王巧刚
- 作品数：11 被引量：8H指数：2
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目更多>>
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- 克感复方对流感病毒抑制作用的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨克感复方在MDCK细胞上抗流感病毒的作用并对其机制进行初步研究。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验3种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究克感复方抗流感病毒的作用并判断其作用原理。同时,通过药物血凝抑制实验分析其抗流感病毒作用是否与病毒血凝素相关。结果:克感复方对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(2.84±0.65)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(0.18±0.12)mg/mL,选择性指数(SI)为15.78。有细胞外杀流感病毒作用,但作用较弱,最高抑制率未超过50%。无阻断流感病毒吸附的作用。无药物血凝抑制作用。结论:克感复方在MDCK细胞上具有抗流感病毒的作用,其中抑制流感病毒增殖的能力最强。
- 尤金彪郭潮潭吴海波沃恩康李颖王怡婷王闻哲王巧刚
- 关键词：流感病毒抗病毒作用
- 鸡贫血病毒vp3基因的克隆和分子特征
- 2011年
- 目的获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒（CAV）筇基因并分析其变异情况。方法根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物，利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的硪，基因克隆，将其克隆到载体进行测序。结果40份鸡血清中共检出CAV阳性16份，阳性率40．0％。序列测定结果表明，叼妇基因长366bp，编码121个氨基酸，与GenBank登录的其他毒株目妒基因的核苷酸序列同源性为97．O％。100．0％，氨基酸序列同源性为95．0％-100．0％。结论通过PCR方法扩增获得了CAVvp3基因，w3基因及VP3蛋白总体上非常保守。
- 吴海波沃恩康尤金彪王怡婷王巧刚吴南屏郭潮潭
- 关键词：鸡贫血病毒VP3基因克隆分子特征
- H7N9亚型人禽流感病毒全基因组分析及其生物特性研究被引量：1
- 2013年
- 目的分析研究H7N9亚型人禽流感病毒基因组序列特征，明确该病毒的分子进化及生物学特性。方法GISAI和GenBank中获取H7N9基因组全序列，对各段基因与已知序列进行分析比较，绘制进化树，并全面分析和预测病毒株的基因组特征、传染性、致病性、药物敏感性等。结果町N9病毒的基因组完全属于禽源，HA和NA基因属于欧亚谱系，其余6段基因与瑚N2亚型病毒同源性高达99％。该病毒尚不能在人与人之间有效传播，不呈现典型高致病性病毒特征，病毒对金刚烷胺和金刚乙胺耐药，而对奥司他韦敏感。结论该病毒是H7亚型、N9亚型和H9N2亚型禽流感病毒三者的重配体，需警惕该毒株的进一步变异。
- 沃恩康王怡婷陈帅帅吴海波尤金彪王巧刚郭潮潭
- 关键词：禽流感基因组分子特性
- 克感复方体外MDCK细胞上抗流感病毒作用的研究
- 目的:探讨克感复方在MDCK细胞上抗流感病毒的作用并对其机制进行初步研究。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验三种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究克感复方抗流感病毒的作用并判断其作用原理。...
