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荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察被引量：8: 2000年; 目的　比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ，评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法　采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清、血浆、淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果　血清、淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％、８５．５１％、８０．００％），分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ（定性）阳性率（２４．６４、２８．９９％、２０．００％），有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率，荧光定量ＰＣＲ法（３９．１３％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（８．７０％）（Ｐ＜０．００１）。ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ定性阳性率不随ＲＮＡ定量水平均高而增高。结论与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）相比，荧光定量ＰＣＲ技术检测; 林潮双陈文思卢建溪谢俊强柯伟民高志良; 关键词：荧光定量PCR RT-PCR 丙型肝炎 HCV-RNA

丙型肝炎患者尿液特异标志物的检测及其临床意义: 1994年; 对５４例丙型肝炎患者尿液特异指标检测，结果：抗－ＨＣＶ阳性５／５４例（９．２％）。ＨＣＶＲＮＡ阳性９／５４例（１６．７％）。急性ＨＣＶ感染者，尿中抗－ＨＣＶ检出率为２／６例（３３％），较慢性者３／３８例（７．９％）为高（Ｐ＜０．０５）。尿液ＨＣＶＲＮＡ全部出现在未经α－干扰素治疗的慢性患者中，故可用作判断干扰素疗效的指标之一。本文在尿中检出ＨＣＶＲＮＡ，提示ＨＣＶ可经尿液污染环境。; 肖杰生高志良陈文思陈青江元森俞洪林; 关键词：丙型肝炎病毒尿液聚合酶链反应

HBSAg及B_(7-1)双表达逆转录病毒载体的构建及其在真核细胞中表达: 2001年; 目的为探索共刺激分子Ｂ７－ｌ增强ＨＢｓＡｇ真核表达载体基因免疫的效果，并用于消除乙型肝炎免疫耐受。方法用高保真ＰＣＲ法扩增目的基因片段Ｂ７－１及带接头和启动子的ＩＲＥＳ—ＨＢｓ基因片段，亚克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｋｓ＋载体中测序，再克隆到逆转录病毒载体ｐｌｘｓｎ中。用脂质体转染ＰＡ３１７细胞，经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。用ＮＩＨ３Ｔ３检测假病毒颗粒的滴度，并用于感染ＨｅｐＧ２、２９３、ＮＩＨ３Ｔ３细胞系，以ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂ７－１的转录，免疫组织化学检测Ｂ７－１表达，ＥＬＩＳＡ检测细胞上清液中ＨＢｓＡｇ表达。结果所扩增的目的基因片段经测序证实，未发现序列有改变。用内切酶ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ将Ｂ７－１插入ｐｌｘｓｎ中，然后用ＸｈｏＩ／ＢａｍＨＩ将ＩＲＥＳ－ＨＢｓ插入构建成ｐｌｘｓｎ－Ｂ７－１－ＨＢｓ。转染后ＰＡ３１７２４ｈ，按１∶１０传代，２周后共得４３个克隆，１∶５传代得９０个克隆，假病毒颗粒滴度平均为５４ × １０５ｃｆｕ／ｍｌ。Ｂ７－１在上述细胞中均有表达。ＨＢｓＡｇ在ＰＡ３１７、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨｅｐＧ２、２９３细胞上清液中的含量（Ａ值）２４、４８、７２ｈ分别为０．１５、０．１１?; 周智姚集鲁张海红卢建溪陈文思; 关键词：乙型肝炎表面抗原共刺激分子逆转录病毒载体

特异核酸捕获-PCR技术在从高背景标本中检测TT病毒DNA的应用: 2001年; 目的　解决因TTV在样本中的水平极低而导致从高背景核酸样本中检测TTVDNA存在非特异性扩增的问题。方法　采用亲和素生物素系统将TTV特异的核酸片段包被在微孔板上 ,利用特异核酸捕获样本中的TTVDNA ,从而建立特异核酸捕获 PCR检测TTVDNA方法 ,并以10份血清 (4份TTVDNA阳性 )和肝组织配对标本为对象与抽提法进行比较 ,阳性产物进行DNA序列分析 ,最后评价特异核酸捕获 PCR的特异性。结果　抽提法在血清和肝组织中的检出率分别为4/ 10和 9/ 10。RFLP初步分析产物具有特异性 ,但经DNA序列分析证实的检出率仅分别为 2 / 10和3/ 10。采用特异核酸捕获 PCR检测的结果与抽提法经DNA序列分析后的结果一致 ,获得的电泳条带也更为清晰。结论　特异核酸捕获 PCR方法能显著提高TTVDNA检测的特异性 ,特别是针对高背景核酸标本 ,表明该方法在其他低水平病原体检测及高背景核酸样本检测中也有广泛的应用前景。; 彭晓谋邓练贤陈文思高志良姚集鲁; 关键词：聚合酶链反应 TT病毒 DNA

