庞然
- 作品数：17 被引量：63H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛇莓乙醇提取物的体外抗炎机制研究被引量：9
- 2009年
- 目的研究蛇莓乙醇提取物在体外的抗炎作用,初步探讨其抗炎机制。方法通过脂多糖(LPS)干预RAW264.7巨噬细胞系建立炎症细胞模型,ELISA法检测上清液中TNF-α、NO的分泌量,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、i NOS、血红素氧合酶-1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量,免疫细胞化学法检验核因子-κB(NF-κB)的表达及分布变化。结果蛇莓提取物干预后细胞所分泌的炎症介质(TNF-α和NO)与炎症模型组相比均显著降低(均P<0.01),并存在剂量依赖关系;实时荧光定量RT-PCR结果显示蛇莓提取物干预后细胞TNF-α、i N-OS的mRNA表达水平显著降低,HO-1的mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义,也存在剂量依赖关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平明显升高(P<0.01);免疫细胞化学法结果显示仅有LPS干预时,NF-κB表达增强且集中分布在细胞核,而药物干预时,NF-κB多分布在胞质。结论蛇莓提取物通过抑制NF-κB的激活,下调巨噬细胞表达炎症介质,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。
- 庞然张淑玲赵雷刘双林董继华叶翩
- 关键词：蛇莓核因子-ΚB炎症介质血红素氧合酶-1
- shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响被引量：4
- 2016年
- 目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24h后重复注射1次。第2次注射后24h,予LPS/D-GalN腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化,Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2mRNA的表达,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平变化,Western blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表达,其中TRAF6mRNA表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8h达到峰值,TGF-β1于16h达到峰值;RNAi/LPS组小鼠血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot结果显示RNAi/LPS组小鼠肝组织总蛋白NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),与模型对照组无差异,而胞核NF-κB p65明显低于模型对照组(P<0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。
- 陈锋张芙蓉何生松庞然许娟娟董继华
- 关键词：TRAF6TLR4信号通路急性肝衰竭
- 草木犀石油醚提取物对小鼠巨噬细胞促炎介质的影响
- 2009年
- 目的研究草木犀石油醚提取物在体外的抗炎作用。方法采用小鼠巨噬细胞系RAW264．7建立炎症细胞模型，加入10μg/L的LPS培养液和不同浓度的草木犀石油醚提取物进行干预。ELISA法检测上清液中TNF-α，IL-1β，IL-6和NO的分泌量；实时荧光定量RT-PCR检测TNF-α，iNOS和COX-2的mRNA表达；Western印迹法检测COX-2蛋白的表达。结果草木犀提取物干预后细胞所分泌的炎性介质（TNF—α，IL-1β，IL-6和NO）与模型组相比均显著降低（P〈0．01），并存在剂量依赖关系；RT-PCR结果显示干预后细胞TNF-α，iNOS和COX-2的mRNA表达水平显著降低（P〈0．01），也存在剂量依赖关系；Western印迹结果显示草木犀石油醚提取物及地塞米松干预后COX-2蛋白水平明显降低（P〈0．01）。结论草木犀的石油醚提取物通过下调LPS诱导的巨噬细胞表达炎性介质而发挥其体外抗炎作用，且其下调作用呈剂量依赖性。
- 庞然张淑玲赵雷易建华董继华刘双林
- 关键词：草木犀石油醚RAW炎性介质
- 核定位信号突变型P21真核表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞病毒复制的影响被引量：2
- 2010年
- 目的构建核定位信号突变型P21基因的真核表达载体并初步探讨其对HBV复制的影响。方法采用基因定点诱变技术突变P21基因的核定位信号序列,采用DNA重组技术,亚克隆突变型P21基因至pDsRed1-C1真核表达载体中,重组为pDsRed1-C1-p21NLS-,酶切鉴定及DNA测序,脂质体转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR检测目的基因pDsRed1-C1-p21NLS-的表达,荧光显微镜观测目的基因亚细胞定位,ELISA法检测培养上清液中HBsAg、HBeAg的水平。结果 pDsRed1-C1-p21NLS-质粒构建成功,与野生型相比,主要在胞浆表达,促进病毒的复制。二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论 P21的亚细胞定位,对HepG2.2.15细胞中病毒复制的影响具有明显差异。胞核P21抑制病毒的复制,而胞浆P21促进病毒复制。
- 邱荣元何生松陈锋庞然
- 关键词：核定位信号病毒复制HEPG2.2.15细胞
- 小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达被引量：5
- 2009年
- 目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.
