刘雪萍
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响
- 2019年
- 目的探讨Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响。方法设立Rab26质粒过表达组及Rab26 siRNA组,培养H446细胞,分别将含有Rab26过表达质粒和Rab26 siRNA瞬时转染H446细胞,同时设立空白对照组。48 h后,流式细胞仪检测转染效率,同时检测每组细胞中Rab26在mRNA及蛋白水平表达情况; MTT检测每组细胞的增殖情况,划痕试验观察每组细胞迁移的速度。结果Rab26过表达质粒组转染效率为(76.8±4.3)%,Rab26 siRNA组转染效率为(79.5±3.57)%,均为有效转染;转染48 h后,发现Rab26质粒过表达组中Rab26在mRNA和蛋白水平均较空白对照组表达水平显著上调(P<0.05),siRNA组结果显示Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05); MTT检测结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞活力分别为(56.4±3.23)%、(100±4.31)%; Rab26质粒过表达组细胞活力分别为(42.5±3.59)%、(62. 3±2. 97)%; Rab26 siRNA组细胞活力分别为(75±3. 86)%、(123.4±5.66)%,即Rab26质粒过表达组细胞活力较空白组显著降低(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞活力较空白组显著升高(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的增殖;划痕实验结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞迁移率分别为(0.53±0.03)μm/min、(0.32±0.04)μm/min; Rab26质粒过表达组细胞迁移率分别为(0.21±0.04)μm/min、(0.22±0.04)μm/min; Rab26 siRNA组细胞迁移率分别为(0.61±0.02)μm/min、(0.42±0.03)μm/min,即Rab26质粒过表达组细胞迁移率较空白组显著较少(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞迁移率较空白组显著增加(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的迁移。结论 Rab26可抑制小细胞肺癌H446细胞的增殖和迁移,故调控Rab26的表达有望成为小细胞肺癌治疗的新靶点。
- 陈伟李华唐心蔚刘雪萍
- 关键词：小细胞肺癌H446增殖迁移
- 新型纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的作用被引量：1
- 2013年
- 目的研究纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖和凋亡作用。方法设计合成5'端标记Cy3的Bcl-xlASON,由纳米载体Ac-αCD携带。实验分3组:纳米载体携带的Bcl-xl ASON组(ASON-NPs组)、单纯纳米载体组(NPs组)和空白对照组,分别使用纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl ASON、纳米载体Ac-αCD和培养液处理RPASMCs 48 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对纳米载体携带的Bcl-xl ASON的摄取情况;RT-PCR、Western blot检测Bcl-xl的mRNA和蛋白表达;MTT检测处理后细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果激光共聚焦显微镜下可见ASON-NPs组细胞质内大量呈颗粒状均匀分布的红色荧光物质,空白对照组和NPs组细胞细胞质内未见红色荧光物质;ASON-NPs组处理的RPASMCs的Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著低于空白对照组和NPs组(P<0.05);ASODN-NPs组、NPs组、空白对照组细胞抑制率分别为:(53.61±3.02)%、(6.30±1.90)%、(1.40±0.62)%,凋亡率分别为:(53.04±2.09)%、(10.98±2.03)%、(2.19±0.11)%、ASON-NPs组和NPs组细胞抑制率、凋亡率均显著高于空白对照组(P<0.01),ASON-NPs组均显著高于NPs组(P<0.01)。结论纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸能被RPASMCs有效摄取,从而抑制其增殖,促进凋亡。
- 刘雪萍贺斌峰陈华萍孙欢杨俊俊魏征华窦寅王关嵩
- 关键词：BCL-XL反义寡核苷酸肺动脉平滑肌细胞
- miR-675调控低氧诱导肺动脉平滑肌细胞的增殖
- 2016年
