王芳芳
- 作品数：18 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省科技重大专项计划国际原子能机构基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化被引量：1
- 2014年
- 根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。
- 王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远
- 关键词：长角血蜱MICRORNA荧光定量PCR
- 微小扇头蜱不同发育阶段miRNA的动态分析
- 尽管一些microRNA表达谱的研究已经在长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)唾液腺以及微小扇头蜱(Rhipisephalus(Boophilus) microplus)美国株中得到了一定的研究...
- 罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳
- 关键词：MICRORNA高通量测序发育阶段
- 亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织间microRNA-10的表达分析
- 为了解亚洲璃眼蜱microRNA：10(miRNA：10)的生物学特征.本研究利用常规PCR从亚洲璃眼蜱中扩增获得miRNA：10前体序列,并通过MEGA4软件将此序列与部分已知物种miRNA：10前体序列进行比对；qP...
- 袁小松罗金田占成谢俊仁田美媛王芳芳刘光远
- 关键词：兽医学基因序列原核表达
- microRNA碱基编辑特性的研究进展被引量：1
- 2013年
- 为了更好地了解microRNA分子中碱基编辑的产生机理,论述了microRNA序列碱基编辑特征,以及碱基编辑在生物组织、物种进化、神经发育等方面的特征,并就碱基编辑在microRNA中的研究方法进行了阐述。展望了碱基编辑在microRNA分子中的研究前景,以期为碱基编辑的生物学机制研究提供参考。
- 罗金刘光远袁小松王芳芳田占成谢俊仁王辉
- 关键词：MICRORNA
- 四种蜱源MIF基因的原核表达及表达产物的反应原性分析
- 2013年
- 为研究不同蜱源巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因的生物学特性,本研究设计了1对特异性引物,采用PCR从亚洲璃眼蜱、青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱中扩增MIF基因的完整阅读框,并对该序列一级结构特征进行分析。PCR产物经BamHⅠ+EcoRⅠ双酶切后亚克隆到表达载体pGEX-4T-1上,重组质粒转入感受态细胞BL21(DE3),37℃下用1mmol/L IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析MIF基因体外的表达特征;接着用亚洲璃眼蜱全蜱血清与四种不同蜱种MIF重组蛋白进行Western-blot分析。结果显示,MIF基因完整阅读框全长351bp,编码116个氨基酸。氨基酸比对结果显示,亚洲璃眼蜱、青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱MIF基因推导的氨基酸序列与已知的长角血蜱MIF基因推导的氨基酸序列相似性分别为98%、93%、93%、92%。SDS-PAGE结果显示,诱导的MIF重组蛋白的分子质量约为38.5ku。亚洲璃眼蜱全蜱血清与亚洲璃眼蜱MIF重组蛋白有较强的反应原性,且该血清与青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱MIF重组蛋白存在交叉反应。结果表明,蜱MIF是一种良好的抗原分子。
- 袁小松罗金谢俊仁田占成田美媛郑进峰王芳芳张以芳刘光远
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子原核表达
- 残缘璃眼蜱subolesin基因的原核表达及表达产物的反应原性分析被引量：1
- 2015年
- 为研究残缘璃眼蜱subolesin基因的生物学特性以及寻找新的抗蜱和蜱传病疫苗候选抗原,根据GenBank上登录的小亚璃眼蜱subolesin基因核苷酸序列设计特异性引物,以残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱的饥饿成蜱cDNA为模板,扩增出subolesin基因的完整阅读框(ORF)。将残缘璃眼蜱subolesin基因的PCR产物经EcoRⅠ+NotⅠ双酶切后连接至表达载体pGEX-4T-1,把重组质粒pGEX-4T-1-subolesin导入感受态细胞BL21(DE3)中,在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析subolesin基因的体外表达特征;用Western-blot分析Subolesin蛋白的反应原性。结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱subolesin基因的ORF长度分别为492、492、486bp,分别编码163、163、161个氨基酸。subolesin基因序列和推导的氨基酸序列的比对结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱与参考的小亚璃眼蜱的核苷酸序列同源性分别为98%、98%、89%,氨基酸序列同源性分别为98%、99%、93%。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组残缘璃眼蜱Subolesin蛋白的分子质量为45ku,纯化的subolesin重组抗原可与抗残缘璃眼蜱全蜱血清、残缘璃眼蜱唾液腺、卵巢血清有较强的反应原性。
- 王素艳田占成谢俊仁陈泽任巧云罗金王芳芳袁小松李凯陈秋语殷宏刘光远
- 关键词：原核表达反应原性
- 长角血蜱热休克蛋白HSP70基因的鉴定
- 从长角血蜱卵cDNA表达文库中筛选到了一个长角血蜱热休克蛋白类似物—Hsp70基因。Hsp70基因全长为231lbp,完整阅读框长度为1983bp,编码661个氨基酸,预测分子量为72.5 kDa,等电点为5.2。具有H...
- 田占成刘光远谢俊仁罗金张萍沈辉王芳芳张丽艳
- 文献传递
- Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化
- 基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo：miR：275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo：miR：275的成熟体序列信息,设计特异性茎环...
- 王芳芳刘光远罗金袁小松田占成谢俊仁王素艳郭锦霞
- 关键词：长角血蜱MICRORNA荧光定量PCR
- Bantam在长角血蜱不同变态发育时期表达谱及代谢通路分析
- 为进一步研究Bantam与长角血蜱生长发育间的关系奠定基础.本研究参考miRBase数据库中Bantam(登录号：MI0012259)序列,设计特异性引物,RT：PCR方法获得Bantam序列并进行生物信息学分析.利用q...
- 罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳
- 关键词：变态发育MICRORNA表达谱
- 长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析
- 2013年
- 为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。
- 赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松
- 关键词：长角血蜱生物信息学克隆真核表达
