万言珍
- 作品数：20 被引量：23H指数：3
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- 轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR方法获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30 a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDS-PAGE和Western-blotting检测,目的产物用镍柱纯化。结果①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,VP5*为60 kD,VP8*为28 kD,Western-blotting检测发现两目的蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,纯度达90%。结论①构建表达载体pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②表达、纯化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段。
- 金琳琳李鹏万言珍岳盈盈李志会孟红
- 关键词：RV原核表达
- 山东肥城寒武纪竹叶状石灰岩菌群分析被引量：2
- 2009年
- 为了探讨微生物活动与地层形成的关系,对山东肥城万灵山寒武纪竹叶状石灰岩中的微生物进行了培养分离,用PCR方法获得了它们的16S DNA序列,通过序列比对确定了这些微生物的种属,并对这些细菌进行了系统发育进化分析。结果表明这些细菌属于芽胞杆菌属(Bacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)及未培养细菌(Un-cu ltured bacterium),万灵山竹叶状石灰岩的微生物菌群分布以革兰阳性芽胞杆菌占优势。
- 李鹏李志会金琳琳岳盈盈万言珍沈琮高川孟红
- 关键词：菌群
- PrP八肽重复突变体对细胞生长影响的探讨
- 2007年
- 目的探讨PrP八肽重复突变体对细胞生长的影响。方法将具有遗传性朊病毒病相关不同八肽重复区插入突变的PRM，基因表达载体瞬时转染HeLa细胞，经噻唑蓝比色法（MTT）、Annexin—V／PI双染流式细胞检测。结果多八肽突变PrP蛋白对细胞的毒性作用较野生型明显增强。多八肽突变PrP较野生型更容易诱导凋亡发生，多八肽突变组早、晚期凋亡率均高于野生组。结论遗传性朊病毒病相关多八肽突变PrP蛋白可能较野生型更易诱导细胞凋亡发生。
- 韩露万言珍韩俊陈岚孙力王小凡黄银霞董辰方姜慧英董小平
- 关键词：朊病毒肽类噻唑蓝比色法细胞凋亡
- JN219抗病毒谱的初步研究
- 目的:探讨一种单峰化合物(从真菌分离,命名为JN219)的抗病毒谱。方法:选用疱疹病毒科病毒 (HCMV、HSV-1、HSV-2)、腺病毒科病毒(Ad3)、副粘病毒科病毒(RSV)、呼肠病毒科病毒(轮状病毒,RV SA1...
- 薛开莲岳盈盈万言珍李鹏李志会马瑜孟红
- 文献传递
- PrP的胞内运输与朊病毒病被引量：3
- 2005年
- 朊病毒病,即传染性海绵状脑病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSEs),是一类致死性的神经退行性疾病,存在散发性、感染性和遗传性3种形式。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrPC(cellularPrP)转化为异常构象的PrPSc(scrapiePrP)是至关重要的,但是朊病毒的增殖如何导致神经元凋亡仍不清楚。PrPC的胞内运输在朊病毒病中发挥重要作用,朊病毒感染后PrPC转化为PrPSc,及遗传性朊病毒病中PrP突变可能影响PrP的生物合成、亚细胞定位及转运过程,通过干扰PrPC的正常功能或产生毒性中间体而导致神经系统病变。现对近年来关于PrP胞内运输在朊病毒病中的作用进行综述。
- 王小凡韩俊高建梅万言珍李锋董小平
- 关键词：朊病毒病传染性海绵状脑病神经退行性疾病亚细胞定位病理过程
- 烟台地区病毒性脑炎病毒分离与病原学分析被引量：3
- 2012年
- 目的了解烟台地区病毒性脑炎病原谱及其基因特征。方法采集烟台地区病毒性脑炎患者脑脊液46份及粪便标本10份,通过细胞培养分离病毒,RT-PCR扩增肠道病毒VP1区并测序,进行基因序列分析。结果从46例病毒性脑炎患者脑脊液标本中分离到11株病毒,分离率为23.91%,10份粪便标本中分离病毒5株。16株病毒经鉴定7株为肠道病毒,其中EV71型4株。EV71与其他地区流行株VP1区序列差异较小。结论烟台市病毒性脑炎以肠道病毒为主,有EV71型流行,与其他地区流行株相比,EV71型VP1区基因变异较小。
- 韩文清宫连凤刘娟张萍孙颖孟红李鹏万言珍
- 关键词：病毒性脑炎肠道病毒脑脊液
- 一起病毒性脑炎病因的分子生物学鉴定
- 2007年
