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鸽β-防御素1基因的克隆及其生物学作用鉴定被引量：5: 2014年; 【目的】从鸽子组织中克隆鸽子β-防御素1(AvBD1)基因,在大肠杆菌中表达重组鸽子AvBD1蛋白,测定其生物学特性。【方法】应用RT-PCR法从鸽子骨髓组织中扩增鸽子AvBD1基因,采用Real-time PCR法检测该基因在鸽子组织器官中的表达分布。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProEX-HTa的EcoR I和Xho I双酶切位点上,构建重组表达质粒pProEX-pigeon AvBD1,将重组质粒进行诱导表达;对该重组蛋白进行纯化,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸽子骨髓组织中克隆到鸽子AvBD1基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸,经序列相似性分析,鸽子AvBD1与鸭AvBD1氨基酸序列相似性最高(81.5%)。鸽子AvBD1主要分布于免疫系统和消化系统组织中。Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,重组鸽子AvBD1蛋白分子量约8.8 kD,与预期大小一致。该重组蛋白具有广谱抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性。此外,该重组蛋白的溶血活性极低。【结论】从鸽子骨髓组织中克隆到鸽子AvBD1基因,其主要分布在机体的免疫系统和消化系统中。该重组蛋白具有广谱抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低。; 李妍妍徐杨张婷婷徐倩倩韩宗玺刘胜旺马得莹; 关键词：重组蛋白抗菌活性

重组鸡β-防御素12蛋白的原核表达及其生物学特性分析: 2014年; 为探讨鸡β-防御素12(AvBD12)的生物学特性,试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上,进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明,重组鸡AvBD12融合蛋白分子质量约为14 ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定,结果显示,纯化后的重组鸡AvBD12融合蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波氏杆菌有较高抗菌活性,对猪霍乱沙门氏菌和乳酸菌的抗菌活性较弱。高盐浓度对其抗菌活性有显著影响。该重组蛋白对鸡红细胞无显著溶血活性。荧光定量PCR结果表明,AvBD12基因在所测定的15个鸡组织器官中均有表达。; 马得莹徐杨李妍妍徐倩倩张婷婷韩宗玺刘胜旺; 关键词：重组蛋白抗菌活性

干酒糟及其可溶物和豆粕混合饲料蛋白质二级结构与瘤胃降解特性的关系被引量：1: 2013年; 本研究旨在探讨干酒糟及其可溶物(DDGS)和豆粕混合饲料蛋白质二级结构与瘤胃降解特性的关系。选用3头安装永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛为试验动物,将DDGS、豆粕按照不同比例(DDGS∶豆粕分别为100∶0、70∶30、50∶50、30∶70、0∶100)混合,作为混合饲料样品。通过尼龙袋法测定样品的粗蛋白质瘤胃降解参数及有效降解率,采用傅里叶变换红外光谱技术测定样品的蛋白质二级结构。结果表明:混合饲料样品的蛋白质二级结构中α-螺旋/β-折叠与饲料粗蛋白质有效降解率具有显著的正相关关系(r=0.976 5,P=0.004 3)。可见,可以通过测定蛋白质二级结构来预测混合饲料粗蛋白质有效降解率,蛋白质α-螺旋/β-折叠越高,饲料粗蛋白质有效降解率越高。; 吴鹏华刘大森仝泳徐杨郑立鑫; 关键词：傅里叶变换红外光谱蛋白质二级结构有效降解率

重组鸡β-防御素2蛋白的表达与生物学活性鉴定被引量：2: 2015年; 为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,His-Av BD2重组蛋白分子质量约12 ku,与预期一致。将该重组蛋白纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗肠炎沙门氏菌、四联球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等抑菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其溶血活性。结果显示,Av BD2重组蛋白对所测定的4株细菌有显著抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性。该重组蛋白溶血活性极低。; 马得莹张婷婷徐杨高梦莹王秋玲徐倩倩韩宗玺刘胜旺; 关键词：重组蛋白抗菌活性

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徐杨