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牦牛铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建及其表达研究被引量：2: 2010年; 【目的】为解决医用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)来源的限制,利用基因工程方法构建牦牛Cu,Zn-SOD原核表达系统,为重组牦牛Cu,Zn-SOD作为注射用药奠定基础。【方法】RT-PCR扩增牦牛Cu,Zn-SOD编码基因,构建Cu,Zn-SOD/pET22b(+)重组表达载体,并转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE、活性染色及邻苯三酚法进行检测,采用BradFord方法测定融合蛋白浓度。【结果】本试验成功获得了牦牛Cu,Zn-SOD cDNA,长456bp,编码152个氨基酸。与普通牛SOD编码基因序列cDNA一致率为99.6%,氨基酸序列一致率为98.7%,表达产物分子质量约为32kD。酶粗提取液比活约为35U·mg-1。重组蛋白浓度0.2772(mg·mL-1)。【结论】本研究成功构建了牦牛Cu,Zn-SOD/pET22b(+)原核表达载体,表达量较高、稳定性强,重组表达产物具有较高生物学活性。; 徐亚欧袁忠毛德才毛亮郑玉才; 关键词：牦牛 CU,ZN-SOD 克隆原核表达

牦牛血液铜锌超氧化物歧化酶cDNA克隆测序: 2010年; 本试验从牦牛血液中提取总RNA,然后用AMV反转录酶对其进行反转录产生第一条cDNA链。根据奶牛Cu/Zn-SODcDNA序列(序列号:NM174615)设计一对PCR引物,对反转录后产生的第一条cDNA链进行PCR扩增,并克隆测序,测序结果为483bp。结果证实可从牦牛血液中提取到少量合成的铜锌超氧化物歧化酶的mRNA。; 陈增国毛德才毛亮海思源徐亚欧; 关键词：牦牛铜锌超氧化物歧化酶克隆

藏绵羊脂蛋白脂酶基因克隆及序列分析被引量：6: 2011年; [目的]为深入研究藏绵羊肉用性能的遗传调控与营养代谢关系。[方法]利用RT-PCR和T-A克隆技术获得了藏绵羊LPL基因,并对其进行生物信息学分析。[结果]藏绵羊LPL编码基因全长1437 bp,编码478个氨基酸。将藏绵羊LPL基因及氨基酸序列分别与GenBank中公布的11种动物进行序列一致率比对,发现藏绵羊与所选动物的LPL基因序列一致率在84.6%～99.6%,LPL氨基酸序列一致率在88.8%～99.0%。藏绵羊与普通绵羊LPL基因存在6个位点核苷酸差异,其中有一个核苷酸位点的差异没有引起相应氨基酸的改变,其余5个位点核苷酸的不同都引起了氨基酸的差异。[结论]该研究可为了解LPL基因的演化关系及作用机理提供资料。; 高思徐亚欧毛亮邵欢欢杨虎林舒浩国; 关键词：藏绵羊脂蛋白脂酶克隆系统进化

牦牛铜锌超氧化物歧化酶重组表达蛋白质: 本发明公开了一种牦牛铜锌超氧化物歧化酶重组表达系统的构建方法及重组蛋白质。用逆转录聚合酶链式反应克隆牦牛肝脏<I>Cu,Zn-SOD</I>cDNA，连接到原核表达载体pET22b(+)，构建重组原核表达载体，并转化到大...; 徐亚欧毛德才毛亮袁忠杨德孝郑玉才; 文献传递

藏绵羊肌肉生长抑制素重组表达蛋白质: 本发明公开了一种重组藏绵羊肌肉生长抑制素蛋白质。包括克隆藏绵羊肌肉生长抑制素编码基因MSTN，以该基因为模板PCR扩增并克隆MSTN生物活性区，构建重组表达载体，并转化到大肠杆菌构建基因工程菌，对工程菌进行IPTG诱导表...; 徐亚欧毛亮郑玉才; 文献传递

