刘梅冬
- 作品数：74 被引量：247H指数：9
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 热休克蛋白70对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞核仁损伤的保护作用被引量：24
- 2002年
- 为探讨氧化应激时体外培养的新生Wistar大鼠心肌细胞核仁损伤以及热休克蛋白 70对损伤核仁的保护作用 ,用 0 .5mmol L过氧化氢处理原代培养的心肌细胞 0、30、6 0min ,采用甲苯胺兰染色核仁及电镜技术观察核仁结构的改变 ;并通过热休克预处理及反义技术诱导或阻断热休克蛋白 70的表达 ,观察其对核仁损伤的保护作用。结果发现 ,光镜下过氧化氢损伤组心肌细胞核仁染色颗粒数增多 ,电镜下核仁结构松散、核仁组份分离。热休克预处理导致心肌细胞中热休克蛋白 70表达明显增加 ,并使过氧化氢所致心肌细胞核仁损伤明显减轻。免疫组织化学显示过氧化氢可引起热休克蛋白 70从胞浆到胞核 ,再到核仁的移位。热休克蛋白 70反义寡核苷酸很大程度上能阻断热休克预处理对心肌细胞核仁损伤的保护作用。结果提示 ,过氧化氢可导致体外培养的新生大鼠心肌细胞核仁结构损伤 ,热休克蛋白 70高表达及其向核仁的移位对上述损伤具有明显保护作用。
- 王慷慨邓恭华肖卫民赵振宇蒋磊刘梅冬肖献忠
- 关键词：核仁心肌细胞过氧化氢热休克蛋白70
- HIF-1对H9c2心肌细胞新基因Mipu1表达的影响及其机制研究
- 目的:研究缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)对大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞新基因Mipul表达的影响及其机制。方法:分别以氯化钴(CoCl_2)处理、人HIF-1α全长...
- 雷坚王慷慨刘小柳刘瑛王桂良蒋磊刘梅冬肖献忠
- Kruppel样因子4过表达对C_2C_(12)肌原细胞中热休克蛋白25表达的影响被引量：1
- 2006年
- 目的观察Kruppel样因子4过表达对热休克蛋白25表达的影响。方法运用稳定转染pcDNA3.1/myc-His(-)和Kruppel样因子4-pcDNA3.1/myc-His(-)两种细胞株,采用逆转录聚合酶链反应观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25 mRNA表达的影响;采用Western blot观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25蛋白表达的影响。结果在正常状态下,两种细胞热休克蛋白25 mRNA及蛋白表达水平均较低。生理状态下,热休克恢复1 h及3 h Kruppel样因子4过表达细胞株热休克蛋白25 mRNA表达水平明显高于转空载体细胞;至热休克恢复6 h后两组细胞热休克蛋白25 mRNA表达无明显差异。在生理状态及热休克恢复不同时间后,Kruppel样因子4过表达细胞热休克蛋白25蛋白表达水平均较空载体组明显增加。结论在生理状态下和热休克反应中,Kruppel样因子4过表达均能够促进C2C12肌原细胞中热休克蛋白25高表达。
- 王婧刘瑛易宇欣张华莉刘梅冬肖献忠邓恭华
- 关键词：病理学与病理生理学稳定转染过表达
- 一种新型冷冻管
- 本实用新型公开了一种新型冷冻管，由一管体及两端的管口组成，所述管体轴向长于径向，管体中部设有一平行两端管口的隔板，管口上设有相配合的管盖，管口外侧面设有螺纹，管盖内侧面设有螺纹，管体通过螺纹与管盖紧固，管体透明，且管体上...
