秦春燕
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华南理工大学轻工与食品学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 寻找集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶底物的研究
- 细菌中有一类保守的跨膜信号转导机制，它通过控制胞外功能Sigma因子（extracytoplasmic function Sigma factor，ECF）的自由度、应对胞外胁迫。ECF因子负责识别特定的启动子，聚合具有...
- 秦春燕
- 关键词：集胞藻Σ因子底物
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白标记S2P在集胞藻6803中的表达
- 2012年
- 为研究集胞藻6803中两个S2P同源蛋白酶Slr0643和Sll0862的功能,分别在两个蛋白酶的羧基端添加增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签,构建了两株转基因集胞藻psbA2::0643GFP-Cmr/△0643-Kmr和psbA2::0862GFP-Cmr/△0862-Kmr.通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测到egfp基因的转录表达,通过激光共聚焦显微镜检测到转基因集胞藻细胞发出的绿色荧光蛋白荧光,表明带EGFP标签的S2P融合蛋白在psbA2启动子调控下正确表达.
- 陈谷闻盼盼秦春燕王玉玲
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白集胞藻6803融合蛋白
- 集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862金属蛋白酶活性的体外鉴定被引量：3
- 2012年
- 【目的】金属蛋白酶S2P在细菌中通过在膜切割转录调控因子、释放δ因子参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制,但蓝细菌中S2P的功能还未被鉴定,故我们考察集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862的金属蛋白酶活性。【方法】以pET-30b(+)为载体,分别构建重组质粒pF0643和pF0862,在大肠杆菌BL21(CE3)中诱导表达并纯化Slr0643及Sll0862蛋白,以β-酪蛋白为底物检测重组蛋白的酶活性。【结果】体外酶活实验显示重组表达的Slr0643及Sll0862蛋白有内切蛋白酶活性,且其活性受金属螯合剂o-phenanthroline的抑制。体外酶活的鉴定结果为进一步研究Slr0643和Sll0862的体内酶活和生物学功能奠定了基础。【结论】集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862具有金属蛋白酶活性。
- 秦春燕张旭陈谷
- 关键词：集胞藻PCC6803原核表达纯化
- 集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶假定底物的体外诱导表达及纯化
- 2013年
- 金属蛋白酶S2P同源蛋白在行光合作用的蓝藻中广泛存在。S2P蛋白酶通过在膜切割转录调控因子(anti-σ因子),释放σ因子来参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制。集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶参与胁迫响应的跨膜信号转导,但其作用机理及底物均未明确。经过深入考察分析,实验锁定了4对σ因子和anti-σ因子的组合:SigE-ChlH(Slr1055)、SigI(Sll0687)-Sll0688、SigG(Slr1545)-Slr1546及SigH(Slr0856)-Sll0857。以pET-30b(+)为载体,通过重组表达纯化,成功获得一系列S2P假定底物的重组蛋白:全长anti-σ因子及截去羧基端部分序列的截短片段,包括Slr1055、Slr1055△(1～232)、Sll0688、Sll0688△(1～152)、Slr1546、Slr1546△(1～174)、Sll0857、Sll0857△(1～101)和大肠杆菌的S2P底物RseA(1～148)。为下一步在体外重构S2P蛋白酶与底物的酶切体系、阐释蓝藻体内S2P介导的级联信号转导机制奠定了基础。
- 秦春燕陈谷
- 关键词：底物
