姜德玉
- 作品数：6 被引量：10H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 布鲁菌BMEI1829基因的原核表达、蛋白纯化及动物免疫试验被引量：3
- 2010年
- 利用PSORTb及CELLO生物学软件对布鲁菌16M菌株基因组序列进行分析,预测其外膜蛋白基因序列;选取BMEI1829基因进行PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)连接,转入E.coliBL21(DE3)感受态细胞;IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定目的蛋白的表达;经His-TrapTMHP纯化,免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测特异性抗体。结果表明,BMEI1829蛋白在原核表达系统中成功表达,纯化后蛋白免疫Balb/c小鼠可产生特异性抗体,抗体亚型分布以IgG1、IgG2b为主,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 赵晓燕朱亮姜德玉高啸段越强王希良李培锋
- 关键词：布鲁菌原核表达
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价被引量：1
- 2010年
- 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。
- 姜德玉刘坤张伟张伟周朋李君丽王希良
- 关键词：糖蛋白D免疫原性中和活性
- 淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达被引量：3
- 2010年
- 目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。
- 张伟张伟刘坤姜德玉赵莉群李君丽于三科
- 关键词：淋球菌原核表达
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达被引量：3
- 2010年
- 以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化E.coilDH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达HSV-2 gD蛋白,为下一步的工作奠定了基础。
- 姜德玉刘坤赵晓燕张伟李君丽王希良于三科
- 关键词：糖蛋白D
- HSV-2 gD融合gB CTL表位重组蛋白的原核表达及免疫原性评价
- 2011年
- 为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达载体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,His TrapTMHP柱纯化目的蛋白并免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测血清抗体效价,结果显示重组蛋白在大肠埃希菌中得到了高效表达,该重组蛋白具有较好的免疫原性。
- 李君丽刘坤姜德玉张伟王希良于三科
- 关键词：HSV-2糖蛋白DCTL表位原核表达免疫原性
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B的表位筛选与鉴定及糖蛋白D的真核表达
- Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一种常见而古老的性传播疾病——生殖器疱疹,其发病率在性病中仅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11种糖蛋白中gD能诱导产生相对较高的中和抗...
- 姜德玉
- 关键词：糖蛋白D真核表达
- 文献传递
