- Heymann肾炎原位免疫复合物形成机理的分子学研究被引量：7
- 1996年
- 通过受体相关蛋白（ＲＡＰ）ｃＤＮＡ探针，用组织原位杂文技术首次证明了ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球细胞中的表达。进一步通过ＲＡＰ融会蛋白抗血清的体外间接免疫荧光，免疫电镜和体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明肾小球细胞中表达ＲＡＰ细胞为肾小球上皮足突细胞，循环抗体能与其结合形成免疫复合物并刺激足突细胞内新抗原的不断合成，使得免疫复合物不断增大。从基因水平为Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）原位免疫复合物形成机理提供了实验依据，也为今后的基因抑制治疗提供了可能性。
- 朱爱平张卫苏蒋季杰李晓宇达展云胡迎青
- 关键词：HEYMANN肾炎受体相关蛋白原位杂交免疫复合物
- Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征被引量：1
- 1996年
- 为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。
- 朱爱平张卫苏蒋季杰刘运义钱桐荪
- 关键词：肾炎HEYMANN肾炎单克隆抗体致病原
- 单克隆抗体c_(3～6)诱导被动型Heymann肾炎病理机制
- 1998年
- 目的和方法：Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）是一种用于研究人类膜性肾病的大鼠动物模型。用主动型ＨＮ模型大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，制备针对ＨＮ致病原的单克隆抗体ｃ３～６（ＭｃＡｂｃ３～６），并用它诱导大鼠被动型ＨＮ。结果：免疫酶组织化学及免疫电镜显示，ＭｃＡｂｃ３～６特异性识别肾小球上皮足突细胞膜抗原并与其结合形成免疫复合物。
- 朱爱平蒋季杰张卫苏季玉红达展云邵维斌
- 关键词：肾小球肾炎免疫复合物病
- BA-cell ELISA在抗大鼠肾皮质FX1A抗体中的应用
- 1990年
- 本文用BA-细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)替代敏感性差、对不溶性抗原不适用的琼脂双扩散试验,用以检测兔抗大鼠肾小管刷状缘抗原(FX1A)的抗体滴度,并对影响检测效果的几种因素进行了探讨。结果表明:美商陆预先包板能增强细胞对酶标板结合能力,以60μg/ml的浓度最佳。大鼠皮质细胞以6×10~6/ml的浓度包被则达到检测的最高敏感度,如高于该浓度,并不能继续增加敏感性。高滴度的兔抗大鼠FX1A抗体,成功地应用于免疫组化,提示BA-cell ELISA用以对兔抗大鼠FX1A抗体的检测是一种敏感性强、特异性高的检测手段。
- 朱爱平张卫苏
- 逆转录病毒介导的人促红细胞生成素基因在淋巴细胞中的表达被引量：1
- 1997年
- 本实验设计和构建了人促红细胞生成素（Epo）重组逆转录病毒载体（LXSN-Epo）,载体中小鼠白血病病毒长末端调控序列翻译调控人Epo基因的表达。通过重组逆转录病毒,将Epo基因转导到大鼠T和B淋巴细胞中,DNA-PCR分析证明带有人Epo基因的逆转录病毒已整合到T和B淋巴细胞基因中,RT-PCR分析显示了在两种细胞中均表达了 Epo mRNA。体外生物学活性测定显示,在转导的T淋巴细胞培养上清中Epo表达水平高达243mU/ml,在感染的B淋巴细胞培养上清中Epo活性达43mU/ml。在感染的B细胞中,Epo表达在mRNA和蛋白水平均证明了逆转录病毒能有效地和迅速地转导Epo基因到新培养的B细胞中,而不需要药物选择。这些研究开始了逆转录病毒介导的基因转移走向体内Epo基因治疗研究的过程。
- 张卫苏顾星星刘运义顾晓松朱爱平蒋季杰
- 关键词：促红细胞生成素基因转移逆转录病毒
- 肾脏病和糖尿病血清Tamm-Horsfall糖蛋白测定的临床意义
- 1991年
- 采用THP单克隆抗体通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定40例正常人和86例各种肾脏病、糖尿病患者血Tamm-Horsfall糖蛋白（THP）含量，结果表明血THP含量与血尿素氮（BUN）、血脂酐（Scr)呈显著负相关（P＜0．01），与内生肌酐清除率（Ccr)呈明显正相关（P＜0．01），BUN、Scr,Ccr正常的各种肾脏病，血THP与正常比无明显异常（P>0．05），糖尿病患者血清THP含量与正常比无统计学意义，测定血THP含量可作为判断肾功能损害的良好指标。
