公共文化服务平台

共 8 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

西藏小型猪OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组融合蛋白制备: 目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：（1）根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物，以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板，经RT-PCR方...; 吴丽红刘闻袁进黄威顾为望施振旦; 关键词：西藏小型猪基因克隆重组融合蛋白; 文献传递

Hpd基因修饰制备高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型被引量：3: 2019年; 目的利用CRISPR/Cas9技术敲除巴马小型猪4-羟基苯丙酮酸氧化酶(4-OH phenylpyruvate dioxygenase,4HPPD/HPD)制备高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型。方法分别从质粒pGL3-U6-gRNA-PGK-puromycin和pST1374-NLS-flag-linker-Cas9中通过PCR扩增sgRNA-Hpd和Cas9体外转录用模板,接着体外转录出Cas9 mRNA和sgRNA-Hpd,最后将Cas9 mRNA和sgRNA-Hpd共注射入巴马小型猪受精卵的胞质内,以制备Hpd基因敲除巴马小型猪。结果胞质内共注射后,共移植20枚受精卵至2只代孕母猪。获得子代Hpd基因敲除巴马小型猪共4只。结论本研究成功制备了高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型,将为研究酪氨酸代谢通路提供更好的模型。; 顾鹏陈傍柱徐涛刘闻邓俊成徐名衬袁进陈恩生顾为望; 关键词：巴马小型猪

静脉输注过氧化氢溶液上调小鼠脾脏和外周血CD4^+Foxo3^+调节性T细胞被引量：1: 2011年; 背景:现已证实,天然生成的调节性T细胞在维护机体免疫稳态、抑制炎性反应、抗移植排斥、抑制抗肿瘤免疫应答以及防治自身免疫病中都有重要的功能和作用。目的:探讨静脉输注过氧化氢对BALB/c小鼠CD4+CD25+Foxo3+调节性T细胞的影响。方法:取BALB/c小鼠12只,随机分为两组。H2O2处理组小鼠尾静脉注射含有H2O2的PBS;PBS组小鼠静脉注射无菌PBS。分别在注射2周后处死小鼠,采集小鼠外周血、脾脏和胸腺,采用流式细胞仪检测其中CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例。结果与结论:H2O2处理组小鼠外周血和脾脏CD4+Foxp3+T细胞比例、CD4+Foxp3+/CD4+细胞比例均高于对照组小鼠(P<0.05)。提示静脉注射H2O2能上调小鼠外周血和脾脏内CD4+Foxp3+调节性T细胞的比例。; 顾东曙刘闻顾为望; 关键词：调节性T细胞小鼠

免疫OBR胞外近跨膜区蛋白对SD大鼠糖、脂代谢的影响: 研究背景随着人们健康保健意识的提高,逐渐意识到肥胖不单纯是体重超标,也是亚健康甚至是病态表现,同时也是II型糖尿病、心血管病、非酒精性脂肪肝、心血管疾病、骨质疏松、中风和癌症等多种疾病的高危诱发因素。引起肥胖的原因有很...; 刘闻; 关键词：瘦素受体重组融合蛋白脂肪沉积; 文献传递

Ⅰ型遗传性酪氨酸血症动物模型研究进展被引量：1: 2018年; I型遗传性酪氨酸血症(hereditary tyrosinemia type 1,HT1)是一种常染色体隐形遗传病,主要是由于FAH基因(fumarylacetoacetate hydroxylase,FAH)突变导致酪氨酸代谢发生障碍,不能正常代谢延胡索酸和乙酰乙酸。临床上主要表现为严重的肝、肾损伤,甚至肝癌。依赖基因编辑技术的发展,Fah基因修饰的小鼠、大鼠、兔和小型猪模型均相继成功制备。目前,这些动物模型已经广泛应用于人类HT1疾病的病理生理、肝脏生物学、肝干细胞以及肝癌基因治疗的研究,同时也用于制备人源化肝和人肝细胞扩增的生物反应器。本文拟对I型遗传性酪氨酸血症动物模型的相关研究进展进行综述和探讨,为更好的研究该疾病提供一些线索。; 顾鹏刘闻袁进徐名衬陈傍柱徐涛顾为望; 关键词：肝损伤动物模型

西藏小型猪OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组融合蛋白制备: 目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：(1)根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物,以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板,经RT-PCR方...; 吴丽红刘闻黄威郭日红袁进顾为望施振旦; 关键词：西藏小型猪瘦素受体基因重组融合蛋白

大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的过表达被引量：2: 2013年; 目的构建携带大鼠瘦素(leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。方法提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用Spe I和EcoR V双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。结果测序证实瘦素基因与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5×1012vg/mL纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA-Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP感染鼠神经元细胞5d后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。结论成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。; 裴娜娜吴丽红高永新毛莹莹罗杰黄威刘闻张屹顾为望李红卫; 关键词：瘦素腺相关病毒载体神经元细胞

免疫瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白对SD大鼠脂肪沉积的影响被引量：2: 2013年; 目的原核表达瘦素受体（OBR）近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验，观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响。方法设计1对带有BamHI和Hindlll酶切位点特异性引物，扩增OBR胞外近跨膜区基因片段（1705～2364bp），经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamHI和HindⅢ两酶切位点之间，构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E．coli BL21（DE3）中表达，SDS．PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠，观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响。结果SDS．PAGE电泳分析和Western blotting鉴定结果显示，在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27600左右的融合蛋白。对SD大鼠免疫0BR胞外近跨膜区重组融合蛋白后，体质量、体长、Lee’S指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异，而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小。结论成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白，免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积。; 刘闻吴丽红徐名衬郭日红顾为望施振旦袁进; 关键词：瘦素受体原核表达重组融合蛋白脂肪沉积

全选清除导出

共1页<1>

刘闻

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

刘闻

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