朱艳平
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪α-干扰素基因的修饰及其在毕赤酵母中的高效表达
- 为了提高猪α-干扰素基因在毕赤酵母中的表达效率，本研究对猪α-干扰素的7个基因进行了修饰。然后将经改造的猪α-干扰素基因克隆入毕赤酵母分泌型表达载pPICZαC中，电转化毕赤酵母x-33菌株，抗生索ZeocinTM高浓度...
- 朱艳平林宝珍郭霄峰
- 关键词：毕赤酵母基因修饰抗病毒活性
- 文献传递
- 犬干扰素α1基因的修饰及在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2011年
- 目的修饰犬干扰素α1(Canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,提高其在毕赤酵母中的表达水平及抗病毒活性。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统对密码子的偏爱性,将CaIFNα1基因改造后,克隆至分泌表达载体pPICZαC中,电转化巴斯德毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和氨基酸测序后,检测重组蛋白的表达量及抗水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性。结果重组表达质粒pPICZαC-CaIFNα1经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组CaIFNα1蛋白相对分子质量约为24 000,蛋白氨基酸序列与天然的CaIFNα1氨基酸序列相同,3批重组酵母菌表达产物的蛋白含量分别为0.253、0.198和0.224 mg/ml,在Vero细胞上均无抗VSV活性,在MDCK细胞上的抗VSV活性分别为1.58×108、1.30×108和1.50×108 U/mg。结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为大量发酵生产干扰素奠定了基础。
- 王玉朱艳平郭霄峰
- 关键词：干扰素Α基因修饰毕赤酵母基因表达抗病毒活性
- 猪血清白蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达被引量：3
- 2010年
- 目的克隆猪血清白蛋白(PSA)基因,并在毕赤酵母中分泌表达。方法Trizol法提取新鲜猪肝组织总RNA,经RT-PCR扩增PSA全长cDNA,克隆至酵母分泌型表达载体pPICZaC,构建重组表达质粒pPICZaC-PSA,电转化至毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组表达质粒pPICZaC-PSA经双酶切及测序鉴定正确,表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约69500处可见特异条带,表达量为菌体总蛋白的29.5%,紫外吸收法测定蛋白含量为0.06mg/ml,并可与PSA多抗发生特异性反应。结论已成功克隆了PSA基因,并在毕赤酵母中获得表达。
- 朱艳平王玉徐慧郭霄峰
- 关键词：克隆毕赤酵母分泌表达
- 猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达和下游工艺的研究被引量：2
- 2010年
- 通过小量发酵、摇瓶发酵、大量发酵,研究猪α-IFN在毕赤酵母中表达的下游工艺,微量细胞板法测猪α-IFN体外抗VSV、PRRSV、TGEV的活性。猪α-IFN抗VSV的活性达到4.04×10^6I U/L,在PK15上抗TGEV的活性为10^7-10^8I U/L,在Marc 145上抗PRRSV的活性为10^6-10^7I U/L。30℃诱导培养96 h、甲醇添加1%、pH值6.0、DO20%、0.25%-0.4%甲醛灭活,获得高活性的、安全的IFN。仔猪免疫后临床症状正常,未出现病理学变化。猪α-IFN体外抗病毒活性高,发酵后的抗病毒活性未下降,免疫动物未产生临床症状和病理变化,可用于临床治疗病毒性疾病。
- 朱艳平徐蕙陈裕华郭霄峰
- 关键词：体外抗病毒发酵
- 重组猪α干扰素治疗高致病性猪蓝耳病的研究被引量：8
- 2008年
- 为了观察重组猪α干扰素对高致病性猪蓝耳病临床治疗效果,采用毕赤酵母表达系统高效表达的重组猪α干扰素制剂,按照农业部颁布的《高致病性猪蓝耳病防治技术规范》进行高致病性猪蓝耳病小量临床试验。结果表明,该制剂对高致病性猪蓝耳病的治愈率超过81%。
- 岑路贺亮亮邓苏理朱艳平张献杰郭霄峰
- 关键词：重组猪Α干扰素高致病性猪蓝耳病
- 猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测被引量：1
- 2010年
- 为获得高效表达的重组猪β干扰素,在保留编码蛋白序列的同时,对PoIFN-β基因进行毕赤酵母偏嗜性改造,使基因序列G+C的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。构建了酵母表达载体pPICZαC-PIB。pPICZαC-PIB经SacⅠ酶切线性化后电转导入毕赤酵母菌株X-33。对PCR鉴定为阳性的酵母菌株进行高抗性筛选,获得1株高效表达PoIFN-β酵母菌株,其表达量约258.3 mg/L,是未经密码子改造菌株表达产物的3.4倍。经SDS-PAGE和Western blotting检测,表达产物为相对分子质量约22 000和24 000的蛋白,两者均可与抗PoIFN-β阳性血清发生特异反应。将表达产物进行氨基酸测序,测得2段随机肽段与PoIFN-β的氨基酸序列完全一致。在VSV-Vero系统上检测重组PoIFN-β对水泡性口炎病毒在Vero细胞中增殖的抑制作用,其抗病毒活性为1.88×106IU/L,是未经密码子改造菌株表达产物抗病毒活性的5.6倍。用MTT法检测PoIFN-β对猪外周血淋巴细胞成熟的影响,结果表明,猪重组PoIFN-β能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性。
- 徐蕙朱艳平刘京军刘德辉郭霄峰
- 关键词：基因修饰毕赤酵母抗病毒活性MTT
- 猪α干扰素基因的修饰、表达及对高致病性蓝耳病的治疗研究
- 本研究在成功使用毕赤酵母表达猪α干扰素蛋白的基础上,对猪α干扰素的6个关键氨基酸的密码子进行毕赤酵母偏嗜性修饰,修饰后的猪α干扰素基因在毕赤酵母x-33中获得高效表达。经SDS-PAGE和Western blotting...
- 朱艳平
- 关键词：猪Α干扰素毕赤酵母基因修饰高致病性蓝耳病T淋巴细胞亚群
- 猪IFN-α在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2010年
- 为了获得高效抗病毒活性的猪α-干扰素蛋白,采用PCR法扩增获得猪α-干扰素基因完整的开放阅读框(ORF),构建重组表达质粒pPICZαC-IFN,电击转化毕赤酵母感受态细胞X33.挑阳性菌落诱导表达,离心取上清,SDS-PAGE和Western-blotting分析,可见1条相对分子质量约19 400的清晰蛋白条带,与理论值相符,表明表达产物为猪α-干扰素.在Vero细胞上检测该干扰素抗VSV的活性为4.04×106IU/L.
- 林宝珍朱艳平黄文科岑路郭霄峰
- 关键词：巴斯德毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