- 朱爱平蒋季杰秦文浩施伯华陈瑞琴支剑笙
- 关键词：糖蛋白肾脏病糖尿病
- Tamm-Horsfall糖蛋白单克隆抗体制备及其临床应用被引量：2
- 1991年
- 用0.58mol/L NaCl沉淀提取Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)制备了三株抗THP单克隆抗体(McAb)。免疫印迹技术(Immunoblotting Technigue,IBT)证明这些McAb特异性地和94kD THP抗原结合,ELISA抑制试验表明三株McAb识别THP抗原的不同位点。用McAb双夹心ELISA法测定尿THP的含量,表明尿THP含量与血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)呈显著负相关(P<0.01),与内生肌酐清除率(Ccr)呈明显正相关(P<0.01),BUN、Scr、Ccr正常的各种肾病尿THP含量无明显异常(P<0.05)。测定尿THP含量可作为判断肾功能损害程度的良好指标。
- 张卫苏刘运义朱爱平钱桐荪
- 关键词：抗体制备免疫印迹技术内生肌酐清除率肾组织纤维化肾小管细胞
- 逆转录酶病毒载体介导的人EPO基因在PA317细胞中的表达
- 1996年
- 本研究首先将人 EPO 基因构建到逆转录酶病毒载体 LXSN 中,经 DNA-磷酸钙共沉淀法,将重组载体转染到包装细胞 PA317中,转染的 PA317细胞在含 G418条件培养基中选择生长。通过 DNA-PCR 分析证明,重组逆转录酶病毒载体 LXSN-EPO 基因整合到 PA317细胞基因组 DNA 中。RT-PCR 和细胞原位杂交分析表明,EPO mRNA 在 PA317细胞中表达。转染 PA317细胞培养上清体外 EPO 生物活性测定显示,EPO 表达水平高达40 U/L,证明 EPO 基因在逆转录酶病毒载体的启动子控制下转录 EPO mRNA。我们的这一研究,为EPO 基因在靶细胞中表达的基因转移治疗肾性贫血提供了可能性。
- 朱爱平邵维斌张卫苏蒋季杰刘运义顾晓松
- 关键词：促红细胞生成素基因转移药理学肾性贫血
- Heymann肾炎致病原受体相关蛋白羧基端病理性抗原决定簇的定位被引量：5
- 1997年
- 目的：探讨Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）羧基端１０８个氨基酸多肽链上是否存在致肾炎的抗原决定簇。方法：应用ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ技术，扩增了编码ＲＡＰ羧基端１０８个氨基酸多肽链的ｃＤＮＡ。应用基因重组及亚克隆技术，高效表达了特异性的ＲＡＰ融合蛋白（ＲＡＰ－ｆｐ），并制备了针对该ＲＡＰ－ｆｐ的多抗血清。结果：该多抗血清体外免疫荧光定位于肾小管刷状缘。体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明，在肾小球足突细胞和肾小球基膜之间，形成了典型的被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）免疫复合物。结论：本实验说明天然羧基端ＲＡＰ在体内能被循环抗体结合，在原位形成免疫复合物。首次证明了在ＲＡＰ羧基端１０８个氨基酸多肽链上至少存在一个病理性抗原决定簇。
- 达展云钱桐荪蒋季杰朱爱平
- 关键词：HEYMANN肾炎受体相关蛋白病理性抗原决定簇
- Heymann肾炎致病原受体相关蛋白cDNA分子克隆及其mRNA在肾小球上皮细胞的表达被引量：4
- 1994年
- Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。ｇｐ３３０糖蛋白和４４ｋＤ受体相关蛋白（ＲＡＰ组成Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎抗原复合物（ＨＮＡＣ），被证明是ＨＮ的主要致病原。本研究中，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆了ＲＡＰ基因，用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术克隆了ＲＡＰ羧基端１１８个氨基酸的基因，ＤＮＡ序列分析克隆基因与ＲＡＰ相同，原位杂交发现ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球上皮细胞表达。
- 张卫苏朱爱平刘运义
- 关键词：肾炎受体相关蛋白
