王观峰
- 作品数：11 被引量：34H指数：4
- 供职机构：广州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 硫辛酸烟酸二联体拮抗丙烯醛诱导ARPE-19细胞凋亡的作用机制被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨Bax、Bcl-2蛋白在硫辛酸烟酸二联体拮抗丙烯醛诱导的体外培养ARPE-19细胞凋亡中可能的调控作用。方法:ARPE-19细胞置于含有10%体积分数胎牛血清的DMEM培养基,37℃、体积分数5%CO2培养箱中培养,待培养瓶底部ARPE-19细胞长至70%时,种6孔板,用不含血清的DMEM培养基培养24 h,细胞换液。实验分为3组:空白对照组、丙烯醛组和硫辛酸烟酸二联体组。细胞流式检测各组ARPE-19细胞凋亡情况,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果:细胞流式显示正常细胞在空白对照组中为94.8%,丙烯醛组中为60.98%,硫辛酸烟酸二联体组中为91.34%。Western Blot显示空白对照组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为0.293 9,丙烯醛组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为1.389 2,硫辛酸烟酸二联体组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为0.555 8。结论:硫辛酸烟酸二联体对ARPE-19细胞的保护作用机制是通过激活抗凋亡蛋白Bcl-2来抑制凋亡蛋白Bax的表达。
- 邹秀兰王观峰李文立皮荣标俞永珍邹玉平
- 关键词：丙烯醛BAX
- 蓝光诱导氧化应激反应参与视网膜色素上皮细胞凋亡机制研究被引量：9
- 2015年
- 目的研究氧化应激反应参与蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞（human retinal pigment epithelium,hR PE）凋亡的作用机制及其与时间的关系。方法用LED蓝光光源建立蓝光损伤体外培养的hR PE细胞模型,蓝光辐射强度为（4.0±0.5）mW·cm-2,并将细胞分为光照时间0 h（正常对照组）、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、12 h组。透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内活性氧水平,Western Blot技术检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况。结果各光照组细胞均有不同程度的胞浆减少、空泡状改变、线粒体肿胀、微绒毛减少或脱落。正常对照组、光照1 h、2 h、3h、4 h、5 h、6 h、12 h的细胞凋亡率分别为（5.30±0.64）%、（5.90±0.89）%、（6.80±0.98）%、（7.70±0.76）%、（9.60±1.10）%、（11.45±2.60）%、（14.90±1.60）%及（23.90±1.20）%,与正常对照组比较,光照4 h后细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。正常对照组、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h组hR PE细胞生成的ROS相对量分别为（12.90±1.18）%、（20.09±0.63）%、（23.91±1.47）%、（29.14±1.94）%、（34.30±1.84）%、（38.97±1.68）%、（44.08±0.83）%、（57.76±2.80）%,光照0.5 h后细胞产生的ROS明显升高,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。Caspase-3及Bax在3 h后轻微上调,而5~6 h后表达上调较明显,Bcl-2的表达则在3 h后下调明显,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。结论蓝光可通过产生的氧化应激反应激活细胞凋亡系统导致细胞损伤,光照持续3 h时细胞可能出现了损伤但不明显,光照5~6 h后出现了较为明显的细胞凋亡。
- 俞永珍徐哲邹秀兰张楚王观峰邹玉平
- 关键词：凋亡活性氧氧化应激人视网膜色素上皮细胞
- 持续性角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2012年
- 目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对全部缺损组大鼠建立持续性角膜上皮缺损模型,每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,第1次术后1d处死缺损组A组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术;第2次术后1d处死缺损组B组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,依此类推连续7d,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。结果骨髓间充质干细胞细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞百分数分别为16.76%±4.49%、17.95%±2.77%,明显高于其他缺损组和对照组(均为P<0.05),B、D组G1期细胞百分数分别为72.26%±8.81%、71.33%±5.30%,均低于其他缺损组和对照组(均为P<0.05);但B、D组S期细胞及G1期细胞百分数差异无统计学意义(均为P>0.05),A、C、E、F、G组及对照组间的S期细胞及G1期细胞百分数差异亦无统计学意义(均为P>0.05)。结论持续性角膜上皮缺损模型,在缺损持续的第3天和第5天骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。
