聂丹
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HCV核心蛋白抑制SFRP1基因启动子活性被引量：1
- 2013年
- 目的探讨HCV核心蛋白对Wnt信号通路抑制分子SFRP1启动子活性的影响。方法以人肝癌细胞系Huh7基因组为模板,扩增SFRP1启动子区不同片段(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27 bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),以pGL3-Basic为载体分别构建SFRP1启动子区截短报告质粒。将构建好的质粒与pRL-TK共转染HEK293细胞,确定启动子区活性最强区域;分别用编码HCV核心蛋白的腺病毒或GFP对照腺病毒感染已转染重组报告质粒的SK-Hep1细胞,观察AdCore对SFRP1启动子活性的调控作用。结果 SFRP1启动子区域-407～-27 bp片段活性最强;与pGL3-Basic对照组相比较,相对荧光素酶活性增加了37.31±4.45倍(P<0.01),pGL3-S2～S5的活性分别增加了28.74±2.47、13.56±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P<0.01);HCV Core蛋白能够抑制SFRP1基因启动子区活性,其对pGL3-S1的抑制作用最强,与GFP对照组相比较,抑制率为63.8%±1.0%(P<0.01)。结论 HCV核心蛋白通过抑制SFRP1启动子区活性下调SFRP1基因的表达,可能参与Wnt/β-catenin信号通路的活化,并与原发性肝癌的发生密切相关。
- 权会琴聂丹周帆陈林林陈庆美单晓亮谢青唐霓
- 关键词：SFRP1启动子HCV核心蛋白
- 乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子的活性被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)抑制分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)启动子活性的分子机制。方法:扩增不同长度的SFRP5启动子区片段,构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,并将构建好的重组质粒转染入正常肝细胞系LO2细胞,再分别感染编码HBx的腺病毒(Ad-HBx)或编码绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP),荧光显微镜下观察病毒感染效率,检测萤光素酶活性以观察HBx对SFRP5启动子活性的影响。结果:(1)含不同长度的SFRP5启动子区截短突变报告质粒构建成功。(2)截短突变报告质粒的萤光素酶活性与pGL3-Basic对照组相比,分别为(6.32±0.04)倍(-478 bp～+47 bp)、(5.79±0.32)倍(-811 bp～+47 bp)、(3.59±0.34)倍(-1 235 bp～+47 bp)、(3.86±0.39)倍(-1 677 bp～+47 bp)、(3.26±0.42)倍(-2 072 bp～+47 bp)(均P<0.05)。过表达HBx可以明显抑制SFRP5启动子活性,抑制率分别为44%(-478 bp～+47 bp)(P<0.05)、46%(-811 bp～+47 bp)(P<0.05)、28%(-1 235 bp～+47 bp)、24%(-1 677 bp～+47 bp)和40%(-2 072 bp～+47 bp)。结论:HBx可以明显抑制SFRP5启动子区活性,可能导致SFRP5基因表达下调。
- 陈林林谢青单晓亮权会琴陈庆美周帆聂丹唐霓
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白
- 乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子活性的研究
- 目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子活性的分子机制。方法扩增不同长度的SFRP5启动子区片段,构建到pGL3-Basic载体上,并将构建好的重组质粒转染入LO2细胞,再分别感染Ad-GFP或Ad-HBx,通过检...
- 陈林林谢青单晓亮权会琴陈庆美周帆聂丹唐霓
- 关键词：HBX
- HCV核心蛋白抑制E-cadherin基因启动子活性
- <正>目的通过DNA定点诱变技术构建E-cadherin启动子区E-box突变报告质粒,探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)在肝癌细胞中对含有不同E-box点突变的E-cadherin转录活性的影响。方法采用不依...
- 聂丹聂丽珠唐霓
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa+C端141~154 aa、N端1~57 aa或N端1~84 aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体。(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;C端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达。(3)与野生型HBx相比,HBx C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa+C端141~154 aa、N端1~57 aa和N端1~84 aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7%、84.7%、75.7%、93.8%和95.5%。结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用。
- 谢青陈林林李治单晓亮聂丹段玉洁权会琴唐霓
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白细胞内定位转录活性
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抑制E-cadherin基因启动子活性
- 2016年
- 目的:探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis C virus core protein,HCV core)对E-cadherin启动子活性的调控作用。方法:以Huh7细胞基因组为模板,构建野生型E-cadherin(CDH1)基因启动子荧光素酶报告质粒(pGL3-CDH1),然后设计突变引物序列将人E-cadherin启动子区负性调控关键区域,即位于-80^-75 nt(E-box1),-30^-25 nt(E-box3),和+22^+27 nt(Ebox4)的3个E-box的共识别序列5’-CANNTG-3’突变为5’-AANNTA-3’,分别构建E-box1(pGL3-mut1)、E-box3(pGL3-mut2)、E-box4(pGL3-mut3)、E-box1+3(pGL3-mut1+2)、E-box1+4(pGL3-mut1+3)、E-box3+4(pGL3-mut2+3)、E-box1+3+4(pGL3-mut1+2+3)的荧光素酶报告质粒。将上述质粒与内参质粒p RL-TK分别共转染于过表达核心蛋白的肝癌细胞株SMMC-7721细胞,采用双荧光素酶报告系统检测HCV core对E-cadherin启动子的调控,分析E-cadherin启动子区不同位点的E-box区域在HCV core调控E-cadherin启动子活性中发挥的作用。结果:荧光素酶活性检测结果显示,与GFP对照组相比,HCV core可以明显抑制野生型E-cadherin启动子活性;在E-box单一突变的E-cadherin报告质粒转染细胞中,HCV core对CDH1启动子的抑制作用有不同程度减弱,特别是-80^-75 nt和-30^-25 nt位点的E-box区域作用最为明显;E-box联合突变型质粒转染细胞中,HCV core对CDH1启动子的抑制作用明显减弱。结论:HCV core能明显抑制E-cadherin的转录活性,E-box突变可以部分拮抗HCV core对E-cadherin的转录抑制作用,提示位于-80^-75 nt和-30^-25 nt位点的E-box保守负性调控区域在HCV core对E-cadherin的转录调控中发挥关键作用。
- 聂丽珠聂丹段玉洁李治陈震田玲唐霓
- 关键词：肝细胞肝癌丙型肝炎病毒核心蛋白E-CADHERINE-BOX启动子活性
