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培养基中能量底物对猪胚胎发育的影响被引量：2: 2010年; 旨在探讨丙酮酸和乳酸对猪(Susscrofa)胚胎早期发育的影响,将NCSU-23培养基中的5.56mmol/L葡萄糖替换为0.2mmol/L丙酮酸、5.7mmol/L乳酸,并将此培养基命名为mNCSU-23。根据实验设计,孤雌胚及核移植胚转移到mNCSU-23或NCSU-23中培养。激活第2天统计孤雌胚及核移植胚中的5～8细胞胚胎数。激活第6天统计孤雌胚及核移植胚囊胚形成率及囊胚细胞数。实验结果表明,mNCSU/NCSU处理组的5～8细胞胚胎数及囊胚数显著高于对照组(P<0.05);单纯使用mNCSU培养猪胚胎时,囊胚率最低,发育结果最差(P<0.05)。本研究证实,在体外培养前两天,用乳酸和丙酮酸代替培养基中的葡萄糖对胚胎发育有利。; 付博房庆昌任亮汪亮孙洪涛别墅马红刘娣; 关键词：孤雌胚

民猪脂蛋白脂酶基因在冷诱导后表达变化的研究被引量：3: 2011年; 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是动物分解代谢的限速酶,是影响脂肪代谢通路中的一个重要基因。本研究将LPL基因作为影响民猪抗寒特性的候选基因,对其在心脏、肝脏、胃、脾脏、肾脏、肺脏、大肠、小肠、子宫、卵巢、背肌、腿肌、脂肪共计13个组织内的表达情况和低温冷诱导后在民猪肌肉组织内的表达变化情况进行了分析。结果表明,LPL基因在所检测的13个组织中均有表达,但表达量存在差异,心脏、背肌、腿肌、脂肪组织中的表达量较高,子宫和卵巢组织的表达量较低;LPL基因在民猪被冷诱导后表达水平无显著变化。; 张冬杰刘娣汪亮别墅孙洪涛杨国伟张海波; 关键词：民猪 LPL基因

民猪NANS基因的克隆、表达与冷诱导分析: 民猪作为我国优良的地方品种之一，除了具有较高的繁殖性能外，其较强的抗寒性也是它不同于其他地方猪种的一个显著特征。目前对民猪的抗寒机制尚缺乏深入系统的理论研究，使得人们无法回答“为什么民猪抗寒性强”这一问题。MANS基因C...; 别墅张冬杰孙洪涛汪亮刘娣; 关键词：民猪表达量

民猪ZFAND5基因的克隆与真核表达载体构建被引量：1: 2011年; 根据NCBI上已公布野猪的ZFAND5序列,设计上下游引物,PCR扩增,构建真核表达载体,酶切鉴定并测序。克隆并分析ZFAND5(Zinc finger,AN1-type domain5)基因序列,构建ZFAND5基因的真核表达载体,为转染细胞提供基础。通过研究首次获得了民猪的ZFAND5基因的全序列及其完整的cDNA序列,对测序结果比对后发现,ZFAND5基因的2个外显子中共发现4个点突变,其中643点碱基突变造成HhaⅡ酶切位点的缺失,对所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ZFAND5酶切鉴定并测序,证明插入片段长度为262bp,与预期结果一致。初步研究了ZFAND5基因功能及多态性,成功构建pcDNA3.1(-)-ZFAND5真核表达载体,为细胞水平上的表达和功能研究奠定了基础。; 孙洪涛别墅张冬杰汪亮刘娣; 关键词：民猪多态性真核表达载体

猪TPST1基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建被引量：1: 2011年; 酪氨酸硫化转移酶(Tyrosylrotein sulfotransferase,TPST)在酪氨酸硫化修饰过程中起调节作用。试验参照人、鼠、牛等动物的TPST1 mRNA全长序列设计引物,通过电子克隆结合RT-RCR的方法首次克隆获得包括完整CDS区的猪TPST1基因cDNA序列(HQ439987),分析其核苷酸序列及其编码蛋白质分子结构特征。结果表明,猪TPST1序列全长1 543 bp,包含1 113 bp的完整开放阅读框,编码370个氨基酸。多序列比对和系统进化分析表明,该基因编码蛋白质与牛(97.6%)、小鼠(96.8%)、大鼠(97%)、人(97.03%)等物种TPST1蛋白质具有较高的一致性。蛋白质序列预测分析发现,猪TPST1氨基酸序列理论等电点(pI)为9.0,相对分子质量(MW)为42.13 ku。; 别墅孙洪涛张冬杰汪亮刘娣; 关键词：民猪