- 目的探讨2003年山东济南地区病毒性脑炎(VE)流行病因。方法通过随机PCR及肠道病毒特异性的RT-PCR扩增获得病毒分离株特异性核酸片段,测序并进行同源性分析和多序列比对,确定病毒种类及分型。结果从患者标本中分离到5株病毒,以随机PCR获得其中1株病毒的核酸片段,经BLAST分析发现其与肠道病毒同源性最高,然后分别测得5株病毒5′端非编码区及部分VP1区核酸序列,经序列比对分析,确定5株病毒均为小RNA病毒科肠道病毒属的柯萨奇B5,并且均与2002—2004年间浙江无菌性脑膜炎流行期间分离的柯萨奇B5分离株同源性最高(95%以上)。结论柯萨奇B5是2003年济南地区VE流行的重要病因之一。
- 万言珍岳盈盈李鹏李志会李军孟红
- 关键词：脑炎病毒性聚合酶链反应
- 载脂蛋白ApoE的原核表达以及与PrP蛋白间相互作用的初步研究被引量：3
- 2005年
- 利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出载脂蛋白ApoE基因,并在pET32a载体中表达融合蛋白His-ApoE,以纯化的融合蛋白免疫实验用兔获得特异性抗体,利用ELISA及免疫共沉淀方法对ApoE及PrP之间的相互作用进行研究。结果表明,SDS-PAGE显示表达的His-ApoE蛋白的相对分子量约为54 000,所制备的抗血清ELISA效价可达到1∶406 900,并能够有效地识别重组及动物组织中的内源性ApoE蛋白。ELISA和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的ApoE可与全长的PrP蛋白(PrP23-231)在体外发生相互作用,其作用位点可能位于PrP蛋白的N端。这些结果为TSE经血传播的机制研究提供了新思路。
- 高晨韩俊石琦陈岚万言珍高永军陈建明姜慧英周伟张宝云董小平
- 关键词：抗体分子间相互作用
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gG在毕赤酵母表达系统中的表达及抗原性分析
- 2008年
- 目的 构建单纯疱疹病毒gGl-毕赤酵母表达系统并初步分析表达产物的抗原活性.方法 以HSVI病毒增殖物为模版,用PCR扩增HSV-1gGl基因全序列,将目的序列插入载体pPIC9K,测序后电转化GS115菌株进行G418筛选、甲醇诱导表达,用SDS-PAGE方法跟踪分析表达条件,用ELISA方法检测目的蛋白的抗原活性.结果 DNA测序、凝胶电泳、ELISA试验结果表明pPIC9K-HSVgGI载体构建成功,G418压力筛选得到的重组酵母菌株可分泌表达目的蛋白gGl,蛋白可与特异性抗体发生结合反应.结论 构建了HSV一1 gGl酵母表达系统,表达的目的蛋白gGl具有抗原活性.
- 岳盈盈周建勋万言珍李鹏李志会孟红
- 关键词：毕赤酵母
- 真菌提取物JN219抗人巨细胞病毒机制的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨真菌提取物JN219的抗病毒机制。方法(1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:将样品(JN219 50μg/ml、柱洗脱组分5 g/L)分别与人巨细胞病毒(HCMV半数组织感染量TCID50为105/ml)等容量混合,不同时间(混合后立刻、混合后37℃作用1 h)以不同稀释度、100μl/孔接种至多孔板人胚肺细胞(HEL)上;(2)样品对病毒复制的抑制作用:将HCMV(100个TCID50)100μl/孔接种于HEL上1 h后,加不同稀释度的样品;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:将紫外线灭活的HCMV与JN219、柱洗脱组分等容量混合,37℃作用1 h,加等容量HCMV(TCID50为105/ml)混合37℃作用1 h,以不同稀释度、100μl/孔接种于96孔板内的HEL上。以上各实验组同时设细胞对照组、病毒对照组、空白对照组、相应稀释度的样品对照组,37℃、5%CO2培养,每日观察细胞CPE,当病毒对照病变90%以上,终止培养,中性红染色,在540 nm读取吸光度A值,用Reed-Muench法计算细胞半数有效浓度(IC50)和病毒TCID50。通过比较组间差异,探讨在哪一复制周期样品对病毒产生抑制作用。结果(1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:JN219、柱洗脱组分与HCMV等容量混合后立刻接种细胞,测得病毒TICD50为104.8/ml,与病毒对照组比较(TCID50为105/ml)差异无显著性;与病毒作用1 h后接种细胞,JN219、柱洗脱组分IC50分别为0.168μg/ml、0.185μg/ml,第一孔JN219 TCID50为101.6/ml,柱洗脱组分标本未测得病毒,可使HCMV得到抑制;(2)样品对病毒复制的抑制作用:先将病毒接种细胞1 h,然后加JN219、柱洗脱组分,IC50分别为3.29μg/ml、13.1 g/L,样品不能完全抑制人巨细胞病毒病变的发生;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:紫外线灭活的病毒与样品作用1 h,再加等容量病毒后接种细胞,样品JN219、柱洗脱组分与病毒混合物TCID50分别为103.5、103.75,样品抗病毒位点已被紫外线灭活病毒外膜蛋白占据,抗病毒效果降�
- 薛开莲司书毅李妍岳盈盈万言珍李鹏李志会马瑜孟红