HBsAg重组腺病毒载体的包装和表达: 2000年; 为探索腺病毒载体在基因治疗中的应用及其表达目的抗原的有效性．用ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ双切质粒ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＫＳ＋－ＨＢｓ；回收Ｓ基因片段，定向克隆插入质粒…ｐＡＣＣＭＶｐＬ中相应的酶切位点，通过快速抽提、酶切鉴定筛选重组质粒．将重组质粒与ｐＪＭ１７共转染２９３细胞进行包装，挑取单个空殊感染２４孔板中的２９３细胞，取上清ＨＢｓＡｇＡ值最高的重组病毒扩大培养，纯化和满度测定。并感染ＰＡ３１７、ＨｅＰＧ２、Ｖｅｒｏ细胞，检测ＨＢｓＡｇ的表达。挑取的２０个空斑感染２９３细胞后，９个ＨＢｓＡｇ阳性．扩大培养、纯化后测得其滴度为９．６ ×１０８ｐｆｕ／ｍＬ，感染ＰＡ３１７、ＨｅＰＧ２、Ｖｅｒｏ细胞后７２ｈ，其上清中ＨＢｓＡｇＡ值分别为０．５３、０．８９、０．５２．成功地构建了表达ＨＢｓＡｇ基因的重组腺病毒载体，在２９３细胞中进行了包装，并在其它真核细胞中得到了表达．; 周智姚集鲁卢建溪陈文思刘淑芳; 关键词：病毒性肝炎乙型腺病毒载体 DNA重组

荧光定量PCR技术在检测HCV-RNA中的应用被引量：1: 2001年; 目的评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值，探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％），分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率，荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）．荧光定量ＰＣＲ法，淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论与ＲＴ－ＰＣＲ相比，荧光定量ＰＣＲ技术检测ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高，对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。; 林潮双韦嘉卢建溪陈文思彭晖高志良; 关键词：荧光定量PCR PBMC 丙型肝炎病毒RNA 血液透析

血液透析及骨髓移植患者TT病毒感染情况分析被引量：9: 1999年; 目的了解ＴＴ病毒（简称ＴＴＶ）在血液透析患者和骨髓移植患者中的感染情况，并评估ＴＴ病毒的致病力。方法回顾性调查３７例血液透析患者和９０例骨髓移植患者的ＴＴＶ感染情况，分析ＴＴＶ感染的致病力。结果ＴＴＶ在３７例血液透析患者中的感染率为１６２２％（６／３７），在９０例骨髓移植患者中的感染率为３３３％（３／９０），经统计学处理，两组感染率比较有显著性差异。６例ＴＴＶ阳性患者中５例有输血史，４例行肾移植术。ＴＴＶ感染与是否存在ＨＢＶ或ＨＣＶ感染无关。未发现ＴＴＶ阳性和ＴＴＶ阴性两组之间肝功能的损害程度存在差异。结论输血或血浆在传播ＴＴＶ感染上有重要意义。ＴＴＶ的致病力较弱。ＴＴＶ是否嗜肝病毒，有待进一步研究。; 林潮双黄仰苏陈文思陈幼明张宇锋廖家杰高志良; 关键词：血液透析骨髓移植 TT病毒致病力

α－干扰素治疗丙型肝炎疗效观察被引量：2: 1994年; α－干扰素治疗丙型肝炎疗效观察何有成，陆玮伦，姚集鲁，高志良，柯伟民，俞洪林，陈文思（中山医科大学附属第三医院传染病科；广州，５１０６３０）关键词丙型肝炎，干扰素，谷丙转氨酶，丙型肝炎病毒核糖核酸，丙型肝炎病毒抗体中图号Ｒ５１２．６０５；９７８．７作...; 何有成陆玮伦姚集鲁高志良柯伟民俞洪林陈文思; 关键词：丙型肝炎干扰素谷丙转氨酶

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陈文思

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