范文玲
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：中国综合性艾滋病研究项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节被引量：2
- 2005年
- 目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMVRep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMVRepC。将删除ATG的HIV1gag基因插入pCMVRepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMVRepCgag。同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMVRepgag。Westernblot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALBc雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5′翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应。
- 张玉伟周克民李鼎锋李海山范文玲徐建青孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗抗原表达免疫原性GAG特异性细胞免疫应答翻译
- 体内电穿孔对报告基因表达和HIV Gag DNA疫苗诱导的免疫反应的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV Gag DNA疫苗所诱导的免疫反应的影响。方法构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1．0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况。同时构建携带密码子优化的HIV-1B′/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1．0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(jntracellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答。结果通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,最大提高幅度达到66倍。Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍。但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响。结论体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答。
- 李鼎锋张玉伟李海山范文玲孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达
- HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件的优化被引量：4
- 2008年
- 为探讨诱导温度对于HIV-1Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30oC和37oC诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同。将30oC诱导的目的蛋白分别用2mol/L和8mol/L尿素溶解后做层析分离,比较两者的分离效果。结果发现,与37oC相比,30oC诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素,并且更容易复性。与8mol/L尿素溶解相比,30oC诱导的包涵体用2mol/L尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果。这提示低温诱导的Gag包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白,而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象。从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考。
- 傅晶晶孙静陈佩霍烛范文玲郝彦玲刘勇
- 关键词：HIV-1GAG包涵体变性剂
- 提高内毒素去除效果的质粒DNA层析纯化工艺的优化被引量：4
- 2009年
- 目的优化质粒DNA分子筛或离子交换层析工艺,提高内毒素去除效果。方法在经精胺沉淀初步纯化的质粒DNA溶液中,加入不同浓度的EDTA(5、10和20mmol/L)或SDS(0.1%、0.2%和0.5%),分别进行Sephacryl S-1000分子筛层析及Source30Q离子交换层析,收集质粒峰,测定内毒素含量。结果用含0.5%SDS的质粒溶液进行分子筛层析,用含10～20mmol/L EDTA或0.1%～0.5%SDS的质粒溶液进行离子交换层析,质粒DNA的内毒素含量均<5EU/mg。结论添加一定浓度的EDTA或SDS可提高质粒DNA分子筛层析或离子交换层析去除内毒素的效果。综合考虑安全性因素,推荐用含10mmol/L EDTA的质粒溶液进行Source30Q离子交换层析。
- 王贻杰刘勇程海范文玲韩建霍烛郝彦玲邵一鸣
- 关键词：质粒DNA内毒素层析EDTASDS
- HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。
- 侯爵孙静徐智勇范文玲张怡轩刘勇郝彦玲
- 关键词：纯化复性抗体检测
