- 肾炎致病原重组受体相关蛋白的表达及纯化被引量：2
- 1996年
- 用ｐＧＥＸ载体系统体外构建了Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）重组表达质粒，经ＩＰＴＧ诱导，该质粒表达的融合蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达，其表达量达３９．４％，经ＧＳＴＳｅｐｈｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，得到了高度纯化，其诱导产生的抗体经蛋白质印迹法分析证明能识别肾皮质天然抗原４４ｋｕ受体相关蛋白、ＲＡＰ表达及纯化的成功为研究致病原病理性表型提供了有利条件．
- 胡迎青张卫苏朱爱平夏之银
- 关键词：受体相关蛋白提纯肾炎
- Heymann肾炎致病原受体相关蛋白cDNA分子克隆及其mRNA在肾小球上皮细胞的表达被引量：4
- 1994年
- Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。ｇｐ３３０糖蛋白和４４ｋＤ受体相关蛋白（ＲＡＰ组成Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎抗原复合物（ＨＮＡＣ），被证明是ＨＮ的主要致病原。本研究中，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆了ＲＡＰ基因，用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术克隆了ＲＡＰ羧基端１１８个氨基酸的基因，ＤＮＡ序列分析克隆基因与ＲＡＰ相同，原位杂交发现ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球上皮细胞表达。
- 张卫苏朱爱平刘运义
- 关键词：肾炎受体相关蛋白
- Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征被引量：1
- 1996年
- 为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。
- 朱爱平张卫苏蒋季杰刘运义钱桐荪
- 关键词：肾炎HEYMANN肾炎单克隆抗体致病原
- Heymann肾炎原位免疫复合物形成机理的分子学研究被引量：7
- 1996年
- 通过受体相关蛋白（ＲＡＰ）ｃＤＮＡ探针，用组织原位杂文技术首次证明了ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球细胞中的表达。进一步通过ＲＡＰ融会蛋白抗血清的体外间接免疫荧光，免疫电镜和体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明肾小球细胞中表达ＲＡＰ细胞为肾小球上皮足突细胞，循环抗体能与其结合形成免疫复合物并刺激足突细胞内新抗原的不断合成，使得免疫复合物不断增大。从基因水平为Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）原位免疫复合物形成机理提供了实验依据，也为今后的基因抑制治疗提供了可能性。
- 朱爱平张卫苏蒋季杰李晓宇达展云胡迎青
- 关键词：HEYMANN肾炎受体相关蛋白原位杂交免疫复合物
- 单克隆抗体c_(3～6)诱导被动型Heymann肾炎病理机制
- 1998年
- 目的和方法：Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）是一种用于研究人类膜性肾病的大鼠动物模型。用主动型ＨＮ模型大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，制备针对ＨＮ致病原的单克隆抗体ｃ３～６（ＭｃＡｂｃ３～６），并用它诱导大鼠被动型ＨＮ。结果：免疫酶组织化学及免疫电镜显示，ＭｃＡｂｃ３～６特异性识别肾小球上皮足突细胞膜抗原并与其结合形成免疫复合物。
- 朱爱平蒋季杰张卫苏季玉红达展云邵维斌
- 关键词：肾小球肾炎免疫复合物病
- Heymann肾炎致病原受体相关蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 1996年
