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pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用被引量：2: 2014年; 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。; 胡东杨小康王婉邢应如王文洋杜昭弘尤其章力陈丽萍吴静张荣波; 关键词：LC3 AG85B 免疫保护

pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化被引量：1: 2015年; 目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。; 杜昭弘王婉戴京京何江王文洋杨小康邢应如尤其穆敏胡东吴静张荣波; 关键词：AG85B 原核表达融合蛋白

分子生物学综合性开放实验的探索与实践被引量：7: 2011年; 为了探索分子生物学实验教学新模式,提高本科生在实验中应用理论知识的能力,设计了从胰腺癌细胞中克隆弹性蛋白酶(Elastase 3A,ELA3A)基因的综合性开放实验,该实验由学生查阅资料,自行设计,在教师的指导下最终完成。从效果来看,不仅使学生对分子克隆技术有了总体的了解和把握,而且激发了他们对这门学科的兴趣和学习主动性。; 王晓春尤其许礼发张超; 关键词：分子生物学实验教学

生物芯片技术及其在遗传病研究中的应用被引量：2: 2008年; 生物芯片技术是一项发展迅速的高新技术。本文阐述了生物芯片的基本概念。其在医学领域有很重要的应用价值,特别是在遗传病研究方面,生物芯片技术现在已开始被应用于在遗传病致病基因定位、遗传病诊断、遗传病基因表达谱研究方面。在不久的将来,生物芯片技术必将成为遗传病诊断的主要技术。; 尤其许礼发; 关键词：生物芯片技术遗传病

生物芯片技术及其在遗传病研究中的应用: 生物芯片技术是一项发展迅速的高新技术。本文阐述了生物芯片的基本概念。其在医学领域有很重要的应用价值，特别是在遗传病研究方面，生物芯片技术现在已开始被应用于在遗传病致病基因定位、遗传病诊断、遗传病基因表达谱研究方面。在不久...; 尤其许礼发; 关键词：生物芯片技术遗传病基因诊断致病基因定位基因表达谱; 文献传递

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