闫敏鑫
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 表达鸡补体因子C3d基因重组杆状病毒的构建及初步应用被引量：2
- 2015年
- 为研制鸡体内补体因子C3d抗体的检测方法,采用RT-PCR方法从鸡肝脏组织细胞的总RNA中扩增出1 002bp的鸡补体因子C3d基因全长,然后将其克隆到杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中获得重组质粒pFB-C3d。将pFB-C3d转化到带有杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-C3d。再将该重组杆粒转染到昆虫细胞sf9中,通过病毒拯救技术构建携带C3d基因的重组杆状病毒。Western blot试验结果表明,重组杆状病毒能在昆虫细胞sf9中表达出大小约为35 000的C3d-his融合蛋白。以该融合蛋白作为抗原建立的Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)显示,经C3d-M2-GST融合蛋白免疫的鸡血清能够与杆状病毒表达的C3d结合,说明本研究构建的重组杆状病毒可以用来检测C3d作为分子佐剂及其融合蛋白免疫鸡后产生针对C3d自身的抗体,为今后建立体内C3d水平监测的指示系统奠定基础。
- 孙盈闫敏鑫黄秀芬孔瑞丽黄金海李永清
- 关键词：重组杆状病毒蛋白表达
- 一堂兽医微生物学综合性实验课的教学实习
- 2013年
- 介绍了硕士研究生在一堂完整的兽医微生物学综合性实验教学实习中,如何准备、组织及开展实验,并对教学实习中出现的问题及所获得的经验心得进行了总结。实践证明,研究生参加本科生实验课的教学实习是一项双赢的举措,具有重要意义。
- 闫敏鑫张玉敏黄明明王婷任慧英
- 关键词：硕士研究生教学实习
- 鸡补体C3d抗血清的制备与应用
- 2015年
- 为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21(DE3)并以IPTG诱导表达。表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35ku的C3d目的蛋白。将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清。用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定血清的特异性。进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测。结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000。Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应。临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异。研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据。
- 闫敏鑫黄秀芬任慧英刘杉杉姜良李永清
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清免疫学指标
- 兽医微生物课程综合性实验的开设与思考——以葡萄球菌与链球菌的分离鉴定为例
- 2013年
- 以葡萄球菌与链球菌的分离鉴定为例,对如何设计和组织兽医微生物综合性实验,以及在实验过程中存在的问题进行了分析。
- 王婷黄明明闫敏鑫张玉敏任慧英
- 关键词：葡萄球菌链球菌
- 表达鸡补体因子C3d基因多克隆抗体的制备及应用
- 引言C3d分子是补体活化过程中C3的一个最小裂解片段,可以与B细胞表面受体CR2/CD21结合,各项研究已经证实其免疫佐剂的功能[1,3],但对于鸡C3d蛋白结构及其单体对机体免疫系统的影响仍缺少研究。本研究通过构建原核...
- 闫敏鑫刘杉杉黄秀芬陈小玲李永清
- 紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖的研究被引量：2
- 2014年
- 为研究紫玉米花色苷(purple corn anthocynins,PCA)的抗病毒效果,本试验先通过观察细胞病变效应测定了PCA对牛肾细胞传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定PCA的安全浓度范围;然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测了安全浓度范围内的PCA对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中复制的影响。PCA毒性试验结果显示,PCA对MDBK细胞的最大安全浓度为262.14μg/mL;而最小浓度为7.8125μg/mL的PCA就能对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中的复制有明显抑制作用。MTT试验结果显示,PCA对MDBK细胞的半数抑制浓度(TC50)为262.14μg/mL,对病毒的半数抑制浓度(IC50)为11.38μg/mL,以此计算出治疗指数(TI)为23.04。由此证明PCA具有良好的抗牛传染性鼻气管炎病毒的作用,提示紫玉米可作为防制奶牛传染性鼻气管炎的饲料原料。
- 姜良黄秀芬刘杉杉闫敏鑫赵晓燕张林波李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒病毒复制
- 火鸡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 针对火鸡疱疹病毒(HVT)特异性的sorf1区基因序列设计引物,建立检测HVT的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行检测。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r2=0.99),熔解曲线分析显示该PCR扩增具有良好的特异性、敏感性和重复性,试验表明该方法最低检测浓度为7×101拷贝/μL。利用该方法对野生型HVT和rHVT-pmpD-N在体内和体外的复制特性进行检测,结果表明重组后的HVT与野生型HVT的增殖速度基本一致。本试验建立的检测方法能够快速检测HVT,准确率高,特异性好,具有较高的灵敏度和稳定性,为监测HVT体内和体外的病毒含量和复制情况提供了一种有效的手段。
- 刘杉杉孙伟闫敏鑫黄秀芬姜良何诚李永清
- 关键词：火鸡疱疹病毒SYBR实时荧光定量PCR