- 为研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎致病原的病理表型和免疫复合物形成机理，应用ＤＮＡ重组技术，将Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）的ｃＤＮＡ克隆到表达质粒ｐＧＥＸ中，构建重组表达质粒ｐＧＥＸ－Ｒ９３，经限制性内切酶图谱分析，ＤＮＡ测序，鉴定插入子ＲＡＰ－ｃＤＮＡ正确克隆到ｐＧＥＸ表达框架后，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经ＩＰＴＧ诱导，高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶－受体相关蛋白（ＧＳＴ－ＲＡＰ）融合蛋白，蛋白产量占大肠杆菌总蛋白量的３９．４％。经ＧＳＴ－Ｓｅｐｈｏｓｅ４Ｂ亲和层析得到高度纯化的ＧＳＴ－ＲＡＰ。免疫印迹分析证明，针对ＧＳＴ－ＲＡＰ的抗血清能特异地识别肾皮质天然抗原４４０００α蛋白，免疫组化分析显示ＧＳＴ－ＲＡＰ抗血清特异性识别大鼠肾近曲小管刷状缘抗原。
- 胡迎青张卫苏朱爱平达展云
- 关键词：肾炎致病原受体相关蛋白大肠杆菌
- BA-cell ELISA在抗大鼠肾皮质FX1A抗体中的应用
- 1990年
- 本文用BA-细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)替代敏感性差、对不溶性抗原不适用的琼脂双扩散试验,用以检测兔抗大鼠肾小管刷状缘抗原(FX1A)的抗体滴度,并对影响检测效果的几种因素进行了探讨。结果表明:美商陆预先包板能增强细胞对酶标板结合能力,以60μg/ml的浓度最佳。大鼠皮质细胞以6×10~6/ml的浓度包被则达到检测的最高敏感度,如高于该浓度,并不能继续增加敏感性。高滴度的兔抗大鼠FX1A抗体,成功地应用于免疫组化,提示BA-cell ELISA用以对兔抗大鼠FX1A抗体的检测是一种敏感性强、特异性高的检测手段。
- 朱爱平张卫苏
- 大鼠肾皮质受体相关蛋白克隆基因重组表达质粒的构建及分子生物学鉴定被引量：1
- 1998年
- 运用ＤＮＡ重组技术，将用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆的大鼠肾皮质受体相关蛋白３１９个氨基酸的核苷酸序列导入载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ和表达载体ｐＧＥＸ中，分别构建了重组质粒ｐＢＳＫ９ＲＡＰ和ｐＧＥＸ－９ＲＨ７，转化入大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ和ＤＨ５α中，经ＩＰＴＧ、ｘ－ｇａｌ和抗生素筛选阳性克隆，扩增后，重组质粒用限制性内切酶图谱分析及ＤＮＡ测序分析，证明插入子插入方向正确，表达阅读框架正确。
- 胡迎青张卫苏
- 关键词：受体相关蛋白肾皮质基因重组
- 逆转录病毒介导的人促红细胞生成素基因在淋巴细胞中的表达被引量：1
- 1997年
- 本实验设计和构建了人促红细胞生成素（Epo）重组逆转录病毒载体（LXSN-Epo）,载体中小鼠白血病病毒长末端调控序列翻译调控人Epo基因的表达。通过重组逆转录病毒,将Epo基因转导到大鼠T和B淋巴细胞中,DNA-PCR分析证明带有人Epo基因的逆转录病毒已整合到T和B淋巴细胞基因中,RT-PCR分析显示了在两种细胞中均表达了 Epo mRNA。体外生物学活性测定显示,在转导的T淋巴细胞培养上清中Epo表达水平高达243mU/ml,在感染的B淋巴细胞培养上清中Epo活性达43mU/ml。在感染的B细胞中,Epo表达在mRNA和蛋白水平均证明了逆转录病毒能有效地和迅速地转导Epo基因到新培养的B细胞中,而不需要药物选择。这些研究开始了逆转录病毒介导的基因转移走向体内Epo基因治疗研究的过程。
- 张卫苏顾星星刘运义顾晓松朱爱平蒋季杰
- 关键词：促红细胞生成素基因转移逆转录病毒
- 肾小球上皮足突细胞培养
- 2000年
- 目的 :分离培养肾小球上皮足突细胞。方法 :机械分离低龄SD大鼠肾小球、胰酶 ,胶原酶消化后接种于选择性培养基K1体系 ,使肾小球大于 6 0个 /cm2 ,培养 8～ 10天后收获细胞 ,用形态学特征 ,嘌呤酶素选择性杀伤作用 ,抗受体相关蛋白 (RAP)免疫荧光技术鉴定细胞类型。结果 :收获的培养细胞为肾小球上皮足突细胞。结论 :该法能较为快捷、准确地获得所需的培养细胞类型。
- 顾星星张卫苏
- 关键词：细胞培养免疫荧光技术
