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小鼠β防御素1与甲型流感病毒M2e融合基因表达及其免疫特性研究: 2010年; 目的构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD1-M2e。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光、RT-PCR产物序列分析检测融合蛋白表达情况,最后采用MTT法检测mBD1-M2e融合蛋白刺激淋巴细胞增殖能力。结果经鉴定后证实构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,该细胞培养上清液能刺激淋巴细胞增殖。结论本研究成功构建mBD1-M2e融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,这一结果为进一步研究新型高效通用的流感病毒核酸疫苗奠定了坚实的基础。; 张强丰锋左斌巩天祥李婉宜王保宁李明远; 关键词：甲型流感病毒 Β防御素融合基因重叠延伸PCR 免疫荧光

RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定: 2012年; 目的原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带。结论成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础。; 左斌王欢王海斌曾鸣任来峰李莎郭莲娣李明远; 关键词：原核表达多克隆抗体

HBV干扰DNA损伤应答ATR通路机制的初步研究: 目的探索HBV对ATR信号通路沉默效应中的分子机制,寻找HBV与DNA损伤应答信号通路之间的关键相互作用,从而为抗HBV相关性肝癌的治疗提供新的靶点。方法研究采用Western blot和免疫荧光(IF)技术,BrdU染...; 李明远左斌王欢任来峰李莎郭连娣刘聪; 关键词：乙肝病毒 HBX 细胞周期

清热解毒口服液在小鼠体内抗甲型流感病毒的实验研究被引量：1: 2012年; 目的观察清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用。方法将BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、流感病毒感染模型组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组及清热解毒口服液高、中、低剂量组。小鼠感染流感病毒后ig给药,以生存情况、死亡保护率及延长生命率作为指标,观察清热解毒口服液抗流感病毒的作用。结果清热解毒口服液各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状;死亡保护率为50%～60%;延长生命率为61.56%～73.84%。与阳性药物利巴韦林片及连花清瘟胶囊比较,差异无统计学意义。结论清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内有抗甲型H1N1流感病毒的作用,其机制有待深入研究。; 王保宁张玉芬任来峰左斌李婉宜蒋忠华李明远黄媛莉; 关键词：清热解毒口服液甲型流感病毒 BALB/C小鼠

流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达被引量：1: 2011年; 目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段多肽接头Gly4Ser融合为SP-RB、SP-RBT和SP-RBT,将其分别插入pcD-NA3.1(+)载体,构建质粒,鉴定正确后转染MDCK细胞,RT-PCR、免疫荧光、MTT检测该质粒的表达和分泌。结果融合基因真核表达质粒构建成功,在MDCK细胞中成功表达,转染细胞培养上清能刺激淋巴细胞增殖。结论SP-RB、SP-RBT、SP-RBB真核表达载体成功构建,表达产物能刺激淋巴细胞增值,为流感病毒唾液酸受体结合部位的T、B细胞表位免苗研究提供初步依据,也为流感核酸疫苗的研制奠定了基础。; 罗俊王欢戴军左斌裴德翠丰峰李婉宜邝玉王保宁蒋忠华李虹李明远; 关键词：流感病毒 T细胞表位 B细胞表位免疫荧光技术

抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察被引量：5: 2010年; 目的观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法（1）鸡胚实验：将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.（2）小鼠实验：将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.; 刘冯欢李明远罗俊李婉宜王保宁杨远邝玉左斌马秀英蒋忠华; 关键词：流感病毒A型抗感颗粒 H1N1

真菌漆酶基因研究进展被引量：4: 2009年; 漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,也是木质素生物合成的关键酶之一,目前已发现多种生物能产生漆酶,包括植物、真菌、昆虫、细菌等。其中,以真菌中的白腐菌研究最多。近年来,由于漆酶在生物漂白、农作物秸秆利用以及环境垃圾处理方面具有广阔的应用前景,漆酶研究越来越受到国际上的重视。同时,随着分子生物学相关技术的发展,漆酶研究已深入基因水平,已有多种漆酶基因获得克隆,一些漆酶基因也实现了异源表达。本文概述了真菌漆酶基因研究的最新进展。; 左斌王海斌葛俊贾文祥; 关键词：漆酶多酚氧化酶木质素异源表达

乙肝病毒诱导肝癌发生的基因组稳定性机制被引量：1: 2012年; 0引言原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球高发的恶性肿瘤之一,死亡率高。我国是HCC的高发国家,乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）感染是其首要原因,其重要机制之一是病毒基因组能够整合到宿主细胞的DNA中造成DNA损伤,并影响受损DNA的修复,; 王欢左斌李明远; 关键词：乙肝病毒原发性肝癌 DNA损伤 HBX PRES

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左斌