王楷杜则澎吴炳礼许镒洧彭裕辉谢仰民吴健
- 中国是世界上最主要的食管癌高发国，全世界每年40余万食管癌病例的一半，甚至有些年份一半以上发生在中国；广东潮汕地区是中国六大食管癌高发区之一，而且还是唯一的沿海食管癌高发区，地区疾病特色十分鲜明。因此，立足潮汕，研究解决...
- 关键词：
- 关键词：食管癌
- NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬被引量：4
- 2009年
- 以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型.5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程.
- 张丕显方王楷许丽艳蒋纪恺沈忠英杜则澎陆晓峰周飞谢剑君吴炳礼崔有宏谢东李恩民
- 关键词：NGAL自噬细胞周期食管癌细胞
- 酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白
- 2005年
- 目的:中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋 白(neutrophilgelatinase assiociatedlipocalin, NGAL)功能不明,籍筛选与之相互作用蛋白, 构筑相互作用图谱,为揭示其功能提供新途径。 方法:利用蛋白质相互作用原理,应用酵母双杂 交技术,构建pGBKT7 NGAL载体,以NGAL 为诱饵,在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相 互作用蛋白的基因。结果:通过酵母交配筛库、 一对一验证和β gal分析筛选出40个阳性克 隆;测序,利用网上数据库(http://www.ncbi. nlm.nih.gov)对序列进行比对,初步确定了31 种基因,其中11种为未知基因,20种为已知基 因。已知基因中含有编码区的有LGALS1、 MT2A、COX1、RNP24、ATP1B3、IGL、IGH VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论: 筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的 基因,这为研究NGAL功能及作用机制提供了 新途径。
- 麦瑞琴许丽艳方王楷韩溟牛永东王子良李恩民
- 关键词：癌基因蛋白相互作用
- NGAL及其正反馈环促进食管癌发生发展分子作用机制的研究
- 李恩民许丽艳吴炳礼方王楷杜则澎张丕显谢剑君沈健吴健谊陈海滨谢仰民许秀娥廖连娣黄
- 中国是世界上最主要的食管癌高发国，全世界每年40余万食管癌病例的一半，甚至有些年份一半以上发生在中国；广东潮汕地区是中国六大食管癌高发区之一，而且还是唯一的沿海食管癌高发区，地区疾病特色十分鲜明。因此，立足潮汕，研究解决...
- 关键词：
- 关键词：食管癌分子标志物肿瘤治疗
- 食管癌细胞中NGAL蛋白受体的研究
- 新近有研究证明,NGAL是一种新型转铁蛋白,经特异受体,介导着一条独特跨膜转铁通路。我们以往研究发现,NGAL在人食管上皮癌变中显著过表达,与癌细胞侵袭性和不良分化密切相关,但作用机制不甚明了。最近我们的研究表明,NGA...
- 方王楷
- 关键词：食管癌选择性剪接
- 文献传递
