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王彦云
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
南京医科大学第二附属医院
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发文基金:
江苏省自然科学基金
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
司进
南京医科大学第二附属医院
渠利利
南京医科大学第二附属医院
沈鹏
南京医科大学第二附属医院
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年份
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2014
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恶性疟原虫环子孢子蛋白肝细胞靶向肽段CSR2 a-EGFP 的原核表达、纯化及鉴定
被引量:1
2014年
目的:从恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白(circumsporozoite protein,CSP)的全长编码基因中扩增4个CSP基因编码片段,克隆至原核表达载体pET28 a/EGFP 中进行表达纯化,观察环子孢子蛋白肽段与EGFP融合蛋白对肝细胞的靶向结合能力,探讨其作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子载体的可行性。方法根据恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白的编码序列设计4对引物,利用聚合酶链反应( PCR )扩增出4段CSP 的编码基因,将其克隆到原核表达载体pET28 a/EGFP中,与EGFP融合表达,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,采用SDS-PAGE对纯化的融合蛋白检测;并观察重组环子孢子蛋白对不同组织细胞的结合能力。结果从恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因中成功扩增到4段分别为300、90、120、80 bp的基因片段,且在原核表达载体pET28 a/EGFP中经诱导表达出相对分子质量约39×103、31×103、33×103和30×103大小的融合蛋白: CSR1a-EGFP、CSR1b-EGFP、CSR2a-EGFP及CSR2b-EGFP;通过Ni2+亲和柱纯化获得重组CSP融合蛋白,能被疟原虫阳性血清特异识别,且CSR2 a-EGFP能够与肝癌和正常肝细胞特异性地结合,与其他组织来源的细胞则未见反应。结论重组环子孢子蛋白CSR2a-EGFP能够与肝组织特异性地结合,作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子具有一定的潜在应用价值。
渠利利
王彦云
龚来玲
沈鹏
朱进
司进
关键词:
恶性疟原虫
环子孢子蛋白
肝细胞
靶向作用
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