孙艳
- 作品数：32 被引量：73H指数：5
- 供职机构：广东药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国务院侨办重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学历史地理更多>>
- 小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养,取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶,用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。③四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果:①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达:血清诱导8h,分化细胞中(8.9±5.6)%细胞呈Tubulin阳性,(87.5±7.4)%细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100%呈巢蛋白阳性,仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期:从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期;原代培养细胞83.8%处于静止期/DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA,聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论:从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞,并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖,血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。
- 山爱景郭国庆孙艳沈伟哉
- 关键词：细胞分化细胞逆转录聚合酶链反应
- 小鼠胎肝间充质干细胞在缺血脑组织中迁移机制的研究
- 本文探讨小鼠胎肝间充质干细胞(fetalliver mesenchymal stem cells, f1MSCa)在缺血脑组织中迁移的机制。
- 孙艳何冬梅张洹
- 关键词：缺血脑组织
- Sonic hedgehog阻断抗体增强外周血单个核细胞抗宫颈癌HeLa细胞的作用被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)阻断抗体对外周血单个核细胞(PBMCs)抗宫颈癌HeLa细胞作用的影响。方法:免疫细胞化学技术和RT-PCR法检测Shh及其信号分子在HeLa细胞中的表达;Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与HeLa细胞建立共培养体系;于共培养体系中加入Shh阻断抗体,流式细胞术检测CD3、CD69和CD71分子表达;ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-4分泌;显微镜观察PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结果:HeLa细胞表达Shh及其信号分子,HeLa细胞传代6次对Shh的表达水平没有影响;共培养体系中CD3+细胞增多;Shh阻断抗体可以促进CD69、CD71表达和IFN-γ的分泌,但抑制IL-10分泌,对IL-4分泌没有显著影响;Shh阻断抗体增强PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结论:Shh阻断抗体可以促进PBMCs活化,增强PBMCs抗宫颈癌HeLa细胞的作用。
- 孙艳黄莉霞黄文浩黄斌
- 关键词：宫颈肿瘤淋巴细胞
- 小鼠胎肝间充质干细胞移植治疗缺血性脑损伤的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨小鼠胎肝间充质干细胞(flMSCs)移植对缺血性脑损伤是否具有修复治疗作用。方法:用快速PCR扩增Y染色体特异sry基因方法鉴定并分离BALB/c雄性小鼠flMSCs,将其植入雌性缺血性脑损伤BALB/c小鼠损伤侧侧脑室。40d后观察神经功能,PCR检测脑组织sry基因;HE染色和尼氏染色观察脑组织结构;免疫组化和FISH双染观察flMSCs分化存活。结果:5只移植小鼠长期存活;移植后40 d,小鼠神经功能缺损有所改善;脑组织结构未见明显异常;移植小鼠脑组织sry基因阳性;(6.6±2.9)%的受体鼠损伤侧脑细胞Y染色体阳性,Y染色体和Nestin双阳性细胞占缺血侧脑组织细胞的(1.1±0.9)%,Y染色体和Tubulin双阳性细胞占(3.2±1.4)%,Y染色体和GFAP双阳性细胞占(0.9±0.7)%,对侧脑组织未见到染色体阳性细胞。结论:缺血性脑损伤条件下,小鼠flMSCs可以向神经细胞分化,参与损伤脑组织的结构重建。
- 孙艳张洹何冬梅
- 关键词：胎肝间充质干细胞Y染色体
