张家文
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- Notch信号通路阻断剂对人脐带间充质干细胞软骨分化的影响被引量：1
- 2014年
- 背景:Notch信号通路作为一条在细胞增殖和分化过程中起重要作用的信号通路,目前它在人脐带间充质干细胞在体外向软骨细胞诱导分化过程中的作用仍然未知。目的:首次探讨Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑(DAPT)对人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的影响。方法:从人脐带中分离获得间充质干细胞,体外向软骨细胞诱导分化。实验分4组:①无诱导组换成含体积分数5%胎牛血清和1%双抗的DMEM高糖培养基培养。②单纯诱导组换成终浓度为6.25 mg/L胰岛素、6.25 mg/L转铁蛋白、10μg/L转化生长因子β1、0.1μmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、体积分数5%胎牛血清和1%双抗的软骨诱导培养基培养。③二甲基亚砜组在软骨诱导培养基中加入终浓度为0.1%的二甲基亚砜培养。④2,4-二氨基-5-苯噻唑组在软骨诱导培养基中加入终浓度为5μmol/L的2,4-二氨基-5-苯噻唑(溶于二甲基亚砜)培养,二甲基亚砜终浓度为0.1%。结果与结论:诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,细胞形态由长梭形变为多边形,且甲苯胺蓝染色和免疫荧光染色均呈现阳性;软骨诱导分化后Jag-1、PS-1、Notch-1、Hes-1的基因表达均明显下降(P<0.01);添加2,4-二氨基-5-苯噻唑后,与单纯诱导组相比,人脐带间充质干细胞中Jag-1、PS-1、Hes-1(P<0.01)和Notch-1(P<0.05)的基因表达显著降低;蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量均降低(P<0.01);蛋白聚糖的基因表达显著降低(P<0.01),Ⅱ型胶原蛋白的基因表达也出现一定程度的下降。提示Notch信号存在于人脐带间充质干细胞中,诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,这种信号强度迅速减弱;2,4-二氨基-5-苯噻唑可能通过Jag-1-Notch-1-Hes-1途径抑制人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化。
- 张家文罗二梅吴颜晖符淑莹陈丹纯宇丽唐明乔
- 关键词：干细胞分化DAPT蛋白聚糖甲苯胺蓝染色免疫荧光染色
- 共培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞被引量：4
- 2014年
- 目的探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例(hUC-MSCs:兔膝关节软骨细胞)共培养。倒置相差显微镜观察细胞的形态与增殖;甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色分别检测葡萄糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原(COL2A1)(蛋白水平定性);并对各组细胞爬片进行GAG、COL2A1定量检测;同时用实时定量荧光PCR(pPCR)检测GAG、COL2A1 mRNA表达,观察共培养前后细胞的基质分泌情况。结果共培养21 d后,阳性对照组和实验组细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;GAG、COL2A1含量及mRNA表达量1∶4实验组均要高于其他实验组和阳性对照组。结论 hUC-MSCs和兔关节软骨细胞的共培养可明显促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化,且最佳共培养比例为1∶4。
- 罗二梅张家文胡笑轲唐明乔宇丽
- 关键词：人脐带间充质干细胞共培养
- 还原型谷胱甘肽对人脐带间充质干细胞成软骨诱导的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)对人脐带间充质干细胞(humanumbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的成软骨诱导是否有促进作用。方法:分离培养人脐带间充质干细胞并鉴定其特异性。在生长因子(tansforming growth factor beta 1,TGF-β1)存在的条件下,用500μmol/L GSH诱导hUC-MSCs向软骨样细胞分化。倒置相差显微镜观察诱导前后细胞的形态变化;甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应分别检测Ⅱ型胶原(COL2A1)、葡萄糖胺聚糖(GAG)(蛋白水平定性);阿利新蓝法及羟脯氨酸法分别检测COL2A1、GAG含量(蛋白水平定量);qPCR在分子水平检测COL2A1、GAG mRNA表达,观察诱导前后细胞的基质分泌情况。结果:GSH连续诱导培养21d后,基本诱导培养基组(B组)、基本诱导培养基+0.5%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)组(BD组)及基本诱导培养基+0.5%DMSO+500μmol/L GSH组(BDG组)细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;BDG组GAG和COL2A1含量及mRNA表达量均要高于B组、BD组,具有显著的统计学差异(P<0.05)。结论:GSH可促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化。
- 罗二梅宇丽张家文柳菁
- 关键词：还原型谷胱甘肽人脐带间充质干细胞软骨样细胞蛋白多糖
- 人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化过程中Notch信号的初步研究
- 目的: 探讨 Notch信号通路在人脐带间充质干细胞(human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,hUC-MSCs)向软骨细胞诱导分化过程中的作用。 方法: 1.hUC-...
- 张家文
- 关键词：人脐带间充质干细胞软骨细胞NOTCH信号诱导分化
- 文献传递
