裴娜娜
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：广州市重大科技专项计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-21在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞株增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究miR-21在鼻咽癌组织及细胞中的表达,并分析miR-21反义核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用荧光定量RT-PCR方法检测miR-21在鼻咽癌组织及细胞株中的表达;利用脂质体Lipofectamine TM2000将miR-21 ASO瞬时转染至鼻咽癌细胞,通过荧光定量RT-PCR检测miR-21的沉默效果。利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)、平板克隆形成实验检测miR-21对细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-21对细胞周期的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡-Annexin V-FITC/PI双染色法检测miR-21对鼻咽癌细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测caspase-3蛋白的表达;caspase-3活性检测试剂盒检测沉默miR-21后caspase-3的活性变化。结果 miR-21在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中显著高表达;MTT法分析显示,细胞接种96 h后,5-8F/miR-21 ASO组的生长速度较对照组显著下降(P<0.05),细胞克隆形成率较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果表明沉默miR-21表达的细胞增殖受抑,主要通过诱导G0/G1期阻滞,减少S期细胞的比例;流式细胞仪检测结果显示转染miR-21 ASO组较对照组细胞凋亡率明显增加,并且caspase-3的活性明显增强。结论 miR-21在鼻咽癌组织及细胞中表达上调,靶向miR-21可有效抑制鼻咽癌细胞增殖、促进细胞凋亡。miR-21的表达可能影响鼻咽癌细胞的生长。
- 万仁强傅向军张学辉黄健男裴娜娜邹苑斌刘华盛
- 关键词：MIR-21细胞增殖细胞凋亡鼻咽癌
- 大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的过表达被引量：2
- 2013年
- 目的构建携带大鼠瘦素(leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。方法提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用Spe I和EcoR V双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。结果测序证实瘦素基因与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5×1012vg/mL纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA-Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP感染鼠神经元细胞5d后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。结论成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。
- 裴娜娜吴丽红高永新毛莹莹罗杰黄威刘闻张屹顾为望李红卫
- 关键词：瘦素腺相关病毒载体神经元细胞
