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草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究被引量：6: 2008年; 通过DEAE-Sephacel离子交换层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析、羟基磷灰石层析和Phenyl Sepharose 6-Fast Flow疏水层析,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中分离纯化得到了一种亮氨酸氨肽酶,并对其生物化学性质进行了研究.结果表明,草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶分子量约为105 ku,是单体结构.最适温度为40℃,最适pH为7.5,属于金属蛋白酶.除了Leu-MCA,该酶对其它多种荧光合成底物也有一定程度的分解作用,但对内肽酶对应的荧光底物则没有分解作用.; 刘冰心曹敏杰蔡秋凤苏文金; 关键词：草鱼离子交换层析纯化

猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析被引量：2: 2006年; 根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定与分析.结果表明:FJ-1和FJ-2毒株ORF7基因均为372 bp,编码123个氨基酸,与美洲型参考毒株VR-2332及欧洲型参考毒株LV的核苷酸同源性分别为95.16%,94.35%和61.40%,60.65%,其推导的氨基酸同源性分别为95.93%,95.12%和56.49%,55.73%.研究表明,福建流行的FJ-1和FJ-2属于美洲型PRRSV毒株.; 吴国平刘冰心郭川曹敏杰苏文金; 关键词：PRRSV ORF7

原核高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的特性及应用被引量：4: 2007年; 从已构建的PRRSV ORF7重组质粒pUCm-T-ORF7中用PCR扩增ORF7基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-ORF7并转化大肠杆菌。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,成功表达了谷胱苷肽转移酶(GST)融合的核衣壳蛋白(N),重组N蛋白表达量约为菌体总蛋白的35%,主要以可溶的形式存在,且能形成同源二聚体。重组N蛋白经谷胱苷肽凝胶(glutathione sepharose 4B)亲和层析后得到高度纯化,并将该蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法。利用该方法对某猪场76份猪血清进行检测并将结果与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果作比较,2种方法的总符合率达93.4%,检测结果之间差异不显著(P>0.05)。结果表明大肠杆菌表达的重组GST融合N蛋白具有良好的抗原性,因而有望利用该重组蛋白开发为试剂盒应用于临床PRRSV抗体的检测。; 吴国平郭川曹敏杰刘冰心梁银龙苏文金; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白同源二聚体间接ELISA

淡水鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究: 本文首次以鲤鱼、草鱼、鲢鱼三种典型的淡水鱼为原料，对其肌肉亮氨酸氨肽酶进行分离纯化，并研究了它们的酶学性质，为LAP在鱼类肌肉中的生理学功能研究提供理论依据。本文采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sephacel...; 刘冰心; 关键词：鱼肌肉分离纯化氨肽酶; 文献传递

II型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达与初步应用被引量：1: 2006年; II型猪圆环病毒(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMW S)的重要病原.本研究用PCR以构建的PCV2ORF2重组质粒pBS-T-ORF2为模板,扩增截短的ORF2(tORF2)基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-tORF2并转化大肠杆菌BL21(DE3).经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定,成功表达了谷胱甘肽S转移酶(GST)融合的tORF2,重组蛋白分子量约为45ku,表达量约为菌体总蛋白的20%,重组蛋白具有良好的免疫学活性.用tORF2重组蛋白对20份临床猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)阳性猪血清进行W estern b lot检测,有4份(20%)血清显示PCV2抗体阳性,说明PCV2与PRRSV存在共同感染现象.本研究初步证明表达的tORF2重组融合蛋白可以应用于临床检测.; 吴国平郭川刘冰心梁银龙苏文金曹敏杰; 关键词：原核表达

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刘冰心