黄巨富
- 作品数：43 被引量：75H指数：5
- 供职机构：中国科学院植物研究所植物分子生理学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家攀登计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学更多>>
- 菠菜甜菜碱醛脱氢酶对甜菜碱醛的氧化被引量：15
- 1991年
- 测定了15种植物叶片的甜菜碱含量。结果表明,抗盐碱、干旱和抗寒的植物含量较高。从菠菜叶片分离和部分纯化了甜菜碱醛脱氢酶,并对其某些性质进行了研究。甜菜碱醛脱氢酶存在于60%的硫酸铵部分,70%硫酸铵部分未检出其活性。该酶有两个同工酶,在-80℃条件下十分稳定,其活性为0.125—1.0mol/L的NaCl和KCl所抑制,但Mn^(2+)和Mo^(6+)离子对活性没有影响,而Mg^(2+)稍增加其活性。
- 梁峥赵原李浴春邹喻苹骆爱玲黄巨富
- 关键词：菠菜脱氢酶
- 棕色固氮菌nifE缺失突变株(DJ35)钼铁蛋白的特性被引量：1
- 2005年
- 从棕色固氮菌缺失nifE的突变株DJ35中纯化得到纯度约为80%的MoFe蛋白(△nifE Av1).与野生种OP中纯化出的MoFe蛋白(OP Av1)相比,△nifE Av1具有与之相同的亚基组成,并可与OP Av1的抗体发生免疫交叉反应,但在厌氧天然电泳中的迁移率略大于OP Av1.金属含量测定表明,△nifE Av1的Mo和Fe含量均显著下降.△nifE Av1单独与OP Fe蛋白互补时不具乙炔还原活性,但可被从OP Av1中抽提出的FeMo-co体外激活.△nifE Av1的圆二色谱450nm附近区域与OP Av1的相似,而电子顺磁共振谱中g≈3.7的信号则完全消失,g≈4.3和2.0处的信号也分别下降75%和50%左右.上述结果表明,从DJ35中纯化出的△nifE Av1是一种FeMo-co缺失而P-cluster正常的MoFe蛋白.
- 赵颖边少敏张纯喜周会娜王煌平赵剑峰黄巨富
- 关键词：棕色固氮菌电子顺磁共振NIFE缺失突变株钼铁蛋白
- 固氮酶铬铁蛋白的晶体生长(英文)被引量：1
- 2002年
- 在合适的结晶条件下 ,从含Cr无氨培养基中生长的固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 中纯化出的CrFe蛋白可从溶液中析出深棕色斜四棱柱晶体 ,晶体最大的两条对角线长度分别可达 0 .2 5mm和 0 .12mm。PEG 80 0 0、MgCl2 、NaCl、Tris和Hepes缓冲液的浓度及结晶方法等对该蛋白的出晶率、晶核数目、晶体大小和质量都有明显影响。CrFe蛋白结晶所需的上述化合物的最适浓度与在Mn中生长的固氮菌突变种UW3 的MnFe蛋白和缺失nifZ固氮菌突变种的ΔnifZMoFe蛋白结晶所需的最适浓度有所不同。结果表明 。
- 张华峰王耀萍吕玉兵赵颖代小虎董志刚黄巨富
- 关键词：固氮菌突变种晶体生长
- 含锰固氮酶组分Ⅰ蛋白的纯化和特性(英文)被引量：2
- 2001年
- 棕色固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 能在无Mo而含Mn的无氨培养基中固氮生长。低浓度的Mn对UW3 突变种生长有促进作用。从在Mn中生长的UW3 菌体中分离得到的部分纯固氮酶组分Ⅰ蛋白含有Mn和Fe原子 (Fe/Mo/Mn为 10 .41∶0 .19∶1.0 0 )并具有OPMoFe蛋白一半的还原乙炔和质子的活性。这种蛋白的吸收光谱和圆二色谱与MoFe蛋白存在明显的差异 ,含Mn蛋白的亚基分子量都与MoFe蛋白的α亚基相近。初步结果表明 ,这种含Mn蛋白可能是一种固氮酶组分Ⅰ蛋白。
- 黄巨富汪道涌董志刚汪志平张华峰吕玉兵许祥明赵颖
- 关键词：蛋白纯化
- 缺失nifZ棕色固氮菌突变株(DJ194)钼铁蛋白的金属原子簇的组成与分布被引量：1
- 2005年
- 经DEAE 52, Q-Sepharose和Sephacryl S-200柱的厌氧层析, 从缺失nifZ基因的棕色固氮菌突变株(DJ194)中纯化得到固氮酶钼铁蛋白(ΔnifZ Av1). 厌氧天然电泳后的Western blotting和SDS-变性凝胶电泳显示, ΔnifZ Av1的电泳迁移率、分子量和亚基组成等与野生种钼铁蛋白(OP Av1)相似; 而且ΔnifZ Av1的Mo含量、EPR信号(g ≈ 4.3, 3.65和2.01)及660 nm附近的圆二色摩尔消光系数(Δε)也都与OP Av1较相似, 表明ΔnifZ Av1除具有α2β2四聚体结构组成外, 还含有与OP Av1数量相当的、具有3/2自旋态的还原FeMoco. 然而, ΔnifZ Av1的Fe含量和对底物 (C2H2, H+和N2)的还原活性都较低, 分别约为OP Av1的74%和46%～50%, 而反映P-cluster状况的450 nm附近的Δε也明显低于OP Av1, 说明ΔnifZ Av1与OP Av1的差别在于P-cluster, 而不在于FeMoco, 而且是在于ΔnifZ Av1中P-cluster数目的减少(约50%), 而其组成或氧还状态并未改变. 据此推测ΔnifZ Av1(DJ194)的结构为: 一个αβ亚基对含有一个FeMoco和一个P-cluster, 而另一个αβ亚基对只含FeMoco, 无P-cluster. 由于nifZ基因的缺失只造成了钼铁蛋白中2个P-cluster中的一个不能组装, 因此推测P-cluster的组装可能不是受单一基因产物的影响并由此提出了NifZ的可能作用机理.