冷诱导下民猪磷酸葡萄变位酶基因的表达变化被引量：3: 2011年; 磷酸葡萄变位酶(PGM)是糖代谢过程中的一个关键酶,为了研究其表达变化,研究采用RT-PCR和Real-time PCR方法,对PGM在大肠、腿肌、肺脏、脂肪、心脏、脾脏和肝脏组织的表达水平以及冷诱导前后民猪骨骼肌内PGM mRNA的表达变化进行了研究。结果表明:在所检测的7个组织中除大肠外其余组织PGM均高水平表达,而且冷诱导后PGM mRNA的水平出现了明显的下降。; 张冬杰刘娣汪亮别墅孙洪涛杨国伟; 关键词：民猪 RT-PCR

冷应激后民猪肝素结合性表皮生长因子基因表达研究被引量：1: 2011年; 肝素结合性表皮生长因子(hepafin-binding epidermal growth factor-like,HB-EGF)是表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)家族的成员之一。本研究采用Real-time PCR分析了在民猪冷诱导后该基因在骨骼肌内的表达变化情况。结果表明,低温组(-20℃)的HB-EGF基因的表达水平与常温组(10℃)相比出现了极显著下降(P<0.01)。据此推测,冷应激抑制了HB-EGF基因的表达,也间接抑制了民猪的正常生长。; 张冬杰刘娣汪亮别墅孙洪涛杨国伟; 关键词：民猪冷应激 HB-EGF REAL-TIMEPCR

民猪Y-box结合蛋白基因的克隆、表达以及冷刺激对其表达方式的影响被引量：7: 2011年; 为了探讨Y-box结合蛋白(YB1)是否参与哺乳动物的冷适应反应,本研究采用RT-PCR和Real-time PCR的方法克隆测序了民猪YB1基因的序列,检测了该基因在大肠、腿肌、肺脏、脂肪、心脏、脾脏和肝脏组织的表达情况,比较了该基因在冷刺激13d后常温组((10±2)℃)和冷刺激组((-20±3)℃)个体的骨骼肌组织内的表达变化。结果表明,民猪的YB1基因完整的CDS区长975bp,编码325个氨基酸,具有1个高度保守的冷休克域,存在多个磷酸化位点,不包含任何跨膜区域,是一种存在于细胞质中的蛋白质。组织表达谱表明YB1基因在所检测的7种组织内均高水平表达。该基因在被冷刺激13d后,在腿肌内的表达水平出现显著下降(P<0.05)。冷刺激造成了YB1基因转录发生了变化。; 张冬杰刘娣汪亮张旭别墅孙洪涛杨国伟; 关键词：民猪冷刺激

利用Affymetrix芯片分析民猪冷应激后肌肉组织的基因表达谱被引量：5: 2011年; 冷应激可引起动物生产性能下降,诱发多种疾病,甚至造成死亡。民猪是我国北部地区特有的一个抗寒品种,为了研究冷应激下基因的表达调控机制,本研究利用Affymetrix猪基因芯片对民猪冷应激后肌肉组织内表达发生变化的基因进行了高通量的检测。结果,共检测到差异基因34个,其中下调表达的基因27个,上调表达的基因7个。在下调表达的基因中有7个(OAS1、IRG6、ISG20、DDX58、IFITl、ISG15、CXCL9)与干扰素诱导相关,1个(FST)与生长性状相关,2个(MX1、PG-2)与抗病毒有关,2个(S100A9、Numb)与细胞生长和凋亡有关;上调表达的基因功能还不清楚,推测它们可能与提高机体的抗寒性有关。对其中5个基因进行了Real-time PCR分析,证实它们都受到了温度的调节,与芯片检测结果吻合。结果提示,重度冷应激会造成机体免疫力下降,生长减缓。; 张冬杰刘娣别墅孙洪涛汪亮王文涛何鑫淼; 关键词：民猪冷应激 REAL-TIMEPCR

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孙洪涛