李永清
- 作品数：117 被引量：289H指数：9
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市农林科学院科技创新能力建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 肉种鸡禽流感免疫程序的确定及其商品代母源抗体的动态观察
- 禽流感(AvianInfluenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合症,为国际兽医局确定的A类烈性传染病.是影响肉种鸡的主要传染病之一.故对禽流感的防治进行研究非常必要.而免疫接种是禽...
- 李永清
- 关键词：禽流感血凝抑制母源抗体肉种鸡
- 文献传递
- 基于表面等离子共振技术鉴定鸡补体受体2与其配体chC3 d的亲和力
- 2023年
- 鸡补体受体2(Chicken complement receptor 2,chCR2)是一种表达于鸡B淋巴细胞表面的跨膜蛋白,chCR2可以与其生理学配体鸡补体组分3 d(Chicken complement component 3 d,chC3 d)相互作用。目前评估受体与配体亲和力的方法主要有表面等离子共振技术(Surface plasmon resonance,SPR)和生物膜干涉技术(Biolayer interferometry,BLI)等。旨在利用表面等离子共振技术鉴定chCR2受体分子与其配体chC3 d分子的亲和力。成功构建了重组真核表达载体pTT5-chCR2和pTT5-chC3 d;利用HEK 293F表达系统表达了His-chCR2和His-chC3 d蛋白;利用NI柱纯化系统纯化了His-chCR2和His-chC3 d蛋白;利用表面等离子共振技术,通过分析chCR2与chC3 d结合的动力学参数得出两者之间的平衡解离常数KD为1.37μmol/L。结果表明chCR2与其配体chC3 d之间的亲和力较高。
- 靳换杨芊芊王聪涂敏赵蕾澎湃王海良孟昭英李永清章振华
- 关键词：相互作用
- 牛源多杀性巴氏杆菌主要荚膜群和脂多糖基因型两组三重PCR检测方法被引量：2
- 2022年
- 为掌握国内牛源多杀性巴氏杆菌流行的主要荚膜群及脂多糖基因型,建立了检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其A、B荚膜群的三重PCR(PmAB-3PCR)以及检测3个脂多糖基因型的三重PCR(LPS-3PCR)方法,检验了其特异性和敏感性,用感染Pm小鼠的组织和人工污染Pm的牛鼻拭子样品进行了临床模拟检验,并对30株P m进行了PCR检测和传统血清学分型比较。结果显示:PmAB-3PCR特异性好,PmAB-3PCR和LPS-3PCR的DNA检测限分别为10~100 pg和1 ng,二者对菌液的检测限分别为200~2000 CFU和2000~20000 CFU。模拟临床样品PmAB-3PCR检测结果与细菌分离结果100%一致。PmAB-3PCR与琼扩试验的符合率为84%,二者检出的阳性率分别为88%和72%,差异不显著(P>0.05);LPS-3PCR与琼扩试验的符合率为60%,检出的阳性率分别为90%和50%,差异显著(P<0.05)。结果表明,建立的两组三重PCR方法准确高效且重复性好,可取代常规血清学方法用于国内牛巴氏杆菌病的诊断、流调和疫苗株筛选。
- 李霄阳许建刘文晓章振华徐福洲陈小玲李永清
- 关键词：三重PCR琼脂扩散试验
- 沙门氏菌鞭毛佐剂禽流感灭活疫苗可诱导良好免疫保护
- 本研究利用物理纯化的沙门氏菌鞭毛作为黏膜疫苗佐剂，包裹经灭活的禽流感病毒(H9N2亚型)抗原，以此制备禽流感(H9N2亚型)灭活疫苗，然后通过免疫保护试验测定了此疫苗的保护效果。攻毒保护试验结果表明，经肌肉注射免疫的鞭毛...
- 黄秀芬章振华孙惠铃孙盈陈小铃李永清
- 关键词：禽流感病毒灭活疫苗免疫保护
- 文献传递
- 沙门氏菌fimY基因的原核表达及禽沙门氏菌抗体检测ELISA研究被引量：4
- 2012年
- 为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建立了间接ELISA(fimY-ELISA)。通过检验已知沙门氏菌鸡源血清、相关非沙门氏菌鸡源血清对fimY-ELISA进行评价,发现其在敏感性方面高于快速平板凝集试验(RPA)和自制的脂多糖抗原ELISA(LPS-ELISA)、肠炎沙门氏菌抗原ELISA(SE-ELISA),但在特异性方面不如LPS抗原ELISA;在与RPA的符合率方面与LPS-ELISA、SE-ELISA基本一致。
- 陈小玲李永清孙慧玲徐福洲章振华杨兵
- 关键词：ELISA特异性
- 禽大肠杆菌病防制研究进展被引量：41
- 2000年
- 李永清甘孟侯
- 关键词：大肠杆菌病家禽
- 牛疱疹病毒1型gE蛋白胞外区基因的杆状病毒表达及其表达产物的免疫反应性被引量：4
- 2014年
- 为获得具有生物学活性的牛疱疹病毒1型(BHV 1)囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV 1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.7kb的gE基因,再将1 176bp的gE胞外区基因片段克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-LIC-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE。将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE。将该重组杆粒的DNA转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒。Western-blot分析及间接免疫荧光试验(IFA)的结果显示,重组杆状病毒在Sf9中表达了分子质量大小约为43ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与小鼠抗His标签单克隆抗体和小鼠抗BHV 1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性。本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定了基础。
- 姜良黄秀芬王天坤刘杉杉李永清
- 关键词：GE基因胞外区杆状病毒表达
- 鸡肾型传染性支气管炎病毒适应于鸡胚肾细胞的研究被引量：2
- 2002年
- 将经过系统鉴定的 2株鸡肾型传染性支气管炎病毒 (NIBV)在鸡胚肾细胞上盲传 7代后 ,均可不同程度的产生特征性细胞病变效应 (CPE) ,表现为细胞膜界限消失及多核巨细胞的形成 ,并通过间接免疫荧光抗体染色法 ,免疫复合物电镜观察及姬姆萨染色法对 CEK适应毒进行鉴定 ,结果表明 2株 NIBV鸡胚适应毒经多次传代后均适应于
- 姚四新陈永跃刘保国李永清刘尚高
- 关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒细胞膜
- 牛传染性鼻气管炎病毒致病机制研究进展被引量：12
- 2017年
- 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)主要引起牛的呼吸道、生殖道等炎症反应,也可以引起呼吸困难及流产。IBRV的致病机制尚不清楚,目前发现IBRV的非结构蛋白和结构糖蛋白与病毒毒力相关,不但影响病毒的复制及对宿主细胞的感染,同时也与病毒的免疫逃逸密切相关。除此之外,IBRV通过诱导宿主细胞凋亡造成持续性感染及激活炎症复合体诱导严重的炎症反应,造成宿主广泛病理反应的发生。因此,探索IBRV毒力蛋白结构功能、IBRV感染诱导的细胞凋亡及宿主炎性复合体激活的分子机制,将成为未来IBRV研究的热点。
- 许健沈俊俊黄秀芬李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒细胞凋亡
- 表达传染性法氏囊(IBDV)VP2基因的重组马立克氏病病毒的构建
- 本试验首先用PCR方法扩增出传染性法氏囊(IBDV)株VP2基因,将其克隆到T载体上,并进行了序列的分析.然后将其亚克隆到真核表达载体pcDNA<'TM>4/His/LacZ中,并将该真核表达载体上的CMV启动子和增强子...
- 周雪媚李永清霍惠玲陈晓玲张培君佘锐萍
- 关键词：传染性法氏囊VP2基因免疫应答
- 文献传递
