杨振丽
- 作品数：28 被引量：42H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌类器官的培养及鉴定
- 2024年
- 目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、顺铂药敏测试。结果共培养建立了44例乳腺癌类器官,均呈实性类球状生长。类器官ER、PR、HER-2、CK表达情况与患者临床样品一致。乳腺癌类器官对化疗药紫杉醇、多柔比星、顺铂具有一定敏感性。结论乳腺癌类器官作为新型体外模型,具有一定异质性,再现体内病生理功能特性。
- 夏雨佳杨振丽代娣刘玉琴
- 关键词：乳腺癌药敏实验
- 乳腺癌组织细胞的高效原代培养及其特性被引量：3
- 2017年
- 目的高效扩增乳腺癌组织细胞,明确其特性,为乳腺癌深入研究及个体化治疗提供实验材料。方法利用小鼠胚胎成纤维细胞3T3swiss作饲养层细胞,培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632,对乳腺癌组织细胞进行原代培养。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学检测细胞CK分子表达;RT-PCR检测HER-2,ER,PR及乳腺癌干细胞相关标志分子(如CD44,CD24等)mRNA的表达;STR检测以明确细胞身份。结果在饲养层细胞和Y-27632抑制剂同时存在的情况下,所培养的乳腺癌组织细胞增殖速度较快,可短时间获得大量细胞;细胞呈多角形上皮样,CK、HER-2、ER表达阳性,PR不表达;CD44和CD24表达阳性;经STR分析证明其身份正确。结论饲养层细胞及ROCK抑制剂有助于乳腺癌组织细胞的原代培养及大量扩增,扩增的细胞性质稳定,可用于个体化治疗研究。
- 杨振丽徐雅丽卞晓翠冯海凉刘玉琴孙强
- 关键词：饲养层细胞原代培养乳腺癌
- CCC-HPF-2细胞基因组DNA可作为STR分型标准物质被引量：2
- 2011年
- 目的检测细胞培养传代过程中的基因稳定性,筛选符合中国人遗传特性的DNA标准物质,建立DNA标准细胞库。方法通过显微镜下观察、免疫组织化学、核型分析检测细胞传代过程中形态、分子表达及核型是否稳定;应用PCR方法检测细胞的外源微生物及种属来源;STR检测验证细胞在传代过程中STR表达谱的平衡性及稳定性。结果 CCC-HPF-2细胞呈成纤维细胞样;波形蛋白表达阳性,CK阴性;无外源微生物污染;细胞来源于人;所有15个STR基因座都得到扩增,呈现较好的扩增平衡性,各代细胞STR表达谱一致,表现了高度稳定性。结论 CCC-HPF-2细胞来源于人,30代内的该细胞DNA可作为STR分型标准物质。
- 杨振丽卞晓翠刘玉琴王春景苏小玲顾蓓张宏
- 关键词：短串联重复序列STR细胞库标准物质
- CD133在人结肠癌细胞分化中的作用
- CD133分子在多种肿瘤包括结肠癌中都用来作为肿瘤干细胞的一个标记,但是它本身的的功能现在还不清楚。我们用Western blotting检测了44种人肿瘤细胞系中CD133的表达,8种肿瘤细胞系呈阳性表达,其中5个是结...
- 冯海凉杨丽娟卞晓翠杨振丽顾蓓张宏王春景苏小玲赵晓梅刘玉琴
- 关键词：CD133结肠癌肿瘤干细胞分化
- 文献传递
- Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立
- 2018年
- 目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌细胞（GBC-SD）中，分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1，挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后，通过基因组聚合酶链反应（PCR）和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry，流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞，再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA，细胞扩增后，通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中表达Cas9-Neo的细胞35株，表达Cas9-Puro的细胞25株，表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示，同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下，同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry－EGFP＋细胞。流式细胞仪检测结果显示，mCherry－EGFP＋细胞占0.3%～93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。
- 左春霞卞晓翠杨振丽冯海凉周芳颖刘玉琴
- 关键词：肝细胞癌胆管癌胆囊肿瘤细胞株
- 囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用
- 本文选用内源性低表达囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33且肺转移率低的DCS亚克隆细胞株DG6细胞作为研究对象。利用慢病毒包装系统，成功制备了带有VAP33-GFP融合基因的重组慢病毒，将其感染目的细胞，获得了VAP33稳定过表...