- 陈锋何生松邱荣元庞然许娟娟董继华
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6RNA干扰重组表达质粒短发卡RNA
- 胱抑素C在肝衰竭患者血清中的表达及血浆置换治疗前后的变化被引量：9
- 2013年
- 目的通过检测胱抑素C(cytatin C,CysC)在肝衰竭患者血清中的表达及血浆置换治疗前后的变化,探讨Cy-sC在肝病领域中的作用。方法设肝衰竭组、慢性肝炎组、正常组,肝衰竭组又进一步分为人工肝血浆置换(plasma ex-change,PE)治疗前、治疗后2组。采用透射免疫比浊法测定血清CysC、酶法测定血清肌酐(Creatinine,Cr)、钒酸盐氧化法测定血清总胆红素(total bilirubin,TB)、凝固法测定凝血酶原时间(prothrombin time,PT),比较各组指标的差异。结果①CysC、TB、PT水平在3组间差异均有统计学意义,肝衰竭组和慢性肝炎组均高于正常健康组(均P<0.01),肝衰竭组又高于慢性肝炎组(均P<0.01);Cr水平在3组间无明显差异(P>0.05)。②CysC水平与TB、PT无相关性(均P>0.05),与Cr呈正相关(r=0.39,P<0.01)。③肝衰竭组中接受PE治疗的患者,其CysC水平治疗后较治疗前明显下降(P<0.05),同时TB水平治疗后也较治疗前明显下降(P<0.01)。④肝衰竭组CysC异常率为48.0%,Cr异常率为3.3%;正常组、慢性肝炎组CysC和Cr的异常率均为0%。结论 CysC水平既可作为肝脏炎症坏死程度的指标,也可作为反映肝衰竭并发肝肾综合征早期敏感指标,人工肝血浆置换治疗可影响CysC的水平。
- 魏屏李红李慧刘婷庞然
- 关键词：胱抑素C肝衰竭血浆置换
- 草木犀石油醚提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨草木犀的石油醚提取物在炎症中的作用。方法:通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化,实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量。结果:免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色,NF-κB多分布在胞质未被激活;仅有LPS干预时,胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核表达增强。药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高,且呈剂量依赖型关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高。结论:草木犀的石油醚提取物通过抑制NF-κB的激活,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。
- 庞然张淑玲赵雷刘双林董继华陶君彦
- 关键词：草木犀石油醚NF-ΚB血红素氧合酶1
- 叶下珠片和至灵胶囊联合治疗慢性乙型肝炎病毒携带者的疗效观察被引量：2
- 2009年
- 目的:观察叶下珠片和至灵胶囊联合治疗慢性乙型肝炎病毒携带者的疗效。方法:158例慢性乙型肝炎病毒携带者随机分为用叶下珠片和至灵胶囊联合治疗组及空白对照组,分别在治疗前、治疗第12周检测患者血清HBV DNA水平、HBeAg阴转率和HBeAg、抗-HBe转换率,并比较不同基线血清HBV DNA。结果:叶下珠片和至灵胶囊联合治疗组和空白对照组携带者的人口学、临床和病毒学特征均具有可比性。治疗12周时,治疗组和空白对照组携带者HBV DNA低于检测值率分别为27.5%和5.13%(P<0.05),HBeAg阴转率分别为13.75%和3.85%(P<0.05),HBeAg血清学转换率分别为7.50%和1.28%(P<0.05)。两组均未发现明显不良反应。结论:叶下珠片和至灵胶囊联合治疗能降低慢性乙型肝炎病毒携带者HBV DNA水平,具有一定的HBeAg阴转率和HBeAg血清学转换率。
- 张淑玲叶翩赵雷陈毅雄庞然王月凤
- 关键词：慢性乙型肝炎病毒携带者临床疗效
- 急性肝衰竭小鼠肝细胞核脱氧核糖核酸损伤的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:研究急性肝衰竭小鼠肝细胞核DNA(脱氧核糖核酸)的损伤变化及影响因素。方法:健康雌性昆明小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Galn)和脂多糖(LPS)制作急性肝衰竭模型,采用慧星实验检测注药后0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时和8小时小鼠肝细胞核DNA的损伤,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果:①模型组小鼠于注药0.5小时Olive尾矩值即明显增大,且随时间延伸逐渐增加,与正常组比较,差异均具有显著性意义(P<0.05)。②模型组小鼠于注药0.5小时血清TNF-α浓度无升高;1小时略有升高,但与正常对照组比较,差异无显著性意义;2小时以后,升高趋势明显,各组与正常对照组比较,差异均具有显著性意义。结论:急性肝衰竭小鼠肝细胞核DNA较早出现损伤,并随时间延伸逐渐加重,最终可能诱发了肝细胞凋亡;血清TNF-α浓度的升高与肝细胞核DNA的损伤不完全同步,但其可能具有促进肝细胞DNA损伤的作用。
- 刘凤超贺永文喻佛定庞然陈锋
- 关键词：急性肝衰竭凋亡小鼠
- 胶质瘤TJ905细胞及其干细胞抗凋亡与MRP基因的关系被引量：5
- 2008年
- 目的从人脑胶质瘤细胞TJ905中分离、培养肿瘤干细胞，并探讨其生物学特性及其抗凋亡和耐药基因的表达差异。方法TJ905细胞经免疫磁珠分离获取CD133^＋细胞，用无血清培养方法获得肿瘤干细胞球，用含有10％的胎牛血清培养基诱导分化，分化前后分别做兔抗人巢蛋白抗体（nestin）、鼠抗人微小管相关蛋白p（tubulin-β）、兔抗人胶质纤维酸性蛋白质（GFAP）、免疫细胞化学荧光染色，WST-8检测干细胞增殖活性，应用实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP1、MRP3的表达，并观察肿瘤干细胞形态学改变。结果TJ905细胞中含有少量CD133^＋细胞，约为0.21％，这些细胞具有典型的干细胞特性，nestin染色为阳性；在无血清培养基中呈悬浮球样生长，能够自我更新和增殖，在有血清培养基中能够分化，tubulin-β、GFAP染色为阳性。TJ905干细胞球Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP-1、MRP-3mRNA表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低。结论TJg05细胞中含有少量肿瘤干细胞，TJ905干细胞球抗凋亡和MRP基因表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低，提示肿瘤干细胞在肿瘤耐药机制中发挥的作用不尽相同，也不总是造成肿瘤耐药的惟一因素。
- 靳峰李洪生赵雷魏宇佳张浩郭远瑾庞然姜晓兵赵洪洋
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞凋亡耐药