- 齐文娟吴静侯光辉王观峰陈剑徐锦堂
- 关键词：细胞周期角膜上皮缺损动物模型
- 蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤及其线粒体机制被引量：10
- 2015年
- 背景 研究表明,线粒体及氧化应激反应在蓝光导致的视网膜光化学损伤机制中具有重要作用,但蓝光对人视网膜色素上皮（RPE）细胞的损伤与照射时间的关系研究较少. 目的 从供体眼球中分离和培养人RPE细胞,研究蓝光诱导的人RPE细胞氧化损伤的可能机制. 方法 从供体眼球中分离和培养RPE细胞,将培养的细胞分为正常对照组（0h组）、光照0.5、1、2、3、4、5、6、12和24 h组.正常对照组细胞培养在暗环境中且不给予蓝光照射,光照组细胞给予辐射强度为（4.0±0.5） mW/cm2的蓝光照射,按分组分别照射相应时间.采用MTT法检测各组RPE细胞的活性,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构的变化;采用流式细胞术检测RPE细胞中活性氧簇（ROS）的生成量以评价各组细胞的氧化应激反应情况;采用实时荧光定量PCR技术检测RPE细胞线粒体中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）及环氧合酶1（COX1） mRNA的相对表达量,评价RPE细胞中线粒体的功能.结果 正常对照组的细胞存活率为（100.00±20.00）％,光照1、2、3、4、5、6、12、24 h组人PRE细胞存活率分别为（95.73±0.89）％、（94.67±2.56）％、（84.23±0.16）％、（78.57±3.09）％、（75.43±2.18）％、（66.13±1.42）％、（53.43±1.91）％和（47.97±1.36）％,各组细胞存活率的总体比较差异有统计学意义（F=172.270,P=0.000）,其中光照3、4、5、6、12、24 h组细胞存活率与正常对照组比较均显著下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.透射电子显微镜下可见光照6、12、24 h组RPE细胞空泡样变、线粒体肿胀、微绒毛减少甚至消失等改变.流式细胞术检测发现,正常对照组、光照0.5、1、2、3、4、5、6h组人RPE细胞中ROS的相对量分别为（14.75±2.49）％、（19.04±1.02）％、（22.81±3.20）％、（28.75±2.15）％、（33.06±0.96）％、（40.64±2.11）％、（48.25±2.50）％和（60.44�
- 邹秀兰俞永珍徐哲张楚王观峰邹玉平
- 关键词：氧化应激活性氧簇人视网膜色素上皮细胞
- Bax、Bcl-2在丙烯醛诱导的ARPE-19细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察Bax、Bcl-2蛋白在丙烯醛诱导的体外培养ARPE-19细胞凋亡中的作用。方法将培养的ARPE-19细胞置于含有体积分数10%胎牛血清的完全培养基中,于37℃、体积分数5%CO2培养箱孵育;用不同浓度(50μmol·L-1、100μmol·L-1)丙烯醛处理对数期培养的ARPE-19细胞24 h,设不加药的空白对照组,用流式细胞仪检测丙烯醛诱导ARPE-19细胞的凋亡情况,Western blot检测ARPE-19细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果流式细胞仪显示,早期在空白对照组中细胞凋亡率为2.97%,50μmol·L-1丙烯醛处理组中为4.67%,100μmol·L-1丙烯醛处理组中为50.07%;晚期凋亡细胞在空白对照组中细胞凋亡率为1.66%,50μmol·L-1丙烯醛处理组中为24.24%,100μmol·L-1丙烯醛处理组中为6.77%。Western blot显示空白对照组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为0.293 9,50μmol·L-1丙烯醛处理组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为1.389 2,100μmol·L-1丙烯醛处理组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为1.496 1。结论丙烯醛可以通过激活凋亡蛋白Bax及抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来导致ARPE-19细胞凋亡。
- 邹秀兰王观峰皮荣标李文立俞永珍邹玉平
- 关键词：丙烯醛细胞凋亡BAXBCL-2
- PRP对DR患者视网膜血液循环时间及血流动力学的影响被引量：3
- 2018年
- 目的:分析全视网膜激光光凝(PRP)手术对糖尿病视网膜病变(DR)患者视网膜动静脉循环时间及血流动力学的影响,为临床治疗提供参考。方法:选取2013-05/2018-02期间在本院接受PRP治疗的DR患者80例80眼。分别于治疗前和治疗后3mo使用眼底荧光造影系统记录视网膜静脉分支主干发生层流时间和全部充盈时间(V1和V2)、视网膜动脉分支主干显影时间和全部充盈时间(A1和A2),并计算视网膜动静脉经过时间(V2-A1)、视网膜动脉经过时间(A2-A1)、视网膜静脉经过时间(V2-V1)及视网膜毛细血管经过时间(V1-A2);使用全自动生化分析仪检测红细胞聚集指数、血细胞压积、血浆粘度、全血粘度高切及全血粘度低切;使用彩色多普勒超声诊断仪记录眼动脉阻力指数(RI)、收缩期最大血流速度(PSV)和舒张末期血流速度(EDV)。结果:治疗后3mo,本组患者V1-A2时间较治疗前显著延长,红细胞聚集指数、血细胞压积、血浆粘度、全血粘度高切及全血粘度低切较治疗前显著降低,RI较治疗前显著降低,EDV、PSV较治疗前显著升高,差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论:PRP手术对DR患者视网膜动静脉循环时间及血流动力学均会产生一定的影响,对视网膜毛细血管经过时间的影响较明显。
- 闻毅颐李东豪王观峰杨倩王琛
- 关键词：糖尿病视网膜病变血流动力学