- 刘瑛刘梅冬赵杰张华莉肖献忠刘可
- 文献传递
- 热休克蛋白抑制过氧化氢所致C_2C_(12)细胞凋亡的机制被引量：7
- 2004年
- 目的 :探讨热休克蛋白抑制活性氧所致C2 C12 细胞凋亡的分子机制。方法 :采用热休克对体外培养的C2 C12 细胞进行预处理 ,以诱导热休克蛋白的表达 ;Hoechst332 5 8染色观察过氧化氢 (H2 O2 )所致的C2 C12 细胞凋亡 ;凋亡蛋白酶活性检测试剂盒和Western blotting检测凋亡蛋白酶 3,8,9的活性 ;细胞组分分离后Western blotting检测细胞色素C的释放。结果 :热休克预处理导致C2 C12 细胞热休克蛋白 70 ,αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放 ,抑制凋亡蛋白酶 3,8,9活化及随后的C2 C12 细胞凋亡。结论 :热休克蛋白通过干预线粒体信号通路与死亡受体通路的活化抑制过氧化氢导致的C2 C12 细胞凋亡 。
- 肖卫民蒋碧梅石永忠刘梅冬唐道林肖献忠
- 关键词：过氧化氢C2C12细胞细胞凋亡线粒体信号通路凋亡蛋白酶
- Smac/DIABLO在过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞凋亡中的作用被引量：9
- 2003年
- 为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带 ,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2 O2 是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放 ,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase 3和Caspase 9的活化 ,转染Smac/DIABLO基因 ,观察Smac/DIABLO过表达对H2 O2 所致的C2 C12 肌原细胞凋亡的影响 .结果表明 :H2 O2 处理 1h后 ,Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放入胞浆 ,2h更明显 ;H2 O2 处理 4h后 ,Caspase 3和Caspase 9活化 ,12h达高峰 ;H2 O2 处理 2 4h后 ,C2 C12 肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变 ,凋亡核百分率明显升高 ,DNA电泳出现明显“梯状”条带 .与单纯过氧化氢损伤组相比 ,Smac/DIABLO高表达的C2 C12 肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase 3和Caspase 9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显 .结果表明 ,H2 O2 可导致Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放 ,促进Caspase 9和Caspase
- 蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠
- 关键词：SMAC/DIABLO过氧化氢细胞凋亡心肌损伤
- HSP70抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞Smac/DIABLO从线粒体释放及细胞凋亡
- 目的:Smac/DIABLO是近年发现的一种新的促凋亡蛋白,越来越多的研究表明Smac/DIABLO在肿瘤细胞及淋巴细胞凋亡中起着非常重要的作用。近几年,我们已研究证实Smac/DIABLO可促进活性氧过氧化氢所致CC肌...
- 蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠
- 文献传递
- 新的锌指蛋白Mip1的DNA结合序列的筛选
- 2008年
- 目的筛选一个新的锌指蛋白Mip1的DNA结合位点。方法将Mip1cDNA全长克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1构建了Mip1的原核表达质粒pGEX-Mip1。用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-Mip1融合蛋白。通过固定化的GST-Mip1,从寡核苷酸文库中俘获Mip1的结合的寡核苷酸片段;将所得寡核苷酸片段插入T-载体,通过测序、序列比对得到DNA结合位点。结果锌指蛋白Mip1的融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达,能与固定化还原性谷胱甘肽很好地亲和而得到纯化;用固定化的Mip1融合蛋白俘获到了其结合的寡核苷酸序列,通过测序、序列比对,得到了Mip1的DNA结合位点。结论Mip1的DNA结合位点的核心序列为G/TCCTA,Mip1的DNA结合位点的成功确定为Mip1功能的深入研究打下了基础。
- 蒋磊王慷慨陈广文刘可邓恭华涂自智刘梅冬王桂良肖献忠
- 关键词：新基因锌指蛋白
- Kruppel样因子4对内毒素所致IL-6基因表达的调控及机制研究被引量：10
- 2009年
- 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Westernblot检测KLF4mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6mRNA和蛋白质的表达.采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响.使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合.结果表明:LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达.KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失.荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性.EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合.结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放.KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的.
- 冯衍生刘梅冬刘瑛刘俊文陈广文张华莉肖献忠
- KLF4过表达对RAW264.7巨噬细胞和C_2C_(12)肌原细胞增殖的影响被引量：1
- 2007年
- 为探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)过表达对Raw264.7巨噬细胞和C2C12小鼠肌原细胞生长的影响,采用脂质体转染KLF4的真核表达质粒于Raw264.7巨噬细胞和C2C12细胞中,G418筛选阳性克隆,Western blotting鉴定高表达克隆;观察各转染细胞生长情况,CCk-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,凋亡百分率.发现与空质粒转染细胞相比,KLF4过表达对Raw264.7巨噬细胞的生长曲线、细胞周期分布、凋亡百分率没有明显的影响,而C2C12细胞生长速度减慢,细胞凋亡百分率明显高于空载体组.上述结果表明KLF4基因对Raw264.7巨噬细胞增殖没有明显影响,而对C2C12细胞增殖起负调控作用.
- 刘梅冬刘瑛刘俊文王慷慨肖献忠
- 关键词：KLF4基因转染RAW264.7细胞C2C12细胞
