吴先强
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 转录因子Sox2 SUMO修饰位点突变体的构建及真核表达
- 2009年
- 目的:构建Sox2及突变体Sox2 K247R的真核表达载体,并在293FT细胞中表达。方法:以含有Sox2基因全长的馈赠质粒为模板,用循环延伸PCR法得到该基因的突变体Sox2 K247R,并将野生型及突变型基因定向亚克隆到真核表达载体pCMV-HA上。得到的重组质粒经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定。其后用脂质体包埋法将pCMV-HA-Sox2及pCMV-HA-Sox2 K247R分别单独转染或与pCMV-Myc-SUMO1共转染293FT细胞。采用Western blot分析蛋白表达情况及SUMO修饰情况。结果:经酶切和DNA序列测定,重组子序列正确,突变体第247位密码子由AAG转变为CGG。West-ern blot结果显示野生型及突变型的Sox2都在细胞内得到了很好的表达,SUMO修饰位点突变后,Sox2不能与SUMO蛋白结合。结论:Sox2野生型及突变型真核表达载体构建成功,在蛋白水平体现了SUMO修饰的差异性。
- 郭泽坤吴先强单黎然宋振
- 关键词：SOX2SUMO亚克隆定点突变真核表达
- 人PML基因多克隆抗体的制备及其亚细胞结构定位的研究
- 早幼粒细胞白血病蛋白核体（Promyelocytic leukaemia nuclear bodies,PML-NBs）是哺乳动物细胞核中的一种亚核结构,广泛参与如转录调节、基因组稳定性、抗病毒感染、抑制肿瘤、细胞凋亡、...
- 吴先强
- 关键词：多克隆抗体
- 文献传递
- 人PML-Ⅲ基因多克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人PML-Ⅲ基因的原核表达载体,制备人PML-Ⅲ多克隆抗体,并用该抗体观察PML核体的亚细胞结构定位以及PML蛋白的SUMO-1修饰。方法:从质粒pEG-FP-PML-Ⅲ中PCR扩增得到人PML-Ⅲ(1-600 bp)基因并克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-PML-Ⅲ,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。分别通过ELISA、免疫荧光和Western blot方法鉴定抗体效价和特异性。脂质体包埋法将PML-III和SU-MO-1的真核质粒转染到HeLa细胞,用免疫荧光和Westernblot方法分别检测PML核体的亚细胞结构定位以及PML蛋白的SUMO-1修饰。结果:成功构建PML-Ⅲ的原核表达载体,并获得多克隆抗体;经ELISA、免疫荧光和Western blot检测,证实所制备的PML-Ⅲ多克隆抗体具有较高的特异性,并且效价为1∶128 000;研究结果还表明PML核体定位于细胞核,并且该抗体可以检测到PML蛋白的SUMO-1修饰。结论:获得了较高特异性的人PML多克隆抗体,为进一步研究PML核体形成和降解的机理以及在这个过程中重要蛋白之间的相互作用打下基础。
- 潘聪苗帅李倩吴先强雷鸣
- 关键词：多克隆抗体SUMO-1
- 水分胁迫条件下冷暖型小麦幼苗期某些生理特性变化比较被引量：3
- 2007年
- 采用溶液培养、PEG6000渗透胁迫处理等方法研究了不同温度型的小麦品种小偃6号(冷型)、陕229(冷型)和NR9405(暖型)在水分胁迫条件下,幼苗期小麦叶片中叶绿素含量、可溶性蛋白质含量、细胞膜相对透性、叶片相对含水量(RWC)、水势等生理特性的变化。结果表明:水分胁迫条件下,与暖型小麦NR9405相比,冷型小麦小偃6号和陕229叶片中叶绿素和可溶性蛋白质含量下降缓慢,细胞膜相对透性较低,相对含水量(RWC)、水势较高。该结果说明,冷型小麦对于干旱的适应性较暖型小麦强。
- 杨亚平周春菊胡景江吴先强周涛朱燕林森龙
- 关键词：冷型小麦暖型小麦PEG胁迫生理特性