- 小鼠胎肝间充质干细胞在缺血脑组织中迁移机制的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨小鼠胎肝间充质干细胞(flMSC_S)在缺血脑组织中迁移的机制。方法:分离和培养小鼠flMSC_S,制备小鼠脑缺血再灌注模型,RT-PCR方法检测小鼠flMSC_S表达的趋化因子受体及其唯一配体基质细胞来源因子1α(SDF-1α)在缺血损伤脑组织中的mRNA表达;Westem blot检测SDF-1α蛋白在缺血损伤脑组织中的表达;免疫组织化学检测SDF-1α在缺血损伤脑组织中的表达和分布;Boyden chamber法进行SDF-1α诱导flMSC_S迁移的体外实验。结果:flMSC_S经RT-PCR检测表达趋化因子受体CR1,CR3,CXCR1,CXCR2,CXCR3,CXCR4。脑缺血损伤侧脑组织SDF-1αmRNA表达显著增高,与正常脑组织SDF-1αmRNA比,具有显著差异(P<0.01)。Western blot检测显示缺血侧脑组织SDF-1α蛋白表达量在12、24、48 h分别为0.35±0.05,0.88±0.04,0.74±0.07,与正常脑组织SDF-1α蛋白(0.22±0.04)比,差异有显著性(P<0.01)。免疫组织化学检测显示,缺血损伤后24 h,缺血侧脑皮质,海马等缺血边缘区SDF-1α表达显著增高,缺血对侧及正常脑组织未见明显SDF-1α表达。体外迁移实验显示SDF-1α体外可以趋化flMSC_S发生迁移,CXCR4阻断抗体可以阻断SDF-1α诱导flMSC_S发生的迁移。结论:SDF-1α可以诱导flMSC_S发生迁移,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1α的相互作用是flMSC_S在缺血损伤脑组织中迁移的机制之一。
- 孙艳何冬梅张洹
- 关键词：胎肝间充质干细胞脑缺血趋化因子
- 药学院生物专业免疫学教学改革的探索和实践
- 2014年
- 通过对药学院生物专业免疫学实验教学改革的探索，与生物技术专业紧密相连，调整教学内容，适应专业发展；加强讨论式、启发式教学，实验教学与科研相结合，提高学生科研思维和实践能力；多种教学手段联合应用，提高免疫学的教学质量和教学效果。
- 张帆孙艳王辉吴凤麟刘剑
- 关键词：免疫学教学改革教学与科研结合
- 小鼠胎肝间质干细胞的纯化与分化多能性研究被引量：3
- 2007年
- 目的:分离纯化小鼠胎肝间质干细胞(flMSCs)并探讨其分化潜能。方法:通过改良贴壁法分离BABL/c小鼠胎肝间质干细胞;流式细胞术测定细胞周期和表型;体外诱导贴壁细胞向脂肪、软骨、骨组织以及神经细胞分化;化学染色、RT-PCR和免疫细胞化学染色鉴定分化。结果:改进贴壁法分离的flMSCs呈均一梭形,(83.76±2.88)%处于G0/G1期,表达CD44、CD29,不表达造血细胞表面标志CD45、CD11b,诱导后能向脂肪、软骨、骨以及神经方向分化。结论:贴壁法可以分离纯化小鼠flMSCs,小鼠flMSCs具有较强的分化潜能和"可塑性",可用于干细胞治疗疾病的进一步研究。
- 孙艳张洹
- 关键词：胎儿肝间质干细胞细胞分化
- 阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:研究阻断Sonic Hedgehog(Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法:RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched(Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G0/G1期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论:阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导肝癌细胞凋亡。
- 刘爱梅余功旺黄莉霞孙艳迟作华
- 关键词：肝癌细胞HEDGEHOG细胞凋亡
- 一种融合抗体ScFv-Fc通用表达载体的构建被引量：2
- 2011年
- 为了构建一个可供自由替换的ScFv区,表达人小分子融合抗体ScFv-Fc的通用载体,利用RT-PCR技术扩增人抗体IgG1的Fc片段克隆至毕赤酵母表达载体pPICZα,将一段人工合成的互补寡核苷酸链插入重组载体pPICZα/Fc中Fc区的上游,引入2个可供小分子抗体ScFv-Fc的ScFv区自由替换的限制性酶切位点。分别扩增人抗狂犬病毒以及抗乙型肝炎表面抗原的ScFv片段,克隆至已构建的通用载体pPICZα/Fc,在毕赤酵母中诱导表达。进一步在1L条件下对活性抗体进行发酵,并利用proteinA亲和层析柱进行纯化。应用酵母基因组PCR、ELISA、Western blotting、活性检测等试验对此小分子抗体的表达进行生物学及免疫学分析。结果表明具有狂犬病毒抗原结合活性以及乙肝表面抗原结合活性的人源抗体分子均获得成功表达,1L发酵条件下表达量达到20～30mg/L,protein A亲和层析纯化后纯度>95%。研究构建了可用于功能性抗体分子ScFv-Fc筛选和表达的通用载体并对其发酵、纯化条件进行了摸索,为重组抗体分子诊断、治疗试剂的开发以及抗体的人源化奠定了物质基础。
- 王丁丁苏曼曼胡丽莉袁丽颖孙艳汪炬颜炜群
- 关键词：毕赤酵母
- 一种抑制人GLI2基因表达的shRNA构建及其应用
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种可以抑制人胶质瘤相关原癌基因(Glioma‑associated oncogene,GLI2)表达的shRNA及其重组载体。本发明所述的shRNA正义链序列如序列表SEQ NO.2...
- 孙艳迟作华穆先敏李金花黄莉霞
- 文献传递
