郭泽坤
- 作品数：33 被引量：155H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金陕西省国际科技合作计划陕西省“13115”科技创新工程更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选
- 2010年
- [目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。
- 吴勇延肖亮单黎然宋振郭泽坤
- 关键词：RNA干涉
- 生物技术专业主干实验体系的建立被引量：4
- 2007年
- 西北农林科技大学生命科学学院生物技术系,经过几年不断的探索、改革和完善,建立了一套融基础、前沿于一体,理论与实践统一,以技术性、综合性、探索创新性为寄托的生物技术专业主干实验体系。具体包括实验课程体系、教学内容及实验室管理体制三个方面。
- 肖红利郭泽坤李亚敏
- 关键词：生物技术
- 山羊胚胎的卵裂与囊胚形成的光镜研究被引量：6
- 1999年
- 山羊交配后的１．５ ，２．０，２．５，３．５，４．０ ，５．５，６．５ ｄ，胚胎分别发育到原核、２ 细胞、４ 细胞、８ 细胞、１６ 细胞、桑椹胚、囊胚期。超排处理情况下，山羊排出的多个卵，时间可能不一致，因而受精后胚胎发育阶段可能不同步，而出现差异。随着卵裂球逐步变小，其界限逐步模糊不清，到桑椹胚时发生形态的不一致，因此，此时为致密化时间。以交配后时间计算胚龄与以排卵后卵受精时间计算胎龄是一致的。山羊囊胚滋养层细胞与内细胞群外层细胞形态不一致， 因此， 从形态上可以认为山羊内细胞群一开始就是裸露的。
- 曹贵方张涌李裕强郭泽坤
- 关键词：山羊胚胎卵裂囊胚
- 人SUMO-3基因原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2008年
- 构建人SUMO-3基因的原核表达载体pET41a(+)-SUMO-3,表达重组GST-SUMO-3融合蛋白,制备人SUMO-3多克隆抗体。试验结果显示,通过PCR方法从重组质粒pEYFP-SUMO-3中克隆到的SUMO-3N端93个氨基酸的基因序列与NCBI上提供的序列一致,重组质粒pET41a(+)-SUMO-3构建成功;重组pET41a(+)-SUMO-3在E.coli.BL21(DE3)pLysS中表达GST-SUMO-3融合蛋白,分子量为44.0 kDa,与预期分子量一致;采用亲和层析纯化融合蛋白GST-SUMO-3并免疫家兔,获得人SUMO-3抗体;Westernblot检测显示该抗体可以特异性识别SUMO-3,ELISA检测结果成阳性,抗体效价约为1∶20000。实验结果为进一步研究人SUMO-3及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。
- 安宁杨振宋振雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建
- 2012年
- 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。
- 唐波杜娟杨力侠王小海吴海波吴勇延郭泽坤
- 关键词：SUMO原核表达OCT4SOX2
- 基因工程综合型实验教学体系的建立被引量：1
- 2017年
- 针对传统实验教学方法的弊端,对基因工程实验课程进行了系统改革,通过设计综合型大实验体系,引入多媒体、讨论式和总结式教学方法,充分调动了学生主动学习的积极性,提高了学生的综合实验技能,同时将科研实践融入实验教学中,通过几年的教学实践,受到各届学生和国内同行的一致好评。
- 刘华伟郭泽坤王保莉刘香利张大鹏
- 关键词：基因工程多媒体辅助传统实验教学
- AICAR通过激活Foxc1信号抑制小鼠F9细胞增殖
- 2013年
- 为了探索5-氨基咪唑-4-氨甲酰核糖核苷(AICAR)抑制小鼠F9细胞(F9 embryonal carcinoma cells)增殖的作用机制,本文构建了Foxc1的慢病毒真核表达载体,通过实时定量PCR、免疫荧光染色、双荧光素酶报告基因检测系统以及细胞增殖检测试验,探索AICAR抑制小鼠F9细胞的增殖作用机制.结果发现,AICAR可以在RNA和蛋白水平促进Foxc1的基因表达,并可以作用于核转录因子κB通路.另外在培养液中添加AICAR或过表达Foxc1都能抑制F9细胞的增殖.信号通路报告载体检测发现Foxc1可以激活核转录因子κB通路以及细胞周期相关的通路.总之,本研究证明,AICAR通过激活Foxc1通路及其下游多条信号通路来抑制F9细胞增殖.
- 艾志营杨丽萍邵婧婧吴勇延史晓燕杜娟郭泽坤
- 关键词：FOXC1增殖
- 人泛素基因原核表达载体构建、表达及鉴定被引量：1
- 2008年
- [目的]构建含人泛素(Ubiquitin,Ub)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达。[方法]应用PCR扩增人Ub基因片段,插入表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3)PLysS,经诱导表达及鉴定。[结果]PCR扩增出约228bp的基因片段,克隆至载体后,经测序与GenBank中的一致,表达蛋白相对分子质量约34000,纯化后鉴定为目的蛋白。[结论]已成功获得人Ub蛋白,为进一步的研究和应用奠定了基础。
- 江春雨郭泽坤
- 关键词：泛素基因克隆原核表达
- 改革实验课程体系,实现实践教学跨越式发展被引量：1
- 2007年
- 经过多年的探索实践,对生物技术专业的实验课程体系进行改革。提出课程体系的整体把握注重关联性、系统性,既包括上游技术,又包括下游技术:内容的设置既有基本技能训练,又紧随生物技术发展的前沿;项目的选择强调综合性、研究性、设计性和连贯性;教学突出学生的主体地位。该体系有效的开拓了学生的创造能力和分析解决问题能力,提高了学生综合素质培养。
- 郭泽坤肖红利李亚敏
- 关键词：课程体系实践教学
- 电解质平衡值对热应激时肉鸡生产性能和血液生化指标的影响被引量：4
- 2006年
- 研究表明,在热应激状态下饲喂DEB240 mEq/kg饲料,肉鸡的抗热应激效果较好,能有效缓解酸碱失衡,血液中离子常数值变化较小,肉鸡达到气喘和虚脱的时间较长。
- 姜金庆郭泽坤杨雪峰赵恒章刘庆立
- 关键词：肉鸡电解质平衡值热应激血液生化指标
