钱师宇
- 作品数：22 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA在原发性胆汁性肝硬化诊断中的作用被引量：3
- 2009年
- 目的评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2—3E（BPO）为靶抗原的酶联免疫吸附（ELISA）法（抗-M2-3E ELISA）检测抗线粒体抗体M2亚型（AMA-M2）IgG和IgA抗体在原发性胆汁性肝硬化（PBC）诊断中的敏感性、特异性以及其临床意义。方法分别用间接免疫荧光法（IFL）、以丙酮酸脱氢酶复合体为靶抗原的ELISA法（抗-PDC ELISA）、抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC患者，87例疾病对照患者和26名健康体检者的AMA-M2 IgG和（或）IgA抗体。检测ALT、AST、总胆红素、白蛋白、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、血清肌酐、IgG、IgM及IgA。对于符合正态分布的计量数据采用t检验，不符合正态分布者采用秩和检验。结果107例PBC患者抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率（90．6％）高于IFL法（81．3％）和抗-PDC ELISA法（72．9％），t值分别为4．32和6．03，P值均〈0．05。抗-M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为55．1％，特异性为97．2％；而总体AMA-M2IgG和（或）IgA的检出率为92．5％，特异性为95．2％。20例IFL检测AMA-M2 IgG为阴性的PBC患者中，抗-M2-3E ELISA法检出率为45％，AMA-M2 IgG和（或）IgA的检出率为55％，抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和（或）IgA。AMA-M2 IgG呈阳性的患者（97例）比呈阴性的患者（10例）有更加严重的组织学变化和更高的IgG、IgM和碱性磷酸酶水平。结论抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗PDC ELISA法更高的敏感性和特异性，可作为第一轮AMA-M2的筛查。AMA-M2 IgG阳性可能说明该PBC患者有更加严重的疾病，但是AMA-M2 IgG和IgA部不能单独用于诊断PBC。
- 卢建溪钱师宇舒欣李刚
- 关键词：酶联免疫吸附测定抗线粒体抗体
- 携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究
- 2011年
- 目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。
- 卢建溪阳莉钱师宇王强
- 关键词：腺病毒载体基因重组
- 我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
- 2011年
- 目的研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性。方法采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有3个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因组多样性
- 新型的抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的可靠性及其临床重要性
- 目的:评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3EELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)IgG和IgA抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的敏感性、特...
- 卢建溪钱师宇舒欣
- 关键词：抗线粒体抗体酶联免疫吸附实验
- 两种恒河猴肠道腺病毒基因型分型方法的比较分析
- 2011年
- 目的通过对两种肠道腺病毒基因型分型方法进行比较,以寻找出简便快速的肠道腺病毒基因型分型方法。方法采集57例圈养的恒河猴粪便样本,方法一:将粪便悬液过滤上清感染BSC-1细胞,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后克隆、测序,确定病毒基因型;方法二:从粪便悬液过滤上清中直接提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 57份样本中,两种方法均有12份样本检出腺病毒,阳性率为21.1%(12/57)。系统进化分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致。提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有三个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1、SAdV-3和HAdV-52。结论虽然两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,而无需方法一进行3次体外细胞感染实验后从病变细胞中提取基因组DNA进行PCR扩增,节省了实验的时间及成本,特别是避免了体外细胞感染过程中可能出现的污染,因此值得推荐。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因型
- 广州地区人腺病毒5型血清流行病学初步调查
- 2011年
- 目的评估广州地区人群中人腺病毒5型(HAdV-5)先存中和抗体的流行情况。方法采用以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的人重组腺病毒5型,使用化学发光法,检测了209份免疫功能正常的成人血清样本中HAdV-5的中和抗体阳性率情况。结果 HAdV-5中和抗体的阳性率为82.3%(172/209)。HAdV-5中和抗体在<1/20(低滴度)、1/40-1/160(中滴度)、1/320-1/1280(高滴度)、>1/1280(超高滴度)时均能检测到,而且随着滴度的增加,阳性率逐渐升高。在20～40岁时HAdV-5中和抗体阳性率最高,在<20岁时HAdV-5阳性率最低。结论广州地区人群中针对HAdV-5的先存中和抗体阳性率高,应用基于该种DNA病毒作为载体进行基因疫苗及基因治疗的研究时,具有一定的局限性。
- 卢建溪梅明珠钱师宇阳莉李刚
- 关键词：化学发光法中和抗体
- 携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建
- 2011年
- 目的采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法将pTurbo RFP-N上的含红色荧光蛋白基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-CeuI/PI-SceI双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5′040 pkGFP-II,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体pH5.′040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。结果经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5.′040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1012vp/mL,滴度达1×1010pfu/mL。结论成功构建了携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。
- 卢建溪阳莉钱师宇王强
- 关键词：腺病毒载体红色荧光蛋白基因重组
- 基于本体的临床基因组学信息整合研究
- 2010年
- 目的由于生物医学信息存在一定的异质性,实现这些信息的整合将促进基因医学的发展。方法通过构建生物医学信息领域本体,将数据源的数据模式映射到一个虚拟模式之下,再统一这些虚拟模式;并结合生物医学术语本体,以期解决信息整合过程中所产生的语义问题。结果利用构建的临床基因组学信息系统可提升微阵列数据分析结果。结论基于本体的信息整合将为对未来的临床基因组学研究提供有力的信息支持。
- 钱师宇齐国隆王加辉卢建溪
- 关键词：信息整合本体
- 广州地区人腺病毒5型血清中和抗体阳性率初步调查被引量：3
- 2011年
- 目的评估广州地区人群中人腺病毒5型(HAdV-5)中和抗体阳性率情况。方法采用以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的人重组腺病毒5型载体,运用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人血清样本中HAdV-5的中和抗体。结果 HAdV-5中和抗体的阳性率为82.3%(172/209)。HAdV-5中和抗体在<1:20(低滴度)、1:40-1:160(中滴度)、1:320-1:1280(高滴度)、>1:1280(超高滴度)时均能检测到,而且随着滴度的增加,阳性率逐渐升高。在20～40岁时HAdV-5中和抗体阳性率最高,在<20岁时HAdV-5阳性率最低。结论广州地区人群中针对HAdV-5的先存中和抗体阳性率高,应用基于该种DNA病毒作为载体进行基因疫苗及基因治疗的研究时,具有一定的局限性。
- 卢建溪梅明珠钱师宇李刚
- 关键词：化学发光法中和抗体
- 广州地区猴腺病毒7型血清流行病学初步调查
- 2011年
- 目的评估广州地区猴腺病毒7型(SAdV-7)先存中和抗体阳性率情况。方法首先构建以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的猴重组腺病毒7型载体SAdV7-CMV-LacZ。然后使用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人的血清样本中SAdV-7中和抗体阳性率情况。结果我们发现SAdV-7中和抗体的阳性率为27.8%(58/209)。SAdV-7中和抗体在低滴度时阳性率最高,并且随着滴度的升高,阳性血清分布率逐渐降低。在20～40岁人群中,SAdV-7中和抗体阳性率最高,在<20岁人群中未检测到SAdV-7中和抗体。结论广州地区人群中针对SAdV-7的先存中和抗体阳性率低。因此,SAdV-7在基因治疗及基因疫苗的应用上是一个具有吸引力的候选载体。
- 卢建溪梅明珠钱师宇李刚
- 关键词：人腺病毒中和抗体
