胡东
- 作品数：82 被引量：217H指数：7
- 供职机构：安徽理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学机械工程更多>>
- LC3-LpqH自噬靶向性抗结核DNA疫苗的制备被引量：2
- 2014年
- 目的制备结核杆菌脂蛋白抗原前体LpqH基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的抗结核DNA疫苗,探究其诱导与靶向自噬的效应。方法构建pCMV-LpqH与pCMV-LC3-LpqH重组质粒并转染RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC-3与LC3-LpqH的表达。转染pCMV-LpqH或pCMV-LC3-LpqH至GFP-LC3-RAW264.7细胞,免疫荧光法观察LC3-LpqH蛋白的定位。结果细胞转染pCMV-LpqH后LC-3表达水平增高。pCMV-LC3-LpqH在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性,并且LC3-LpqH与GFP-LC3体外表达后共定位于自噬体上。结论 pCMV-LC3-LpqH的表达能够增强自噬,并将LpqH抗原靶向定位于自噬体,为设计新型抗结核疫苗提供了新思路。
- 胡东杨小康吴静王干勋王文洋祁真玉陈功张荣波
- 关键词：自噬结核分枝杆菌LC3疫苗
- 细菌内毒素免疫调节过敏性哮喘的流行病学调查及实验研究
- 本文对细菌内毒素免疫调节过敏性哮喘的流行病学调查及实验进行了研究。文章选择安庆、淮南地区2986名8或12岁在学儿童为调查对象，向其父母发放哮喘标准调查表，内含ISAAC核心问题，动态浊度法检测儿童床铺尘内毒素含量，RA...
- 胡东
- 关键词：过敏性哮喘免疫调节
- 文献传递
- 外周血中3种标记的Tregs细胞表达频率比较
- 2015年
- 目的 :分析CD4+CD25High、CD4+CD25+CD127Low/–、CD4+CD25+Fox P3+3种标记的Tregs细胞比例的相关性,探讨不同荧光素组合标记Tregs细胞的鉴定效果。方法:随机抽取健康体检者60例,平均分成2组(Ⅰ组、Ⅱ组),Ⅰ组用CD25-APC/CD127-PE/CD4-FITC三色抗体标记,Ⅱ组用CD25-PE/CD127-Alexa Fluor禄R647/CD4-Per CP-Cy5.5标记;另选Ⅰ组10例,用CD25-FITC/Fox P3-PE/CD4-Per CP-Cy5.5/CD127-Alexa Fluor禄R647四色抗体标记;流式细胞仪检测,Cell Quest软件分析,比较Tregs细胞结果差异,分析Fox P3+与CD127Low/–的相关性。结果:CD25+CD127Low/–Tregs细胞Ⅱ组(7.89±1.37)%明显高于Ⅰ组(6.37±1.83)%(P=0.001),2组中CD4+CD25High和CD4+CD25+CD127Low/–的相关系数(r)分别是0.944、0.916;(94.08±1.93)%的CD25+Fox P3+细胞低表达CD127,CD25+Fox P3+和全血检测CD25+CD127Low/–的Tregs细胞有较高的相关性(r=0.846),结果差异不明显(P=0.774)。结论:CD25+CD127Low/–是Tregs细胞特异性标志,适合临床应用。全血检测Tregs细胞,用CD25-APC、CD127-PE、CD4-FITC荧光素组合检测结果与Fox P3相关度高。
- 邢应如孟阿娜胡东张荣波
- 关键词：调节性T细胞CD127FOXP3流式细胞仪
- 6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)抑制巨噬细胞的自噬并促进BCG的增殖被引量：1
- 2017年
- 目的 6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)能够促进卡介苗(BCG)的增殖,巨噬细胞的自噬功能能有效杀伤BCG,研究ESAT6与自噬的相互作用,为揭示ESAT6介导的免疫逃逸提供实验依据。方法分别观察对照质粒pCMV-HA和重组质粒pCMV-HA-ESAT6转染以及Earle平衡盐溶液(EBSS)处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞中BCG的生长情况,Western blot法检测转染pCMV-HA-ESAT6的RAW264.7细胞0、8、12、24、32 h后,微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白水平。转染pCMV-HA、pCMV-HA-ESAT6、氯喹(CQ)单独处理和CQ与pCMV-HA-ESAT6转染联合处理条件下,Western blot法检测LC3的水平,Lyso Tracker Red染料法计数溶酶体数量,观察罗琴培养基上BCG的情况。结果 pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中BCG的生长旺盛,而EBSS处理组生长受抑制;在0、8、12、24、32 h,pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转换逐渐增强;与对照组相比,溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red染色法显示pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的溶酶体较多且体积大,但后三组间均无显著性差异;pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的BCG生长旺盛。结论 ESAT6抑制RAW264.7细胞内的自噬水平,并且能够促进RAW264.7细胞中感染BCG的生长。