重组牦牛肌肉生长抑制素成熟肽的纯化及其免疫原性研究被引量：2: 2012年; 为了探索牦牛MSTN的作用机制,寻找合适的阻断MSTN活性的方法,最终实现牦牛的高效率育肥,本研究采用RT-PCR方法克隆牦牛MSTN成熟肽基因,构建MSTN-pET28a(+)重组表达载体,进而在E.coliBL21(DE3)宿主菌中进行表达,将表达产物用亲和层析纯化,最后用ELISA方法检测牦牛MSTN重组成熟肽的免疫原性。重组载体中连接的牦牛MSTN成熟肽基因包含330bp,编码109个氨基酸。含MSTN-pET28a(+)重组载体的工程菌经0.1mmol.L-1 IPTG诱导表达6h后,MSTN成熟肽的表达量约占蛋白总量的21%,总蛋白经亲和层析纯化后得到了高纯度的牦牛MSTN重组成熟肽,分子量约16.5ku;ELISA结果显示,兔抗牦牛MSTN重组成熟肽的血清效价为32 000个抗体单位,表明牦牛MSTN重组成熟肽具有较好的免疫原性。本研究建立了牦牛MSTN重组成熟肽高效表达系统并纯化获得具有免疫原性的牦牛重组MSTN成熟肽,这为通过调控MSTN功能来改良牦牛产肉性能的研究储备了技术条件。; 毛亮徐亚欧郑玉才; 关键词：肌肉生长抑制素牦牛免疫原性

一种鉴定单亲水牛亲权关系的方法及其引物、试剂盒: 本发明公开了一种鉴定单亲水牛亲权关系的方法及其引物、试剂盒，属于基因工程技术领域。本发明筛选出多态性丰富的8个微卫星引物，以待检水牛基因组DNA为模板进行PCR扩增，对PCR扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，根据检测结...; 徐亚欧孙蕊毛亮; 文献传递

藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析被引量：3: 2010年; 利用RT-PCR、T-A克隆技术获得了藏绵羊H-FABP基因,并对克隆序列进行分析.结果显示,藏绵羊H-FABP编码基因全长402bp,编码133个氨基酸.将藏绵羊H-FABP基因及氨基酸序列分别与Gene Bank中公布的山羊、水牛、家牛、野牦牛、猪、马、狗7种动物进行序列一致率比对,结果显示,藏绵羊与所选的7种动物的H-FABP基因序列一致率在90.8%～99.5%之间,H-FABP氨基酸序列一致率在93.2%～100%之间.其中,藏绵羊与藏山羊H-FABP基因存在2个位点核苷酸差异:114位碱基位点A→G和第129位碱基位点T→C,但两个位点的核苷酸差异均为同义密码子,藏绵羊与山羊H-FABP氨基酸无差异.; 韦吉春徐亚欧毛亮袁伟何孝凡; 关键词：藏绵羊克隆

藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白抑制肌肉生长功能的研究被引量：1: 2012年; 本试验旨在检测注射藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白后对小鼠的影响,研究肌肉抑制素的作用,为今后生产实践提供参考。本试验对50只小白鼠(雌、雄鼠各25只)进行分组,随机将雌雄鼠分为2组,其中对照组注射生理盐水,试验组注射肌肉抑制素蛋白,每隔1 d称重,试验期共3个月。试验期结束后,处死小鼠,并取小腿肌肉样本,利用石蜡切片法和浸渍离析法,测定小鼠肌纤维直径。试验结果表明,藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白对小鼠肌肉生长早期(37～45日龄)具有抑制作用。当小鼠体内对藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白产生抗体后,对小鼠肌肉生长的抑制作用逐渐减弱。藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白可使小鼠腿肌肌纤维横切面积增加、腿肌肌纤维直径增加。; 江容娥徐亚欧毛亮; 关键词：藏绵羊小白鼠石蜡切片肌纤维

藏绵羊肌肉生长抑制素重组表达蛋白质: 本发明公开了一种重组藏绵羊肌肉生长抑制素蛋白质。包括克隆藏绵羊肌肉生长抑制素编码基因MSTN，以该基因为模板PCR扩增并克隆MSTN生物活性区，构建重组表达载体，并转化到大肠杆菌构建基因工程菌，对工程菌进行IPTG诱导表...; 徐亚欧毛亮郑玉才

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毛亮