- 周会娜张纯喜赵颖赵颖边少敏王煌平任飞
- 关键词：棕色固氮菌钼铁蛋白突变株金属原子簇圆二色自旋态
- 缺失P-铁硫原子簇的钼铁蛋白的重组研究被引量：2
- 1990年
- 棕色围氮菌(Azotobacter vinelandii)铜铁蛋白经邻菲啰啉处理后,克分子消光系数δ_(100nm)和圆二向色性克分子消光系数△δ_(450nm)以及乙炔还原活性都随着 P-cluster 中 Fe 原子被螯合数目的增加而降低;而与由 Mo、Fe、S 和 DTT 组成的溶液重组后,吸收光谱、圆二色谱和乙炔还原活性又都随着金属组成的恢复而恢复。结果表明,重组溶液使邻菲啰啉处理而缺失 P-cluster 的铝铁蛋白因重新组装 P-cluster 而恢复活性,从而再次证明了 P-cluster 是钼铁蛋白还原底物所不可缺少的重要部分。
- 黄巨富骆爱玲解雪梅王熬金
- 关键词：棕色固氮菌钼铁蛋白
- 对与缺失铁钼辅基的固氮酶钼铁蛋白重组的原子簇的结构要求(英文)
- 1995年
- 棕色固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）钼铁蛋白与邻菲口罗啉和Ｏ２ 保温并经凝胶柱层析后，成为部分缺失Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ和ＦｅＭｏｃｏ 的失活蛋白。由３ 个－ ＯＣＨ３－ 连结于Ｍｏ原子间的２ 个１Ｍｏ∶３Ｆｅ∶４Ｓ结构单位组成的原子簇与４Ｆｅ∶４Ｓ原子簇的混合液，以及由ＫＭｎＯ４、高柠檬酸铁、Ｎａ２Ｓ和二硫苏糖醇组成的重组液均可使这种失活蛋白明显恢复Ｃ２Ｈ２ 还原活性，但都不能使可被ＦｅＭｏｃｏ 激活的ｎｉｆＥ和ｎｉｆＨ 基因缺失突变种及ＵＷ ４５的Ａｐｏ－ＭｏＦｅ 蛋白得到激活。表明，不能合成ＦｅＭｏｃｏ 的固氮菌突变种蛋白只能与具有ＦｅＭｏｃｏ相似或基本相似结构的原子簇进行体外重组，而部分缺失金属原子簇的钼铁蛋白能与具有一定结构和组成的原子簇进行体外重组，变为具有催化氮还原能力的各种固氮酶组分蛋白。
- 黄巨富骆爱玲李佳格徐吉庆南玉明陈亚东
- 关键词：原子簇固氮酶钼铁蛋白
- 棕色固氮菌突变种UW3部分提纯的固氮酶CrFe蛋白溶液中残存细菌铁蛋白的晶体生长及鉴定被引量：2
- 2004年
- 从无钼、无氨而含铬的固氮培养基中生长的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW3中纯化得到了部分纯的CrFe蛋白。在试图培养CrFe蛋白大晶体时发现，棕色晶体和砖红色晶体可同时或单独出现。SDSPAGE和厌氧天然PAGE皆表明，棕色晶体主要由与固氮酶钼铁蛋白(Avl)类似大小的亚基(～60kD)组成，而砖红色晶体则由～20kD亚基组成。免疫分析表明只有～60kD的亚基可与固氮酶钼铁蛋白的抗体反应，而～20kD亚基则无这种反应。在部分纯的CrFe蛋白溶液中，～20kD的总蛋白含量远低于～60kD蛋白的含量，表明由这种小亚基组成的蛋白只是CrFe蛋白溶液中的一种污染蛋白。用3，5-二氨基苯甲酸染色的天然电泳表明，形成砖红色和棕色晶体的蛋白是迁移率不同的两种含铁蛋白。质谱分析表明砖红色晶体蛋白为棕色固氮菌的细菌铁蛋白。分辨率为2．34A的X射线衍射结果也表明，砖红色晶体属于H3空间群，晶胞参数为a=124．965A^°，b=124．965A^°和c=287．406A^°。即将发表的三维结构解析表明，此砖红色晶体确为24聚体的细菌铁蛋白。
- 赵剑峰刘合力周会娜汪志平赵颖边少敏李树兴毕汝昌黄巨富
- 关键词：细菌铁蛋白棕色固氮菌突变种
- 钼、铁、硫化合物激活曝氧的棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白的研究被引量：2
- 1989年
- 曝氧后,棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)固氮酶钼铁蛋白的催化活性和圆二色信号都显著降低,而吸收光谱则显著增加。与钼、铁、硫化合物和二硫苏糖醇组成的重组溶液保温后,曝氢蛋白的圆二色信号和吸收光谱几乎完全恢复至天然状态的同时,乙炔还原活性也得到了显著的恢复,表明重组溶液可使曝氧蛋白中的 P-cluster和其它活性部位都得到了不同程度的修复。
- 黄巨富骆爱玲解雪梅王熬金
- 关键词：棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白
- 系列钼硫化合物生物重组活性的研究
- 1997年
- 新近,Kim等测定了棕色固氮菌MoFe蛋白的晶体结构。
- 徐吉庆南玉明刘彦周晓华周立明陈亚东牛淑云王铁钢黄巨富骆爱玲汪志平种泽璞李佳格
- 关键词：钼铁蛋白重组活性晶体结构固氮菌
