汪琦 作品数:33 被引量:189 H指数:7 供职机构: 北京出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 国家高技术研究发展计划 质检公益性行业科研专项项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 轻工技术与工程 农业科学 生物学 更多>>
利用12S rRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性鉴定动物种类 被引量:9 2010年 目的:建立一种精确可靠的鉴定常见的10种动物(猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法:利用12SrRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)鉴别动物种类。将线粒体12S rRNA基因通过引物的5'端用FAM荧光标记,从基因组DNA中扩增450bp的目的片段。引物对1(下游引物FAM标记,上游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶AluⅠ酶切。引物对2(上游引物FAM标记,下游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶Tru9Ⅰ酶切。得到的酶切产物分别在遗传分析仪ABI3100上进行毛细管电泳,片段大小用Peak Scanner 1.0软件分析。结果:根据AluⅠ酶切图谱能够区分鸡、马、猪和三文鱼,而鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗因酶切图谱相同无法分开。根据Tru9Ⅰ酶切图谱,能够进一步将鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗分开。同一种动物不同个体的酶切图谱完全相同,结果具有可重复性。没有出现物种内多态的现象。大多数情况下,实际得到的末端片段长度与理论值非常接近,只存在2~5bp的差异。结论:该方法操作简单、结果精确,适用于鉴定动物种类。 汪琦 张昕 赵大贺 马海萍 陈广全 张惠媛关键词:RRNA 2016年北京市海产品中创伤弧菌的污染调查及两种检测方法比较 被引量:12 2018年 目的对北京市市售海产品的创伤弧菌污染情况进行调查,并比较实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)法与VITEK鉴定方法检测结果的一致性。方法采用传统检验方法结合分子生物学方法对在北京市市场随机采集的105份海产品进行创伤弧菌检验,并比较了RT-PCR法和VITEK鉴定方法的准确性。结果 105份海产品中,有40份样品检出创伤弧菌,检出率为38.10%;其中,虾类产品检出率高达52.38%(11/21),其次为贝类产品(37.88%,25/66)和鱼类产品(22.22%,4/18)。经rpo B基因测序验证,RT-PCR和VITEK方法的准确率分别为100.00%(40/40)和67.50%(27/40)。结论北京市海产品中存在创伤弧菌的污染,应对海产品中创伤弧菌引起食源性污染的潜在风险进行评估,预防食物中毒的发生。 王紫薇 汪琦 赵晓娟 韩笑 刘莉 魏咏新 陈鑫 杨丽莉 曹嘉悦 徐蕾蕊 吕敬章 曾静关键词:创伤弧菌 海产品 污染 食源性致病菌 进口三文鱼单核细胞增生李斯特菌污染检测 被引量:3 2008年 目的对2003~2006年由北京口岸挪威进口的三文鱼进行单核细胞增生李斯特菌污染情况监控,并对分离的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型。方法采用美国食品药品管理局颁布的检测方法对单核细胞增生李斯特菌进行分离和血清分型。结果挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.2%~6.3%。在2003~2006年呈下降趋势;血清分型结果显示,分离自三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的血清型主要是1/2a、1/2b和4b型,分别占分离菌株的85%,6%和6%。结论首次对分离自挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型,所分离的菌株中97%是引起人类李斯特菌病的菌株。 曾静 魏海燕 张西萌 陈广全 饶红 张惠媛 汪琦 张昕关键词:三文鱼 单核细胞增生李斯特菌 血清型 细菌磁小体的修饰及其在病原物检测中的应用 被引量:10 2010年 趋磁细菌可以在细胞内合成Fe3O4或F3S4颗粒,称为磁小体。磁小体粒径为纳米级,晶形稳定,有质膜包被,在免疫检测、临床诊断、靶向治疗、污水处理等方面均有很好的应用前景。文章主要介绍采用化学法和生物法对磁小体进行修饰,并利用修饰后的磁小体对病原物进行免疫磁性分离、前期诊断和痕量检测的方法。 