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孟庆美: 作品数：11 被引量：43H指数：5; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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rmlA基因缺失影响禽致病性大肠杆菌的生物被膜形成: 构建禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)rmlA基因缺失株,研究该缺失株的生物学特性[1].利用Red重组系统构建rmlA缺失株[2,3]；比较野生株与缺失株在...; 韩月韩先干白灏王少辉孟庆美丁铲于圣青

禽致病性大肠杆菌毒力基因F11分布的检测及其表达被引量：1: 2013年; 为研究禽致病性大肠杆菌F11毒力基因的功能,根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力基因F11的序列,设计合成特异性引物,通过PCR方法检测了毒力基因F11在禽致病性大肠杆菌中的分布,并以IMT5155基因组DNA为模板扩增F11基因片段,将其定向克隆到pET-28a(+)载体中构建原核表达质粒pET-28a-F11,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,纯化表达产物,制备免疫血清进行黏附抑制试验。结果显示,F11基因在禽致病性大肠杆菌中的分布率为22.2%(10/45),主要分布于大肠杆菌B2进化群中。利用F11免疫血清进行的Western-blot分析表明,F11可以在实验室培养条件下正常表达。黏附抑制试验显示,F11免疫血清可以抑制禽致病性大肠杆菌IMT5155对宿主细胞的黏附,表明F11可能在禽致病性大肠杆菌感染过程中发挥作用。; 孟庆美王少辉任建鸾诸葛祥凯陆承平戴建君; 关键词：禽致病性大肠杆菌

禽致病性大肠杆菌gspL基因缺失株构建及生物学特性被引量：3: 2015年; 【目的】研究gsp L基因缺失对禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)生物学特性的影响。【方法】利用Red重组方法构建禽致病性大肠杆菌DE17株的gsp L缺失株;分析野生株与缺失株的生长特性、黏附和入侵DF1细胞的差异;采用荧光定量PCR的方法比较野生株和缺失株毒力基因转录水平的变化;比较野生株与缺失株的半数致死量(LD50)差异。【结果】gsp L缺失不影响DE17的生长特性,但其黏附和入侵DF1细胞能力显著下调。荧光定量PCR检测结果表明,缺失株毒力基因lux S,pfs,fyu A和iss转录水平明显上调,tsh的转录水平明显下调,而vat,ibe A,stx2f和omp A的转录水平无显著变化;LD50检测结果表明,缺失株比野生株毒力增强了12倍。【结论】gsp L基因的缺失不影响禽致病性大肠杆菌的生长特性,但能减弱其黏附和入侵能力,且可以正调控禽致病性大肠杆菌部分毒力基因的转录水平,推测gsp L基因可能与APEC对宿主的致病性有关。; 范国博韩月张宇曦韩先干王少辉白灏孟庆美祁克宗丁铲于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌

沙门菌毒力基因多重PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2015年; 通过建立沙门菌不同毒力岛基因的多重PCR,对沙门菌毒力基因进行快速、灵敏的检测。根据GenBank中的序列设计合成16对引物,优化反应条件,建立了4组多重PCR,通过倍比稀释模板检测多重PCR的敏感性。利用建立的多重PCR对124株沙门菌进行毒力基因分布检测,验证多重PCR的实用性。电泳结果显示,多重PCR体系可有效扩增出每个目的基因。4组多重PCR体系的DNA敏感性分别为50、10、50、100pg;菌液敏感性分别为1×104、1×104、1×105、1×105 CFU。多重PCR与单基因PCR检测沙门菌毒力基因的结果一致。结果表明,本研究建立的多重PCR可有效检测沙门菌毒力岛基因,特异性强,灵敏度高,耗时短;还可用于沙门菌毒力基因的鉴定及分子流行病学调查。; 杨登辉王少辉汪洋赵益超韩先干孟庆美刘新丁铲程相朝于圣青; 关键词：沙门菌毒力基因多重PCR

