张维德
- 作品数：16 被引量：65H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒被引量：17
- 1998年
- 建立了一种适用于检测动物（猪、牛、羊）组织（肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮）和牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫（ＦＭＤ）病毒核酸（ＲＮＡ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。引物对是人工合成的两条２０ｍｅｒ寡核苷酸片段，它们的序列相应于ＦＭＤ病毒结构蛋白ＶＰ１基因后２／３区段，在４个血清型之间基本一致（保守）。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ具有良好的特异性，属该４个血清型的各个毒株都获得了预计长度的ＤＮＡ片段；而相关的小ＲＮＡ病毒科的猪水泡病（ＳＶＤ）和柯赛奇Ｂ５（Ｃｏｘ．Ｂ５）病毒（特异性对照），及未感染的细胞培养物和动物组织（空白对照）都是阴性。与常规检测方法相比，该ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度提高６－１２倍，最高可检测２０ＴＣＩＤ５０（细胞毒）或０．１６～０．３２ＬＤ５０（组织毒）的病毒量，二次扩增还可提高检测灵敏度１００倍。因为直接利用组织样品，检测试验快速简便，可在２４小时内获得结果。应用该方法已检测了２３２份组织样品和５８份Ｏ－Ｐ液样品。
- 朱彩珠卢永干邱孝高赵启祖谢庆阁张维德员美蓉杨福荣张强
- 关键词：RT-PCRFMDV动物组织
- 口蹄疫细胞中和试验的建立及其应用
- 卢永干谢庆阁张维德邱孝高周玉彪赵海燕员美蓉孔令智曹仁张显升董春华
- 该成果建立了检测口蹄疫病的常量和微量细胞中和实验。自1984年以来，应用该检测法检测进出口活畜和疫情调查，检测了黄牛、奶牛、牦牛、猪、绵羊和各种偶蹄类观赏动物血清9350多头，结果可靠。该检测法已列入我国动物检疫规程，达...
- 关键词：
- 应用RT-PCR检测注射灭活疫苗猪组织样品中的口蹄疫病毒被引量：3
- 1998年
- 应用ＲＴＰＣＲ检测注射灭活疫苗猪组织样品中的口蹄疫病毒朱彩珠卢永干邱孝高赵启祖谢庆阁张维德张强员美蓉（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）我们应用的反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术，已检测各种动物的各类组织样品１３００多份，本文报告应...
- 朱彩珠卢永干邱孝高赵启祖谢庆阁张维德张强员美蓉
- 关键词：口蹄疫病毒灭活疫苗
- 口蹄疫病毒O/China/99株多基因植物组成型表达载体的构建及序列分析被引量：6
- 2005年
- 目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X与3C片段经BamHI/SpeI和SpeI/SalI双酶切后,与经BamHI/SalI双酶切后的pUC18质粒大片段连接,得到重组质粒pUC18/P12X3C,pUC18/P12X3C质粒经BamHI/SalI双酶切后的大片段与经同样双酶切的植物表达载体pBin438连接,转化子经酶切、PCR及测序鉴定后,获得包含FMDV O/China/99株P12X3C片段的植物组成型表达载体pBin438/P12X3C,最后通过三亲交配法,将表达载体pBin438/P12X3C导入农杆菌。结论成功构建FMDV多基因的植物组成型表达载体。
- 潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田张维德董金杰吕建亮谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因序列
- 免疫增强剂的作用和应用
- 1989年
- 自1926年法国免疫学家 Gaston Ramon首先发现非特异性免疫增强作用以来,先后有许多学者致力于免疫增强剂的研究。1937年,Freund 等建立佛氏完全佐剂和佛氏不完全佐剂,这两种佐剂具有良好的免疫增强作用。
- 张显升综述张维德审校
- 关键词：免疫增强剂兽药
- 口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究被引量：4
- 2004年
- 利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失。这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处。
- 张永光吕建亮王永录方玉珍蒋守田张维德刘湘涛潘丽刘力宽裴仉福
- 关键词：VP1基因毒株非结构蛋白3传代代次口蹄疫
- 高浓度口蹄疫病毒抗原的稀释试验
- 2004年
- 用预备试验初选的 4种稀释剂a、b、c、d ,对经浓缩培养法繁殖的牛、猪O型口蹄疫病毒进行稀释 ,使其与普通毒 (对照 )浓度相当。然后将其与普通毒一起在不同温度下放置不同时间后 ,测定TCID50 ,并对测定结果进行方差分析和多重比较。结果显示 ,4种稀释剂稀释的病毒TCID50 存在显著差异 ;a和b稀释的病毒TCID50 之间无显著差异 ,但均显著高于c和d稀释的病毒TCID50 ;a和b稀释的病毒与普通对照毒的TCID50 也无显著差异。表明 ,a和b均可用于稀释口蹄疫病毒抗原 ,考虑到成本 ,宜选用b。
- 方玉珍王永录张永光蒋守田张维德
- 关键词：口蹄疫病毒稀释剂
- 商品疫苗对FMDVO／YNGM／97株的免疫效果评价
- 2008年
- 利用血清学方法对我国流行毒株O/YNGM/97进行鉴定,并对其生物学特性和免疫学特性进行了研究。结果显示,该流行毒株为O型口蹄疫病毒(FMDV),其对乳鼠和BHK21细胞的适应性比较好,致病性较强,LD50和TCID50分别为10-6.33/0.2 mL和10-4.75/0.05 mL。VP1基因序列的比较结果显示,O/YNGM/97株与国外FMDV参考毒株O/TAI/1/92的同源性为91.4%,与国内疫苗毒株OZ/93、OA/58和OY/80的同源性分别为79.2%、83.6%和78.9%。用商品疫苗OZ株、OY株口蹄疫O型灭活疫苗和牛羊口蹄疫O-Asia1型双价灭活疫苗免疫的小鼠均可产生较高的免疫抗体,并对流行毒株O/YNGM/97的攻击具有较好的保护性。说明,使用现有商品疫苗完全可以预防该毒株在我国的流行。
- 王占伟刘力宽陈笑娟余四九王永录方玉珍潘丽蒋守田张维德杜进鑫张淑刚张中旺李正丰张昱吕建亮
- 关键词：口蹄疫疫苗流行毒株免疫抗体BALB/C小鼠
- 泛亚型口蹄疫病毒O/China/99缺失毒株全长cDNA分子克隆的构建
- 2008年
- 设计并合成了4条O型口蹄疫病毒(FMDV)泛亚型代表毒株O/China/99基因组的引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连接到pOK12载体上,然后人工合成一段缺失PKs的5′UTR序列,利用两端的限制性内切酶位点,将该基因片段插入到上述载体中。酶切、PCR和序列测定结果显示,O/China/99株全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的核苷酸序列同源性为99.1%。结果表明,O/China/99缺失毒株全长cDNA分子克隆的构建成功。
- 吕建亮张永光王永录潘丽刘力宽方玉珍蒋守田张维德
- 关键词：口蹄疫病毒全长CDNA反向遗传学PKS
- 搭载飞船的口蹄疫病毒株O／Akesu／58的变异研究
- 本试验从病毒的生物学特性、核酸与氨基酸序列以及免疫学特性方面对搭载飞船前后的口蹄疫病毒株O／Akesu ／58进行了研究。结果表明此病毒经飞船搭载后对BHK-21细胞毒力增强,对乳鼠毒力减弱,但核酸和氨基酸序列未发生大的...
- 刘庆军张永光王永录方玉珍蒋守田张维德潘丽王炜孙元
- 关键词：飞船搭载口蹄疫病毒
- 文献传递
