吴勇延
- 作品数：11 被引量：44H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- Ipr1基因介导巨噬细胞抗结核分枝杆菌的作用机制研究
- 结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病，该病为人兽共患病，不仅对人类健康造成严重威胁，也给养牛业带来严重的经济损失。全球约三分之一的人感染结核分枝杆菌，但仅有约十分之一的感染者发展成活化肺结核，说明遗传因素对机体抗结...
- 吴勇延
- 关键词：巨噬细胞MIRNA
- 文献传递
- CRISPR/Cas9基因编辑系统研究进展及其在动物基因编辑研究中的应用被引量：10
- 2016年
- CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)系统是由一种短小RNA调控的对DNA修饰的基因编辑工具,是一种较锌指核酸酶(Zinc-fingers nuclease,ZFN)和转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like(TAL)effector nucleases,TALEN)打靶更加快速、高效、精准的新型基因组编辑工具,它易于设计,且具有特异性。本文回顾了CRISPR/Cas系统的结构与功能,概述了Cas9的设计策略、影响Cas9基因编辑效率的因素、脱靶检测分析方法及其在动物基因编辑研究中的应用。基于CRISPR/Cas9已经在多种动物上成功实现了基因编辑,它有望成为建立动物模型和研究疾病防治的一种新型可行性途径。
- 王玮玮刘瑞琪吴勇延杨严格王勇胜卿素珠
- 关键词：基因敲除基因敲入动物模型
- 一种抗坏血酸钠的应用
- 本发明公开了一种抗坏血酸钠的应用，属于抗坏血酸钠应用技术领域。涉及瘤内注射高剂量抗坏血酸钠在抑制肿瘤生长中的应用，特别涉及单独使用高剂量抗坏血酸钠瘤内注射在抑制小鼠黑色素瘤和人咽鳞癌移植瘤生长中的应用。针对目前静脉注射高...
- 郭泽坤陈冰雪管益安吴勇延
- 文献传递
- 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建
- 2012年
- 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。
- 唐波杜娟杨力侠王小海吴海波吴勇延郭泽坤
- 关键词：SUMO原核表达OCT4SOX2
- 人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选
- 2010年
- [目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。
- 吴勇延肖亮单黎然宋振郭泽坤
- 关键词：RNA干涉
- CRISPR-Cas9研究进展及在基因治疗上的应用被引量：2
- 2016年
- CRISPR-Cas9[Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPRassociated(Cas)9]是近年兴起的一种高特异性和高效的基因编辑新技术,由向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和cas9(CRISPR-associated 9)蛋白组成,引起DNA位点特异性双链断裂(double-strand breaks,DSBs),引发同源重组修复(homology-directed repair,HDR)或非同源末端连接修复(non-homologous end joining,NHEJ),达到靶基因修饰的作用。CRISPR-Cas9技术自发现以来,因其便于操作、花费较低、高特异性、可同时打靶任意数量基因等优点而被应用。近年研究显示,对于一些遗传性疾病,可通过CRISPR-Cas9精确的基因编辑破坏致病的内源基因、改正引起疾病的突变体或插入新的保护性基因进行治疗,该技术为基因治疗开启了一个新方向。主要从CRISPR-Cas9结构、作用机制及在疾病基因治疗上的应用等方面进行了综述。
- 刘瑞琪王玮玮吴勇延赵秋云王勇胜卿素珠
- 关键词：基因治疗
- 雷公藤组培产物中雷公藤甲素和总生物碱含量的测定被引量：26
- 2009年
- 建立了同一提取物中高效液相色谱法测定雷公藤甲素和紫外分光光度法测定雷公藤总生物碱含量的方法,样品用乙酸乙酯超声提取、过中性氧化铝柱,净化后用45%甲醇溶解,测定雷公藤的根皮、叶、雷公藤组培产物及培养液中雷公藤甲素和雷公藤总生物碱的含量。结果表明,雷公藤甲素的检测范围为1～100μg/mL(R2=0.9999);雷公藤总生物碱在5～100μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.9998);在同一提取液中,雷公藤甲素和雷公藤总生物碱的添加回收率分别为100.5%(RSD=0.63%)和99.8%(RSD=1.22%)。研究结果表明,根愈伤组织中雷公藤甲素含量为根皮粉中的1.25倍,培养液中雷公藤甲素产量占56%,总生物碱产量占65%。每生产1g不定根培养物,雷公藤甲素产量为根皮粉中的10倍,雷公藤总生物碱产量为根皮粉中的2倍。
- 李琰冯俊涛史晓燕吴勇延张兴
- 关键词：雷公藤雷公藤甲素高效液相色谱
- 小鼠胚胎干细胞中SUMO修饰对Nanog调控作用研究
- SUMO修饰是真核细胞内广泛存在的一种翻译后修饰途径,调节细胞内多种蛋白的功能、稳定性和亚细胞定位。Nanog基因是维持胚胎干细胞多能性和自我更新的关键基因,为了阐明SUMO修饰对Nanog基因的调控作用,本研究以F9畸...
- 吴勇延
- 关键词：SUMONANOGSOX2OCT4胚胎干细胞
- 文献传递
- AICAR通过激活Foxc1信号抑制小鼠F9细胞增殖
- 2013年
- 为了探索5-氨基咪唑-4-氨甲酰核糖核苷(AICAR)抑制小鼠F9细胞(F9 embryonal carcinoma cells)增殖的作用机制,本文构建了Foxc1的慢病毒真核表达载体,通过实时定量PCR、免疫荧光染色、双荧光素酶报告基因检测系统以及细胞增殖检测试验,探索AICAR抑制小鼠F9细胞的增殖作用机制.结果发现,AICAR可以在RNA和蛋白水平促进Foxc1的基因表达,并可以作用于核转录因子κB通路.另外在培养液中添加AICAR或过表达Foxc1都能抑制F9细胞的增殖.信号通路报告载体检测发现Foxc1可以激活核转录因子κB通路以及细胞周期相关的通路.总之,本研究证明,AICAR通过激活Foxc1通路及其下游多条信号通路来抑制F9细胞增殖.
- 艾志营杨丽萍邵婧婧吴勇延史晓燕杜娟郭泽坤
- 关键词：FOXC1增殖
- 维甲酸促进小鼠F9细胞中STAT1的反式激活作用
- 2012年
- 维甲酸能促进肿瘤细胞的凋亡,诱导体外胚胎干细胞的分化,但作用机制的不明使其应用受到极大限制.因此,更多更全面地了解维甲酸的作用机制具有重要意义.本文构建了信号传导与转录激活因子(STAT1和STAT3)的真核表达载体,通过免疫荧光染色、电泳迁移率实验以及双荧光素酶报告基因检测系统证明,维甲酸诱导可以激活转录因子STAT1促使其进入细胞核,并且增强STAT1蛋白与靶基因启动子的结合能力,从而发挥基因表达调控作用.本文结合后续的STAT1功能分析,试图建立起一种"维甲酸-转录因子-靶基因"的研究模式,有助于维甲酸作用机制的全面、系统的研究.这为临床上使用维甲酸作为抗肿瘤药提供理论基础,同时也为胚胎干细胞多能性调控机制研究提供新思路.
- 吴海波吴勇延郜原杜娟艾志营郭泽坤
- 关键词：维甲酸免疫荧光
