薛祝平
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用初探
- 研究背景:转录因子维甲酸相关孤独受体γt(RORγt)是Th17细胞分化发育的重要转
- 薛祝平马飞李柏青
- 文献传递
- 转录因子t-bet在人CD8^+T细胞和γδT细胞干扰素-γ产生中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨转录因子t-bet对人CD8+T细胞和γδT细胞干扰素-γ(IFN-γ)产生的调控作用。方法:化学合成针对人t-bet基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人γδT细胞和αβT细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD8+T细胞和δγT细胞,半定量RT-PCR检测CD8+T细胞和γδT细胞中t-bet mRNA的表达变化,流式细胞术检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。结果:转染siRNA后的人CD8+T细胞和γδT细胞t-bet mRNA表达强度分别为(24.75±1.18)%和(25.28±1.04)%,较转染前明显减小(P<0.05);在t-bet表达受到抑制的同时,γδT细胞中IFN-γ+细胞为(56.57±6.67)%,与错义序列组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:siRNA可有效降低人CD8+T细胞和γδT细胞t-bet的基因表达,转录因子t-bet在γδT细胞IFN-γ产生中所起的作用与CD8+T细胞不完全相同。
- 汪洪涛薛祝平李柏青
- 关键词：T-BETSIRNA
- 转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用。方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4+、CD8+T细胞和γδT细胞,半定量RT-PCR检测CD4+、CD8+T淋巴细胞中T-bet和EomesmRNA的表达变化,流式细胞术(FCM)检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。结果:经过连续2次转染,siRNA-FAM+细胞可达50%。转染T-bet-siRNA后,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(18.46±6.86)%,比阴性对照组(50.20±5.91)%,明显降低(P<0.01),而CD8+T细胞转染T-bet-siRNA,IFN-γ+细胞率(74.18±9.33)%,与阴性对照组(76.51±6.49)%无统计学意义;转染Eomes-siRNA,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(50.92±6.78)%,与对照组无统计学意义;而CD8+T细胞IFN-γ+细胞率(25.37±7.11)%,比阴性对照组(76.51±6.49)%,明显降低(P<0.01)。MtbAT转染T-bet-siRNA和Eomes-siRNA后,γδT细胞IFN-γ+细胞率分别为(56.57±6.67)%和(42.53±5.13)%,比阴性对照组(76.52±2.58)%均明显降低(P<0.01)。结论:在转录因子水平,T-bet和Eomes分别是调控CD4+、CD8+T淋巴细胞IFN-γ产生的重要转录因子,而两者可能同时参与了γδT细胞IFN-γ产生的调节。
- 汪洪涛葛晓松薛祝平李柏青
- 关键词：SIRNAT-BETIFN-Γ
- 转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例。结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后,对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用。活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+T细胞(32.78±3.41)中,明显低于未转染组(44.54±1.75)(P<0.01)。结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+T细胞产生IFN-γ有正调控作用。
- 薛祝平马飞唐洁李柏青
- 关键词：T细胞Γ-干扰素流式细胞术
- 人工合成的siRNA转染外周血活化T淋巴细胞方法学研究被引量：2
- 2009年
- 观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果。人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转染活化后的T淋巴细胞,分别采用转染一次和连续转染两次的方法,并在转染后4h,分别取样本,通过流式细胞测定技术,比较两种方法的转染效率,并筛选出最佳转染效率剂量配比。活化T细胞用转染一次和两次的方法后,平均转染阳性率分别为(12.5±0.64)%和(50.37±6.77)%。采用连续两次转染的方法进行转染,转染效率要明显高于一次转染法。
- 葛晓松薛祝平李柏青
- 关键词：SIRNA转染脂质体