- 组织因子靶向肽对蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用被引量：7
- 2017年
- 背景视网膜光损伤可造成视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤，是影响年龄相关性黄斑变性（AMD）发生和发展的重要因素之一。研究表明，组织因子（TF）在氧化损伤的RPE细胞中和AMD患者的脉络膜新生血管（CNV）中呈高表达，推测抑制TF可预防RPE细胞的损伤以及抑制CNV。目的观察TF靶向肽（TF-TP）对蓝光诱导的人RPE细胞损伤的保护作用。方法体外分离和培养人RPE细胞并分为空白对照组、蓝光照射组和TF-TP组。空白对照组细胞在常规条件下进行处理；蓝光照射组细胞用辐照强度为（4.0±0.5）mW/cm2的蓝光照射12 h建立蓝光损伤细胞模型；TF-TP组先分别用不同浓度（10、100、150、200、300 μmol/L）TF-TP培养细胞24 h，再用蓝光照射12 h。采用CCK-8法检测各组细胞的存活率；分别在普通倒置显微镜和透射电子显微镜下观察RPE细胞的形态和超微结构变化；采用Hoechst染色法检测各组细胞的凋亡情况；采用Western blot法检测各组细胞中TF蛋白和相关凋亡蛋白bax和bcl-2的表达。结果不同浓度TF-TP组间RPE细胞存活率比较，差异无统计学意义（F＝2.15，P＝0.11）。空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞存活率分别为（100.0±0.00）%、（43.79±6.55）%和（63.45±3.57）%，150 μmol/L TF-TP组细胞存活率较蓝光照射组明显增加，差异有统计学意义（P＝0.00），以150 μmol/L TF-TP为后续实验的最适浓度。光学显微镜下和透射电子显微镜下显示，蓝光照射组有较多皱缩、变形、悬浮细胞，可见细胞微绒毛数量减少，部分线粒体嵴断裂和缺失以及细胞空泡样变性，而150 μmol/L TF-TP组异常形态的细胞较少，细胞绒毛结构较完整，细胞质中空泡样结构改变和线粒体损伤改变明显减轻。空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞凋亡率分别为（0.98±0.19）%、（9.98±0.82）%和（5.73±0.88）%，组间�
- 李丹丹邹秀兰陈京霞徐哲俞永珍周文杰王观峰饶本强邹玉平
- 硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛介导的视网膜色素上皮损伤的研究
- 目的： 探究新型合成药物硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）损伤的保护作用和丙烯醛介导大鼠视网膜-脉络膜组织的损伤作用。 方法： 1、HE染色法检测ARPE-19细胞形态改...
- 王观峰
- 关键词：丙烯醛视网膜色素上皮
- 文献传递
- 硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛损伤ARPE-19细胞的保护作用被引量：7
- 2013年
- 目的利用丙烯醛建立年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)的细胞损伤模型,并观察硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导ARPE-19细胞损伤的保护作用。方法 MTT比色法检测ARPE-19细胞的生长周期。将25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1丙烯醛加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24h,复制AMD细胞水平的损伤模型并确定其损伤浓度;预先加入50μmol·L-1、100μmol·L-1、150μmol·L-1硫辛酸烟酸二联体及150μmol·L-1硫辛酸预处理对数生长期细胞24h后,再加入已经确定细胞损伤模型的丙烯醛浓度处理24h,前后两次处理后均用MTT比色法检测细胞活性,HE染色法检测细胞数量和形态改变。结果 ARPE-19细胞24h内开始贴壁,4～5d细胞生长开始融合,第1-6天后生长分裂迅速进入对数生长期,6d后即开始随着时间延长活性显著下降。当丙烯醛浓度达到50μmol·L-1时,ARPE-19细胞数量明显减少,细胞肿胀、坏死,胞浆收缩、细胞核聚集;而当硫辛酸烟酸二联体浓度达到100μmol·L-1时即可以明显减少50μmol·L-1丙烯醛诱导的ARPE-19细胞活性的降低,防止凋亡小体的形成。MTT结果显示:100μmol·L-1硫辛酸烟酸二联体+丙烯醛处理组(50μmol·L-1)抗凋亡效果优于100μmol·L-1硫辛酸组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用丙烯醛可以诱导ARPE-19细胞损伤来建立AMD细胞损伤的模型,硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导的ARPE-19细胞损伤具有保护作用。
- 王观峰姚敏李文立邹秀兰邹玉平皮荣标
- 关键词：丙烯醛细胞活性氧化应激
- 丙烯醛诱导大鼠脉络膜新生血管的形成（英文）被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨丙烯醛(AC)诱导大鼠脉络膜新生血管(CNV)的形成。方法:选取远交群大鼠(SD)12只,随机将大鼠分为三组,即空白组,AC诱导4wk组和AC诱导8wk组,其中空白对照组每日200μL新鲜自来水灌胃,实验组为200μL AC溶液(2.5 mg/kg/d)每日灌胃,分为诱导4wk组和8wk组,取材后视网膜组织石蜡包埋,切片及HE染色。结果:空白对照组及AC诱导4wk组均见RPE-Bruch膜连续性完整,未见明显异常;AC诱导8wk组发现RPEBruch膜连续性缺失,脉络膜新生血管长入视网膜神经上皮层内。结论:长期使用AC可以诱导大鼠脉络膜新生血管形成。
- 王观峰邹秀兰李东豪王琛李文立皮荣标
- 关键词：丙烯醛脉络膜新生血管