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- 关键词：流感病毒抗病毒作用
- 文献传递
- 携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建
- 2012年
- 目的获得能够携带肠道病毒71型（EV71）中和线性表位的重组流感病毒。方法通过PCR方法，在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列，获得重组质粒；进行反向遗传学操作，构建重组流感病毒。结果获得了2个重组质粒pPolⅠ／Ⅱ／WSN-HA-SP55和pPolⅠ／Ⅱ／WSN-HA-SP70，并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒，重组病毒3次传代血凝效价都保持在2^7和2^5HAU，具有较好的稳定性。结论通过反向遗传学操作，构建出携带Ev71中和线性表位的重组流感病毒，为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础。
- 吴海波沃恩康尤金彪王怡婷王巧刚郭潮潭
- 关键词：肠道病毒属疫苗
- 甲型流感病毒NS1蛋白应用研究进展
- 2011年
- 流感病毒是引起急性流感的病原体，具有传染性强、变异快和宿主范围广的特点。随着对流感病毒研究的深入，人们对流感病毒的认知度不断提高，对其的开发利用也随之启动，其中对最短的NS基因及其编码蛋白（NSI和NS2）的研究开发更令人注目。NS1蛋白虽在病毒出芽时未被包装，但在感染细胞中发挥了多种生物功能，如对宿主细胞IFN的调节、与病毒RNA转录和蛋白的表达有关等。人们利用NS1蛋白这些生物特性，进行研究开发利用。此文对NS1蛋白开发应用及其研究进展作一综述。
- 王巧刚郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型NS1蛋白
- 大蒜提取物抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨大蒜提取物G、G1、G2抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用.方法 以利巴韦林为阳性对照药物,用不同方法获得的不同浓度大蒜提取物作用于流感病毒感染的MDCK细胞,以MTT法检测细胞存活率,判断大蒜抗流感病毒的效果.结果 G1对MDCK细胞的半数毒性浓度（CC50）为（60.39±7.00）mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度（EC50）为（15.00±4.36）mg/mL,选择性指数（S1=CC50/EC50）为4.03;G2的CC50为（50.93±10.17）mg/mL,但其抑制流感病毒的效果未超过50%;G无抑制效果.结论 G1在MDCK细胞上对流感病毒有明显的抑制作用,G2抑制作用并不明显,而G无抑制作用.结果 证明,不同提取方法其抑制作用有所差别.
- 尤金彪郭潮潭王怡婷吴海波沃恩康李颖王巧刚王怡
- 关键词：大蒜流感病毒抗病毒作用
- 流感病毒实时荧光PCR检测及分型方法的建立
- 目的建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流...
- 沃恩康王怡婷吴海波尤金彪王巧刚郭潮潭
- 关键词：流感病毒
- 文献传递
- 抗流感病毒NS1蛋白抗体的制备及其生物特性研究
- 2012年
- 目的NSI蛋白在流感病毒复制和传播中起到重要的调节作用，其功能多样，如能调节宿主细胞的蛋白合成、诱导感染细胞的凋亡以及拮抗IFN作用等，此外还有许多功能至今尚未明了。因此，研制一个特异性高的抗NS1抗体，对NS1蛋白功能的进一步研究起到重要作用。方法RT-PCR扩增流感病毒NS1基因，将其克隆进原核表达载体pET-28a（＋）中。然后在大肠埃希菌B121中表达，用切胶纯化方法获取NS1融合蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔，制备效价较高的多克隆抗体，并测定其效价（间接ELISA法）。用病毒感染细胞实验、Western印迹法和间接免疫荧光实验等方法，观察病毒复制过程中NS1蛋白的表达及细胞定位情况。结果首先构建了能表达NS1蛋白的质粒，并经原核细胞表达获得了NS1蛋白。然后用该蛋白免疫大白兔，获得了效价较高（1：256000）的抗NS1蛋白抗体。实验发现，该抗体可以特异性结合非依赖亚型的甲型流感病毒NS1蛋白。病毒感染后6h即可以检测到NSI蛋白，随着病毒复制时间的延长NS1蛋白表达量变化不明显；24h后NS1蛋白主要分布于细胞核内并能定位于核仁中，也有部分位于细胞质。结论本研究通过原核表达获得了NS1蛋白，并利用常规的免疫方法获得了效价较高的抗NS1多克隆抗体。所制备的多克隆抗体能够有效定位NS1蛋白的表达，并且能和甲型流感病毒各亚型结合，具有较高的特异性。该抗体不仅能用于NS1蛋白功能及其对宿主细胞影响的研究，而且可用于鉴别诊断猪或其他动物中的病毒感染还是接种疫苗后的反应，有较好的开发应用前景。
- 王巧刚吴海波沃恩康王怡婷尤金彪郭潮潭
- 关键词：正黏病毒科NS1基因多克隆抗体
- 大蒜提取物体外MDCK细胞上抗流感病毒作用的研究
- 目的:探讨大蒜提取物G、G1、G2在MDCK细胞上抗流感病毒的作用及其初步机制。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验三种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究大蒜提取物抗流感病毒的作用并判断其初...
- 尤金彪郭潮潭吴海波沃恩康王怡婷王巧刚
- 关键词：大蒜流感病毒抗病毒作用
- 文献传递