VI型分泌系统2核心组分VgrG对禽致病性大肠杆菌致病性的影响被引量：6: 2016年; 【目的】构建禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)VI型分泌系统2(Type VI secretion system 2,T6SS2)结构基因vgrG缺失株,研究其对APEC生物学特性及致病性的影响。【方法】通过Red同源重组方法构建DE719菌株vgrG基因缺失株,并利用低拷贝质粒pSTV28构建互补株。比较分析野生株、缺失株与互补株的生长特性、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力、动物致病力等差异。【结果】vgr G基因缺失不影响DE719的生长速度、运动能力及生物被膜形成能力。致病性试验表明缺失vgrG导致体内定殖能力及致病力显著下降,然而对DF-1细胞的黏附能力增强。【结论】T6SS2核心组分VgrG在APEC感染过程中发挥重要作用,为了解APEC的致病作用提供参考。; 刘新王少辉孟庆美韩先干许漩杨登辉丁铲彭大新于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌

Ⅵ型分泌系统2核心组分ClpB对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响被引量：5: 2016年; 构建禽致病性大肠杆菌(APEC)Ⅵ型分泌系统2(T6SS2)clpB基因缺失株、互补株,研究clpB基因对APEC生物学特性及致病性的影响。采用Red同源重组系统构建APEC clpB基因缺失株,并利用低拷贝质粒pSTV28构建互补株。比较分析野生株、缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力、胞内存活能力、动物致病力等生物学特性的差异。结果显示,clpB基因缺失不影响APEC的生长速度和黏附侵袭能力。然而,缺失ClpB导致APEC运动能力降低、生物被膜形成能力升高、HD-11胞内存活能力降低、体内存活能力及致病力降低。本研究分析了T6SS2核心组分Clp B的作用,为阐述APEC T6SS2致病作用提供了参考。; 王栋王少辉徐凤孟庆美刘新许漩杨登辉韩先干丁铲张焕容于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌

禽致病性大肠杆菌毒力基因多重PCR方法的建立和应用被引量：19: 2014年; 【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank公布的基因序列,设计合成18对特异性引物,通过条件优化,建立四组多重PCR体系,并通过模板倍比稀释检测各组多重PCR的灵敏性。利用多重PCR检测100株APEC毒力基因的分布,验证多重PCR方法的可行性。【结果】根据PCR扩增片段大小判定,上述四组多重PCR体系均能同时扩增出该组中的各个毒力基因,且灵敏度分别为:103CFU、103CFU、105CFU、105CFU细菌和1ng、1ng、10ng、10ng DNA。100株APEC的毒力因子检测结果显示,多重PCR和单基因PCR结果一致。【结论】建立的四组多重PCR方法能够简便、快速地检测禽致病性大肠杆菌的毒力基因,可用于毒力基因的鉴定以及流行病学调查。; 孟庆美王少辉韩先干韩月丁铲戴建君于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌毒力基因多重PCR

一种大肠杆菌O1、O2、O18、O78血清型检测试剂盒及其检测方法: 本发明属于生物检测技术领域，涉及一种大肠杆菌O1、O2、O18、O78血清型检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒引物组的正向引物为高度保守的大肠杆菌O抗原合成相关基因序列，反向引物为基于O1、O2、O18、O78血清...; 于圣青王少辉孟庆美韩先干丁铲

一种大肠杆菌O1、O2、O18、O78血清型检测试剂盒及其检测方法: 本发明属于生物检测技术领域，涉及一种大肠杆菌O1、O2、O18、O78血清型检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒引物组的正向引物为高度保守的大肠杆菌O抗原合成相关基因序列，反向引物为基于O1、O2、O18、O78血清...; 于圣青王少辉孟庆美韩先干丁铲; 文献传递

禽致病性大肠杆菌Ⅵ型分泌系统2evfC基因缺失株的构建及其生物学特性分析被引量：7: 2016年; 为了分析VI型分泌系统2(Type VI secretion system2,T6SS2)核心组分Evf C对禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)生物学特性及致病性的影响,本研究采用Red同源重组系统构建APEC evf C基因缺失株,并利用低拷贝质粒p STV28构建互补株。然后比较分析野生株、缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力、胞内存活能力、动物致病力等生物学特性差异。结果表明,evf C基因缺失不影响APEC的生长速度、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力。然而,缺失evf C可导致APEC在HD-11胞内存活能力及对雏鸭的致病力降低。本研究为阐述APEC T6SS2的致病作用提供了参考依据。; 王栋王少辉孟庆美刘新许漩杨登辉韩先干丁铲张焕荣于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌

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