- 赵文晶杨振丽顾蓓冯海凉张敏刘艳艳李占稳刘玉琴
- 关键词：树突状细胞肉瘤肿瘤抑制基因
- 文献传递
- PI3K和MEK联合抑制增强对K-ras基因单突变肺癌细胞的生长抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的 观察RAS/MEK/ERK通路单独抑制或联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 常规培养A549细胞,分别以不同浓度的PI3K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测抑制剂对细胞增殖的影响,根据MTT法检测结果确定联合给药的浓度.将A549细胞分为空白对照组、0.5 μmol/L GDC-0941处理组、低浓度联合组（0.5 μmol/L AZD6244＋ 0.5μmol/LGDC-0941）、5.0 μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组（5.0 μmol/L AZD6244＋ 5.0 μmol/L GDC-0941）,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,采用Western blot法检测抑制剂靶点下游与细胞周期和凋亡相关的蛋白表达.结果 AZD6244对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,但浓度平台出现时,增殖抑制率仅为25.5％.AZD6244联合GDC-0941对A549细胞的生长抑制作用增强,但联合用药的效果与两种抑制剂联合使用的浓度有关.0.5 μmol/L GDC-0941处理组和低浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为（20.70±0.99）％和（18.65±0.92）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;5.0μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为（37.85 ±3.18）％和（52.27±4.36）％,差异有统计学意义（P＜0.01）.低浓度联合组A549细胞的细胞周期没有明显改变;高浓度联合组中G0/G1期细胞增加,S期细胞减少.单独使用AZD6244可明显抑制pERK的表达水平,但pAKT的表达增加.单独使用GDC-0941可明显抑制pAKT的表达水平,但pERK的表达增加.低浓度联合组中,细胞周期和凋亡蛋白的表达均没有发生明显改变;高浓度联合组中,cyclin D1、cyclin B1表达量受到抑制,PARP剪切增加,Bcl-2/Bax比值下降.结论 对于K-ras基因单突变的非小细胞肺癌A549细胞,单独使用一条信号通路的抑制剂会反馈性激活另一信号通路.RAS/MEK/ERK和PDK/AKT/mTOR两条通路的同时抑制呈协同�
- 杨振丽李占稳冯海凉卞晓翠刘艳艳刘玉琴
- 关键词：K-RAS基因
- 囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用
- 目的:探讨囊泡膜蛋白相关蛋白(VAP33)过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移相关生物学特性的影响。方法:反转录获得VAP33cDNA,构建与GFP融合基因慢病毒表达载体。用病毒感染DG6细胞,荧光显微镜挑选,...
- 赵文晶杨振丽顾蓓冯海凉张敏刘艳艳李占稳刘玉琴
- 关键词：增殖
- 文献传递
- 囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能被引量：2
- 2009年
- 目的探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能。方法用1％TritonX—114提取DCS细胞膜蛋白，用已制备的DCS细胞多克隆抗体（pAb）及蛋白A＋G琼脂糖进行免疫沉淀，所得样品利用质谱技术进行分析，检测到VAP-33蛋白在DCS细胞中有表达，继而DCS细胞经不同量抗原（150、850、1500μl）刺激24、48、72h后观察细胞形态及吞噬能力的变化，同时通过间接免疫荧光、共聚焦显微镜、Western blot等方法检测了VAP．33的分布及表达变化。0．5mol／L胰岛素刺激DCS细胞20min后，采用Western blot检测DCS细胞全蛋白、胞质蛋白、膜蛋白中VAP-33、葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）的表达变化，共聚焦方法观察胰岛素刺激前后VAP-33和GLUT-4在DCS细胞中的表达及定位变化。实验中均以常规培养的DCS细胞作为对照。结果VAP-33蛋白主要表达在DCS细胞膜和胞质中；在外来抗原刺激下，随抗原量的增加及作用时间的延长DCS细胞趋向成熟树突状细胞，VAP-33表达量降低，对辣根过氧化物酶的吞噬能力增强。胰岛素刺激后，VAP-33与GLUT-4有共定位。结论VAP-33在树突状细胞来源的肿瘤细胞中表达，与树突状细胞的抗原加工有关，在葡萄糖的转运中起一定作用。
- 杨振丽刘玉琴卞晓翠顾蓓冯海凉杨丽娟
- 关键词：树突细胞抗原呈递葡萄糖转运体4型
- CD133+肿瘤细胞在体外肿瘤生长和侵袭中的作用
- 本文综述了CD133+肿瘤细胞在肿瘤生长和转移中的作用。根据文献，选择CD133表达阳性的两种结肠癌细胞系COLO320DM和HCT116，流式细胞术分析CD133在两种肿瘤细胞系中的表达。通过实验研究，在混合细胞群中，...
- 张敏刘艳艳赵文晶卞小翠冯海凉顾蓓杨振丽李站稳刘玉琴
- 关键词：体外侵袭肿瘤转移