- 目的探讨miR-675对低氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的调控作用及相关机制。方法低氧(1%O2)处理PASMCs 48 h,利用Real time-PCR检测0、6、12、24和48 h时各个时相点miR-675的表达水平,应用Western blot检测低氧处理PASMCs 48 h后靶基因REPS2蛋白的表达情况。先合成miR-675抑制剂(inhibitor)再将其和阴性对照(NC)转染PASMCs细胞,24 h后再进行低氧处理从0h至48 h,应用MTT法检测0、12、24、48 h时细胞的活力,并检测REPS2蛋白的表达状况。构建野生型和突变型REPS2 3'UTR插入p MIR-REPORTTMluciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染PASMCs细胞,之后将miR-675 inhibitor和NC分别转染PASMCs细胞,利用双荧光素酶报告基因检测活性。在常氧下先分别转染miR-675 inhibitor或模拟物(minic)48 h,再检测PASMCs中REPS2的表达水平。结果随着低氧处理时间的延长,miR-675在PASMCs细胞中的表达水平逐渐增高(P<0.05)。而与对照组比较,REPS2蛋白在低氧处理的PASMCs细胞中表达显著下调(P<0.05)。miR-675 inhibitor组在24 h和48 h的细胞活力显著低于对照组和miR-NC组(P<0.01)。荧光素酶报告基因结果说明REPS2是miR-675的靶基因。在常氧环境上调miR-675可显著下调REPS2蛋白表达,而在常氧和低氧环境下抑制miR-675的水平可明显升高REPS2蛋白表达。结论 miR-675通过下游靶基因REPS2调控低氧诱导的PASMCs的异常增殖,可能是低氧肺动脉高压、肺源性心脏病等疾病治疗的潜在靶点。
- 王贝诺刘雪萍张君国贺斌峰
- 关键词：低氧肺动脉平滑肌肺血管重构增殖
- 用于预防或治疗肺癌的制剂及其制备方法与应用
- 本发明涉及一种用于预防或治疗肺癌的制剂及其制备方法与应用。所述制剂包含式I的pH响应性环糊精衍生物、聚乙烯亚胺（PEI1800）和SEQ ID NO:1所示的反义寡核苷酸。本发明所述的制剂在包被时添加PEI1800，通过...
- 王关嵩陈华萍张建祥贺斌峰魏征华王长征刘雪萍
- 用于预防或治疗肺癌的制剂及其制备方法与应用
- 本发明涉及一种用于预防或治疗肺癌的制剂及其制备方法与应用。所述制剂包含式I的pH响应性环糊精衍生物、聚乙烯亚胺（PEI1800）和SEQ ID NO:1所示的反义寡核苷酸。本发明所述的制剂在包被时添加PEI1800，通过...
- 王关嵩陈华萍张建祥贺斌峰魏征华王长征刘雪萍
- 文献传递
- miR-126调控肺鳞癌细胞增殖的作用及机制研究被引量：4
- 2018年
- 目的探讨miR-126在调控肺鳞癌细胞SK-MES-1增殖中的作用及机制。方法取10对肺鳞癌组织和癌旁组织,利用q PCR检测各个组织中miR-126的表达水平;合成并将miR-126 mimic和NC转染进入SK-MES-1细胞后,q PCR检测miR-126在上述细胞中的表达,并用MTS检测12、24、48 h时细胞的活力。构建野生型和突变型(nuclear receptor coactivator,NCo A) 7 3’UTR插入p MIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染进入SK-MES-1细胞,之后分别将等量的miR-126和NC再转染进入SK-MES-1细胞,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性。应用q PCR和western blot检测转染miR-126 mimic后不同时间点NCo A7 mRNA和蛋白以及芳基烃受体核转运子(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)蛋白的变化。应用co-IP检测NCo A7与ARNT蛋白的相互作用。转染ARNT siRNA以及NC 48 h后,应用q PCR和western blot检测ARNT mRNA和蛋白的表达,并用MTS评估其对SK-MES-1细胞增殖的抑制作用。结果肺鳞癌组织中miR-126的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。转染miR-126 mimic 12、24和48 h后,SK-MES-1细胞中miR-126的表达水平均显著高于0 h组(P<0.05),而NCo A7 mRNA和蛋白、ARNT蛋白的表达水平显著低于0 h组(P<0.05)。荧光素酶报告基因结果显示野生型NCo A7 3’UTR质粒和miR-126 mimic共转染组的相对荧光素酶活性较野生型NCo A7 3’UTR质粒和NC共转染组明显的降低(P<0.05)。Co-IP的结果显示NCo A7与ARNT蛋白之间有相互作用关系。应用ARNT siRNA转染后较NC组可显著下调ARNT mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),其中S1和S2序列siRNA沉默效果较好。MTS结果显示转染S1和S2后12、24、48 h的细胞增殖水平显著低于NC组(P<0.05)。结论 miR-126在肺鳞癌中的表达水平较低。上调肺鳞癌细胞SK-MES-1中miR-126表达后,通过其下调靶点NCo A7的表达,进而可抑制ARNT介导的细胞增殖。miR-126可作为潜在的治疗肺鳞癌�
- 杨丽刘雪萍贺斌峰孙晓蓉张颖郭雪梅王霞
- 关键词：MIR-126肺鳞癌增殖