- 徐雪维赵润鹏张荣波吴静胡东邢应如倪升发铁保贤
- 关键词：巨噬细胞自噬
- 基于TGGA数据库构建肺腺癌自噬相关基因预后风险模型
- 2022年
- 目的基于TCGA数据库,结合人类自噬数据库构建预测肺腺癌患者预后的风险模型,探讨自噬相关基因预后风险模型对肺腺癌患者预后的预测性能及与免疫微环境的相关性。方法从癌症基因组图谱数据库下载肺腺癌患者临床信息和转录组数据,结合人类自噬数据库筛选出232个自噬相关基因。通过Cox回归分析筛选出4个独立与预后相关的自噬基因,并采用风险评分构建肺腺癌预后预测模型,用ROC曲线评价预测模型性能。使用ESTIMATE和CIBERSORT在线网站(https://cibersort.stanford.edu/)探索风险评分与肿瘤免疫微环境之间的关系。结果肺腺癌中有30个差异表达的自噬相关基因,其中4个自噬基因(BIRC5、ERO1A、ITGB4、NLRC4)具有预测患者预后的功能。依据风险评分进行分组,Kaplan-Meier分析表明高风险组生存率低于低风险组(P<0.0001)。ROC曲线表明风险评分模型判断肺腺癌预后的准确性(AUC=0.757)。ESTIMATE和CIBERSORT分析提示风险评分模型与肿瘤微环境中的多个免疫细胞亚群浸润相关。结论自噬相关基因预后风险模型较临床数据能更好地预测肺腺癌患者预后。在高风险组中,CD4+记忆静止细胞可改善肺腺癌患者预后。
- 王雪芹刘亚锋吴静吴静邢应如邢应如李丹婷谢军丁选胜胡东
- 关键词：肺腺癌自噬免疫细胞生存预后
- 自噬对先天性免疫的调控被引量：5
- 2012年
- 自噬又称为Ⅱ型程序性细胞死亡方式,是运输细胞质成分进入溶酶体的蛋白降解系统[1-2]。主要清除细胞内受损细胞结构、衰老的细胞器以及不再需要的生物大分子等,自噬机制失灵将导致细胞异常甚至死亡[3]。通过对酵母遗传学筛选的研究,已发现一些关键的自噬分子,
- 胡东张荣波吴静
- 关键词：先天性免疫自噬细胞死亡方式酵母遗传学蛋白降解细胞结构
- 一种自噬靶向性核酸疫苗
- 本发明涉及医药生物学技术领域。本发明公开了一种自噬靶向性核酸疫苗及其制备方法和应用，本发明构建了LpqH DNA与编码微管相关蛋白轻链-3（LC3）基因相融合的自噬靶向性疫苗，该疫苗能够将抗原运送至自噬体，并且能够增强T...
- 张荣波胡东吴静杜昭弘
- 文献传递
- SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM和Rab7的相互作用
- 2016年
- 目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系。用3种SapM的突变体SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系。结果 si Rab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用。结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用。
- 胡东王婉赵润鹏徐雪维邢应如倪升发徐从景铁保贤张荣波吴静
- 关键词：自噬
- 稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株的建立被引量：5
- 2015年
- 目的建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞。方法构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点。结果成功构建了慢病毒p LV-CMV-RFPGFP-LC3,经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7细胞;荧光显微镜和流式细胞术显示RFP和GFP荧光率均达到100%,饥饿处理后自噬斑点显著增多。结论成功建立稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台。
- 王婉张庆赵润鹏徐雪维邢应如张荣波吴静胡东
- 关键词：自噬慢病毒RAW264.7细胞
- pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用被引量：2
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。
- 胡东杨小康王婉邢应如王文洋杜昭弘尤其章力陈丽萍吴静张荣波
- 关键词：LC3AG85B免疫保护