李爱华 唐涛 张惠媛 汪琦 田杰生 李颖关键词:磁小体 免疫磁性分离 免疫检测 水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型 被引量:4 2012年 目的采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。 张昕 汪琦 张惠媛 陈广全 张捷关键词:副溶血性弧菌 分子分型 2004-2012年分离自北京口岸进出口食品的沙门菌耐药性分析 被引量:4 2017年 目的了解北京口岸进出口食品中分离沙门菌的耐药状况及耐药谱情况,分析耐药趋势,为制定食品安全监管措施和抗生素的使用提供依据。方法对65株本实验室分离的沙门菌以及17株参比菌株,共82株沙门菌采用Kindy-Bauer(KB)法检测其对15种抗生素的敏感性,根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准进行判断,并对药敏试验结果进行数据分析。结果 65株沙门菌分离株除对头孢吡肟、头孢曲松、阿米卡星、头孢噻肟全部敏感外,对其余11种抗生素均有不同程度的耐药,其中氨苄西林耐药率最高为16.9%(11/65),其次为哌拉西林(13.8%,9/65)、四环素(13.8%,9/65)、卡那霉素(9.2%,6/65)和链霉素(7.7%,5/65)。在所有65株沙门菌分离株中,对1种抗生素耐药的菌株共11株,占16.9%(11/65),对2种抗生素耐药的菌株为1株,占1.5%(1/65),对3种及以上抗生素耐药的多重耐药株为7株,多重耐药率为10.8%(7/65)。结论北京口岸进出口食品中分离的沙门菌对多种抗生素耐药。 刘莉 韩笑 王紫薇 汪琦 赵晓娟 陈鑫 杨丽莉 魏咏新 曾静关键词:沙门菌 耐药性 食品安全 进出口食品 食源性致病菌 海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较 被引量:4 2017年 目的了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较。方法样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法鉴定可疑菌落。以rpoB基因测序方法为参考,比较了实时荧光PCR和VITEK两种方法的鉴定效果。结果对北京市水产品市场随机采集的116份海产品进行了检测,实时荧光PCR法鉴定出溶藻弧菌阳性样品95份,检出率高达82%。使用科玛嘉弧菌显色培养基的检出率高于TCBS培养基,分别为82%(95/116)和72%(83/116)。经rpoB基因核苷酸序列测定确定95株疑似菌株为溶藻弧菌。采用VITEK 2 COMPACT GN鉴定卡对这95株菌株进行鉴定,31株鉴定为溶藻弧菌,其余未能得到准确的鉴定结果。结论北京市市售海产品中溶藻弧菌检出率高。科玛嘉弧菌显色培养基比TCBS琼脂培养基更适于溶藻弧菌的分离,实时荧光PCR法的鉴定效果优于VITEK法。 赵晓娟 汪琦 王紫薇 刘莉 韩笑 曹佳悦 曾静关键词:溶藻弧菌 RPOB基因 VITEK COMPACT 海产品 食源性致病菌 利用PCR方法快速检测食品中的沙门氏菌 被引量:36 2005年 本文介绍了一种快速检测食品中沙门氏菌的方法。操作步骤为,在缓冲蛋白胨水(BPW)中增菌18-24h,生理盐水洗菌2次后煮沸裂解细胞,以invA为目的基因进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测,两天时间即能得到明确结果。以全脂奶粉、生牛肉和加工过的鸡肉为实验对象,人为添加沙门氏菌,检测结果与传统培养方法和BAX(r)系统检测结果一致。实验检出限为100cfu/25g,准确性达100%。 汪琦 张昕 张惠媛 陈广全关键词:沙门氏菌 PCR PCR方法 食品 琼脂糖凝胶 蔬菜及水果中NLVs和HAV检测的研究 被引量:8 2007年 目的建立蔬菜水果中诺沃克样病毒(NLVs)和甲肝病毒(HAV)的RT-PCR检测方法。方法使用具有较强缓冲力的甘氨酸缓冲液将病毒从试样表面洗脱下来,用PEG6000将病毒沉降后进行RNA提取和RT-PCR检测。结果蔬菜中NLVs和HAV检测的灵敏度可达1.0×103RT-PCRU50/30 g试样和30 TCID50/30 g试样。而草莓样品的NLVs和HAV最低检出限为1.7×103RT-PCRU50/100 g试样和48 TCID50/100 g试样。结论该方法灵敏、可靠。 饶红 陈广全 冯骞 付溥博 汪琦关键词:聚合酶链反应 诺沃克病毒 蔬菜 水果 RT-PCR法检测贝类中的甲肝病毒的研究 被引量:6 2006年 在世界范围内,甲肝病毒是与食用贝类有关的主要传染性疾病之一。由于贝类中含有PCR抑制剂以及病毒富集过程中病毒的回收率低,阻碍了天然污染的贝类中HAV的PCR检测。研究中建立了一种经苷氨酸缓冲液洗涤,2次PEG沉降富集病毒,然后进行RNA提取和RT-PCR对贝类中的甲肝病毒进行检测的方法。经比较,采用小体系肠道样品检测比采用全贝检测的富集效果更佳,并比较了PEG8000和PEG6000对病毒富集的效果,回收率分别为13.5%和7.6%,此方法可有效地降低PCR抑制剂的影响,最低检测限可达10个TCID50/1.5 g。 饶红 陈广全 曾静 汪琦 付浦博关键词:甲肝病毒 贝类